酪酸梭菌對非酒精性脂肪性肝病的療效及對腸屏障的影響*

顏美珠，安 敏，倪倩雯，黃繼英，唐 鄂，沈曼茹，高振軍

復旦大學醫學院附屬中山醫院青浦分院消化科，上海 201700

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是最常見的肝病之一，疾病譜包括非酒精性單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化和肝癌。全球成人的發病率達20%[1]，在我國發達地區發病率在15%左右。流行病學數據顯示，NAFLD的發病率不斷上升，且呈現低齡化的趨勢[2]，其中10%～15%的患者最終發展為肝硬化，甚至肝癌[3]。因此，有效預防和治療NAFLD越來越受到臨床的重視。NAFLD的發病機制復雜，尚不完全清楚。NAFLD常伴有肥胖、胰島素抵抗，但不是所有肥胖人群都有NAFLD，目前認為腸道因素在NAFLD發生、發展中起重要作用[4]。研究發現，腸屏障功能障礙包括腸黏膜完整性受損、腸黏膜通透性增加、腸道菌群紊亂等，會使內毒素進入門脈系統增加，促進炎癥介質釋放，導致肝臟的氧化應激和炎癥損傷，在NAFLD的發病中起重要作用[5-6]。因此，調節腸道菌群，改善腸屏障功能可作為NAFLD的治療方向，但是目前關于益生菌改善NAFLD患者腸屏障功能的臨床研究少見，因此，本研究通過比較采用酪酸梭菌治療前后NAFLD患者肝功能、血脂、炎性反應及腸屏障功能指標的變化，評價酪酸梭菌對腸黏膜的保護作用及對NAFLD的治療效果。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2019年8-12月在本院消化科門診就診的NAFLD患者100例納入NAFLD組，其中男61例，女39例；平均年齡(58.7±13.2)歲。選擇同期年齡、性別匹配的健康體檢者50例納入對照組，其中男30例，女20例；平均年齡(55.6±12.8)歲。NAFLD組納入標準：(1)診斷符合2010年中華醫學會修訂的《非酒精性脂肪性肝病診療指南》中的標準；(2)年齡≤75歲；(3)用藥前血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)升高，但小于正常值上限3倍。排除標準：(1)合并其他肝臟疾病；(2)全身感染或心、腦、腎等重要臟器嚴重功能不全；(3)其他原因導致的肝硬化；(4)精神疾病；(5)對本研究藥物有過敏史；(6)妊娠期、哺乳期女性；(7)病歷資料不全；(8)合并其他慢性疾病，需服用其他藥物治療。

1.2方法

1.2.1分組給藥 將NAFLD組患者按照隨機數字表法分為A組與B組，每組50例，兩組均予以低脂飲食+有氧運動+雙環醇1粒 tid po(國藥準字：H20040467，北京協和藥廠)。A組在此基礎上，予以酪酸梭菌2粒 tid po(國藥準字：S20040054，重慶泰平藥業有限公司)。所有患者均連續治療1個月。

1.2.2檢測指標 (1)腸屏障功能指標：對照組于體檢當日，NAFLD患者于藥物干預前后檢測血清內毒素、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸水平。采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測內毒素，化學比色法檢測DAO、D-乳酸，所有操作嚴格按照試劑盒說明書進行。(2)生化指標：所有患者藥物干預前后均禁食8 h后檢測空腹血糖(FBG)、血脂[三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)]、肝功能指標(ALT)、炎性反應指標[白細胞介素(IL)-6、腫瘤壞死因子α(TNF-α)]。所有操作均采用日立 7600全自動生化分析儀進行。(3)B超：由B超專科主治醫師進行肝膽B超檢查，采用PHLIPS EnVisor C 彩色超聲儀，探頭頻率為3.5 MHz。

1.2.3療效評價 顯效：患者的臨床癥狀消失，血清肝功能指標降低超過50%，B超檢查肝臟回聲正常，體質量指數(BMI)降低至25 kg/m2以下；有效：患者的臨床癥狀有所減輕，血清肝功能指標降低范圍為10%～50%，B超檢查肝臟遠場回聲增強，近場回聲減弱，BMI有所降低但未達到25 kg/m2以下；無效：未達上述標準。總有效率=(顯效例數+有效例數)/總例數×100%。

1.2.4觀察指標 比較NAFLD組與對照組腸屏障功能指標。腸屏障功能指標中出現1項及以上異常時則判定為腸屏障功能障礙，將NAFLD組根據ALT值分為ALT升高組和ALT正常組，比較兩組腸屏障功能障礙發生率及炎性反應指標水平。比較用藥前后A組與B組腸屏障功能指標、血脂、炎性反應指標水平及總有效率。

2 結 果

2.1NAFLD組與對照組腸屏障功能指標比較 NAFLD組的血清內毒素、DAO、D-乳酸水平分別為(0.86±0.14)U/L、(9.15±1.64)U/L、(25.46±6.78)mg/L，明顯高于對照組的(0.43±0.15)U/L、(5.57±1.46)U/L、(13.42±4.18)mg/L，差異有統計學意義(P<0.05) 。

2.2ALT升高組和ALT正常組腸屏障功能障礙發生率及炎性反應指標比較 ALT升高組71例，ALT正常組29例，ALT升高組有51例(72%)出現腸屏障功能障礙，ALT正常組有5例(17%)出現腸屏障功能障礙，差異有統計學意義(P<0.05)。ALT升高組的TNF-α水平為(28.9±8.6)pg/mL，IL-6水平為(11.48±2.8)pg/mL，明顯高于ALT正常組的(11.48±2.82)、(7.31±1.77)pg/mL，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.3用藥前后A組與B組各項指標比較

