皮膚惡性黑色素瘤血清IL-17、VEGF 表達及與MVD的相關性研究

段文超 馬禹昕 王亞玲 孟祥慧

1牡丹江醫學院臨床醫學系 157000；2牡丹江醫學院附屬紅旗醫院皮膚科 157000

通信作者：孟祥慧，Email：xianghui777@163.com

皮膚惡性黑色素瘤是由表皮基底部黑色素細胞惡變形成，是一種具有高侵襲性的高度惡性腫瘤，因其外形與黑色素痣相似，早期不易被發現，隨著病情進展至中晚期，疾病易發生轉移，增加治療難度，復發率高，預后差［1-2］。炎性反應和腫瘤血管生成在腫瘤的發生、進展、轉移、侵襲中具有重要作用。白介素-17（interleukin-17，IL-17）具有強大的促炎癥反應功能，能夠介導維持炎癥反應，參與腫瘤微環境的構成，與腫瘤發生、進展關系密切［3］。血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是內皮細胞特異性分裂原和血管滲透因子，貫穿于血管生成的整個過程，其能夠作用于血管內皮細胞，經結合血管內皮生長因子受體促進內皮細胞遷移、增殖，在對重實體瘤中呈高表達，并與腫瘤的浸潤轉移、血管密度、臨床預后關系密切［4-5］。本研究分析皮膚惡性黑色素瘤血清IL-17、VEGF 表達及與腫瘤組織微血管密度（microvessel density，MVD）的相關性，為臨床治療提供新的思路，信息如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇于2017 年1 月至2020 年5 月擬在本院行手術治療的90 例皮膚惡性黑色素瘤患者為觀察組，男56 例，女34 例；年齡范圍41～68 歲，年齡（58.65±4.26）歲；TNM 分期：Ⅳa 期64 例，Ⅳb 期26 例。選擇同期就診本院的90 例普通色素痣患者為對照組，男53 例，女37 例；年齡范圍40～70 歲，年齡（57.48±4.15）歲。兩組一般資料相比差異均無統計學意義（均P＞0.05）。本研究經醫學倫理委員會審核批準。

1.2 入選標準 （1）納入標準：皮膚惡性黑色素瘤符合《皮膚性病學》［6］中相關診斷標準，經病理檢查確診；對照組僅為單純普通色素痣；入組前未接受激光、藥物、放射等治療；自愿加入本次研究，簽署知情同意書。（2）排除標準：肝腎等重要臟器嚴重不全；自身免疫性疾病；精神疾患；血液系統疾病；凝血功能異常。

1.3 方法 （1）IL-17、VEGF 檢測。分別采集兩組患者空腹靜脈血5 ml，離心10 min，3 000 r/min，獲取上清液，使用酶聯免疫吸附試驗法（ELISA）測定血清IL-17、VEGF，儀器為680 型酶標儀（美國伯樂公司），試劑盒購自上海廣銳生物科技有限公司。（2）MVD。觀察組術中取腫瘤活檢組織和周圍正常組織，福爾馬林固定，石蠟包埋，連續切片，切片厚度為4 μm，HE 染色，使用免疫組化法檢測，上海長島生物技術有限公司的CIY 34 單克隆抗體染色，以棕黃色或棕色染色為陽性細胞。用Weidner 法計數微血管密度，即40 倍低倍鏡下觀察腫瘤組織邊緣間質血管密度最大區域，200倍高倍鏡下計數4個視野，取最大值即為MVD。

1.4 觀察指標 （1）對比兩組血清IL-17、VEGF 表達差異。（2）分析觀察組中血清IL-17、VEGF 表達與MVD 的相關性。

1.5 統計學方法 應用SPSS21.0 軟件分析數據，用均數±標準差（±s）表示計量資料，用t檢驗；以n（%）表示計數資料，用χ2檢驗，相關性分析用Pearson 分析，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清IL-17、VEGF 比較 觀察組IL-17、VEGF 水平高于對照組，差異均有統計學意義（均P＜0.001），見表1。

