西門塔爾犢牛腹瀉病例的病原分離及鑒定

黃海波，莫 巖，張智剛

（1.大慶市興牧科技有限公司，黑龍江 大慶 163319；2.黑龍江省和平牧場有限公司農業發展部，黑龍江 大慶 163851；3.肇東市動物疫病預防控制中心，黑龍江 肇東 151100）

腹瀉是近年來規模化牛場犢牛的常見疾病，主要由傳染病、寄生蟲和中毒等引起，特別是在冬春季節變換，氣溫驟變時發病率升高。幼齡犢牛感染大腸桿菌的主要臨床癥狀是發生腹瀉，而成年牛主要以乳腺炎等局部感染為主，嚴重的會引發全身感染形成敗血癥導致死亡。大腸桿菌屬于腸桿菌科、埃希菌屬，是革蘭陰性無芽孢桿菌，菌體形狀呈橢圓形，周身有鞭毛存在，可運動，也有的有菌毛，大多數菌株無莢膜。過去大腸桿菌常被認為是人和動物體內腸道的正常菌群，屬于非致病菌，但越來越多的研究證實一些血清型的大腸桿菌是存在致病性的。大腸桿菌在動物和人類出生后幾小時便可經各種渠道進入機體進行大量増殖，伴隨人類和動物終生。研究表明致病性大腸桿菌是人畜共患性細菌，在給人類健康造成巨大威脅的同時，還給養殖業帶來很大的經濟損失。

1 發病情況

2021年3月13日，接到大慶地區某養殖戶所送病料。養殖戶存欄20頭左右西門塔爾犢牛。犢牛出現持續性發病，出現腹痛、腹瀉、消瘦、毛粗亂無光并帶有精神沉郁等臨床癥狀，據畜主介紹近期剛引進的斷奶犢牛沒有進行相應的疫苗接種，并且養殖牛群密度較大，且飲用未經消毒的自來水進行飼喂。牛群近10d發病，送檢病料前死亡7頭，發病養殖場附近無相似病例。發現疾病時，獸醫進行了相應治療。根據臨床診斷和流行病學調查，初步診斷為牛大腸桿菌感染。發病原因主要是飲用大腸桿菌污染的自來水。

2 臨床癥狀

患牛初期除出現食欲減退，長臥不起和排出少量稀便外無其他明顯癥狀。隨著病情的發展，出現嚴重腹瀉且腹痛不安，共濟失調、不斷努責排出黃白色稀樣便。體溫升高，脈搏虛弱、呼吸困難迅速進入昏迷狀態并虛脫死亡。

3 實驗室診斷

3.1細菌分離培養 無菌采取死亡犢牛的小腸，在超凈工作臺取腸內容物及糞便進行平板劃線，接種于營養瓊脂培養基中，37℃培養18～24h。觀察菌落的形態，挑取單個菌落劃線接種于營養瓊脂培養基，純化后的菌落劃線接種與伊紅美藍和麥康凱鑒別培養基。37℃培養18～24h。將分離的菌株進行革蘭染色鏡檢，結果顯示為革蘭氏陰性桿菌；在伊紅美藍培養基上形成黑色并帶有金屬光澤的菌落；在麥康凱培養基上可見光滑粉紅色中等大小的菌落。

3.2 細菌16s rRNA的PCR鑒定選擇細菌16s rRNA通用引物，用純化培養的菌液提取DNA做模版，PCR擴增后將產物進行1%瓊脂糖凝膠電泳和照相。結果表明，擴增出大小約為1384 bp目的片段，與預期擴增片段相符。

3.3 藥敏試驗吸取100μL菌液放置于營養瓊脂上，隨后用滅菌過的L棒將菌液均勻的涂布，觀察營養平板的吸收情況，待菌液吸收完全后，在營養瓊脂平板中貼上新生霉素、大觀霉素、氯霉素、多粘菌素、氨曲南、多鏈霉素、環丙沙星、頭孢他啶、甲氧嘧啶、四環素、慶大霉素、林可霉素等藥敏片，37℃培養18～24h。結果顯示大部分藥物對該分離株都顯示出耐藥性，只有多鏈霉素和氨曲南中度敏感。

4 綜合防治措施

（1）對牛舍進行徹底清掃和消毒，死亡犢牛進行無害化處理。（2）加強飼養管理，注意環境衛生和防止水質污染，切斷病原傳播途徑，強化防疫衛生意識。注意母牛的營養均衡，增強犢牛體質。（3）通過藥敏實驗結果可知，從犢牛中分離出來的致病性大腸桿菌對多種抗生素產生耐藥。建議臨床用藥時，根據藥敏試驗結果和該養殖場的用藥歷史，選擇敏感藥物進行治療，最好選擇多種藥物聯合治療。

5 小結

該牛場犢牛腹瀉死亡,經實驗室診斷為致病性大腸桿菌感染。由于奶牛飲用了被大腸桿菌污染的自來水,致使牛群體內致病性大腸桿菌群滋生，腸道菌群紊亂，造成腹瀉，嚴重的脫水死亡。母牛應該在產前加強飼養管理，可以進行疫苗免疫；犢牛產后盡快哺喂初乳，保障犢牛的健康。