2.3.1用藥前后A組與B組腸屏障功能指標比較 用藥前兩組的內毒素、D-乳酸、DAO水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。用藥后兩組內毒素、D-乳酸、DAO水平均較用藥前下降，A組下降比B組更明顯，差異統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 用藥前后A組與B組腸屏障功能指標比較

2.3.2用藥前后A組與B組血脂及炎性反應指標比較 用藥前兩組血脂及炎性反應指標比較，差異無統計學意義(P>0.05)。用藥后B組TG水平較用藥前明顯下降，差異有統計學意義(P<0.05)，TC水平有所下降，但與用藥前比較，差異無統計學意義(P>0.05)。 A組TG、TC水平均較用藥前明顯降低，差異有統計學意義(P<0.05)；A組用藥后TG與TC水平比B組下降更明顯，差異有統計學意義(P<0.05)。用藥后兩組TNF-α、IL-6水平較用藥前均明顯下降，A組下降比B組更明顯，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 用藥前后A組與B組血脂及炎性反應指標比較

2.3.3A組與B組療效比較 經過1個月的用藥后，A組的總有效率為86.0%，B組為70.0%，A組明顯高于B組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 A組與B組療效比較

3 討 論

目前研究認為，腸屏障功能障礙是NAFLD常見的表現之一，是NAFLD發生、發展的重要因素。腸屏障是由完整的腸上皮細胞和相鄰腸上皮細胞間的連接構成，能防止腸腔內的有害物質，如細菌、毒素等穿過腸黏膜進入體內，腸上皮細胞間的緊密連接是保持腸屏障功能的結構基礎[7]。動物實驗發現，脂肪肝小鼠的腸黏膜連接蛋白Occludin、Claudin-1、ZO-1mRNA表達下降[8-10]，腸黏膜通透性增加，大量內毒素通過腸-肝軸進入體循環，從而誘導釋放TNF-α等炎癥介質，引發炎性瀑布反應，促進NAFLD的發生、發展。目前，臨床上通過檢測某些物質的腸黏膜通透性來間接反映腸屏障功能，其中血清D-乳酸、DAO和內毒素水平是應用較多的血液學指標，通過這些指標可以間接反映腸黏膜完整性，有助于發現腸黏膜的早期損傷[11]。本研究對100例NAFLD患者和50例健康體檢者進行腸屏障功能指標檢測，結果表明NAFLD組血清D-乳酸、DAO、內毒素水平均明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，提示NAFLD患者存在腸屏障功能受損，腸黏膜通透性明顯增加，證實腸屏障功能障礙是NAFLD的致病機制之一。進一步對數據進行分析發現，存在ALT水平升高的患者更容易出現腸屏障功能障礙，提示腸屏障受損隨肝臟病變程度增加而加重，內毒素、DAO等腸屏障功能指標可作為臨床評估肝臟病變嚴重程度的監測指標。由此推測，出現肝功能損傷的NAFLD患者炎癥因子分泌增加，影響膽汁正常分泌，從而導致腸道內環境改變，誘發腸道菌群改變，加重腸屏障功能受損，而大量內毒素等有害物質通過腸上皮屏障進入肝臟，肝細胞損傷進一步加重。

有基礎研究顯示，補充腸道益生菌可以通過改善高脂飲食小鼠的腸道菌群，有效修復腸屏障功能，改善肝功能[12-13]。既往的研究也發現，酪酸梭菌可抑制腸道的高敏感性，降低腸黏膜通透性，恢復腸屏障功能[14]。 本研究結果顯示，A組和B組給藥1個月后內毒素、DAO、D-乳酸水平均下降，且A組與B組比較，差異有統計學意義(P<0.05)，證實酪酸梭菌有助于修復腸屏障功能，減少內毒素等入血，從而減少炎性反應指標激活，改善肝功能。本研究結果顯示，用藥后A組與B組的炎性反應指標TNF-α、IL-6水平均較用藥前下降，A組比B組下降更明顯，差異有統計學意義(P<0.05)，提示采用酪酸梭菌治療可降低炎癥因子水平，抑制炎性反應，維持腸道黏膜的穩定性，改善肝臟炎性反應，其調控炎癥因子的機制還需進一步研究探討。A組用藥后復查TG、TC水平分別為(1.5±0.2)、(5.4±0.6)mmol/L，低于B組的(1.9±0.6)、(5.8±0.6)mmol/L，考慮酪酸梭菌有助于血脂代謝，既往也有研究證實益生菌有助于降低TC和TG水平[15]，與本文研究結果一致。本研究還發現，A組的總有效率為86.0%，B組的總有效率為70.0%，說明酪酸梭菌聯合常規治療的效果更佳。

本研究結果提示，常規治療聯合酪酸梭菌口服對NAFLD的治療效果更佳，通過調節腸道菌群改善腸道微生態，改善腸屏障功能，從而減輕體內炎性反應，改善肝功能。而且酪酸梭菌不需要冷藏，常溫保存即可，所有入組患者均無明顯不良反應，值得臨床進一步應用。

綜上所述，腸屏障受損是NAFLD的發病機制之一，且肝臟病變程度與腸屏障功能障礙有關。聯合酪酸梭菌治療NAFLD的效果優于傳統保肝治療，其機制主要與修復腸黏膜，減少炎癥因子等有關。腸屏障功能指標可作為NAFLD的臨床監測、隨訪指標。