表1 兩組血清IL-17、VEGF比較（ ± s，pg/ml）

表1 兩組血清IL-17、VEGF比較（ ± s，pg/ml）

組別對照組觀察組t值P值例數90 90 IL-17 17.40±5.58 118.75±25.96 36.210＜0.001 VEGF 168.21±30.69 470.37±37.95 58.733＜0.001

2.2 觀察組中血清IL-17、VEGF 表達與MVD 的相關性 皮膚惡性黑色素瘤組織中MVD 計數為（36.72±6.45），高于正常組織的（2.88±0.57），差異有統計學意義（t＝49.580，P＜0.001）。皮膚惡性黑色素瘤血清IL-17、VEGF表達與MVD計數呈正相關（均P＜0.05），見表2。

表2 觀察組中血清IL-17、VEGF表達與MVD的相關性

3 討論

皮膚惡性黑色素瘤起源于是神經嵴黑色素細胞，早期在原發灶周圍呈放射狀生長，中晚期與皮層方向垂直呈浸潤性生長，一旦侵犯周圍淋巴管或血管，易誘發淋巴道、血道轉移［7］。皮膚惡性黑色素瘤早期主要臨床表現為痣發生惡性變化或色素斑點，如短時間內出現破潰、增大、顏色改變等，發生率約占惡性黑色素瘤的90%，具有惡性程度高、復發轉移率高、預后差等特點，死亡率和惡性程度位居皮膚惡性腫瘤首位［8-9］。腫瘤血管生成是腫瘤發生、進展的重要環節，其能經誘發宿主微血管生成，建立血管出芽方式和擴大腫瘤自身微血管網，為腫瘤生長提供氧氣、營養。

VEGF是由腫瘤細胞、內皮細胞和巨噬細胞等合成的多功能糖蛋白，能夠作用于血管內皮表面的VEGF 受體，使其發生酪氨酸殘基磷酸化、二聚體化、抗凋亡、激活與促有絲分裂等發揮作用［10-11］。VEGF 能刺激血管內皮細胞移行和增殖，使血管內皮細胞有絲分裂增加，促進血管內皮細胞遷移，增加血管通透性和重塑細胞外機制，促進病理性血管生成［12-13］。本研究中，觀察組VEGF 水平高于對照組，提示VEGF 參與皮膚惡性黑色素瘤發生。VEGF 能通過以下幾點作用機制發揮促進腫瘤血管生成作用：①誘發內皮細胞分泌多種蛋白酶及其組織因子，對細胞外基質降解，介導內皮細胞遷移，促進新生血管形成；②內皮細胞表達整合素-1 及其配體，對內皮細胞轉移、浸潤起到介導作用。VEGF 能夠經與其酪氨酸激酶VEGFR-2（Flk-1/KDR）和VEGFR-1（Flt-1）受體相互作用，增加微血管滲透性，促進血管內皮細胞分裂、游走，與腫瘤生長、轉移或浸潤關系密切。

IL-17屬于促炎因子，具有較強的促血管生成因子和誘導促炎因子能力，能通過作用于成纖維細胞和內皮細胞促進血管生成發揮促進腫瘤生長作用。本研究中，觀察組IL-17 水平高于對照組，提示皮膚惡性黑色素瘤血清IL-17呈高表達。本研究結果顯示，皮膚惡性黑色素瘤血清IL-17、VEGF 表達與MVD 計數呈正相關，提示IL-17、VEGF在腫瘤血管生成中起到重要作用。IL-17能促進間質細胞、纖維細胞和腫瘤細胞分泌PGE2、VEGF 等促血管生成因子和高表達細胞間粘附分子，經IL-17-VEGF 通路，刺激轉化生長因子（TGF）-β 等促血管生成因子產生，促進腫瘤血管生成［14-15］。IL-17 能通過結合腫瘤細胞表面受體，上調VEGF 表達，誘發炎性因子表達，使腫瘤炎性反應進一步加重，或促進腫瘤發生、進展。

綜上所述，皮膚惡性黑色素瘤血清IL-17、VEGF呈高表達，水平高低與MVD呈正相關，參與腫瘤血管生成。

利益沖突：作者已申明文章無相關利益沖突。