混施微生物菌劑和有機(jī)肥對(duì)‘新紅星’蘋(píng)果解袋后果實(shí)品質(zhì)的影響

劉洋洋，束懷瑞，陳 偉*

（1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東省高校食品加工技術(shù)與質(zhì)量控制重點(diǎn)試驗(yàn)室，山東 泰安 271000；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝科學(xué)與工程學(xué)院，山東 泰安 271018）

蘋(píng)果是世界性果品，由于其生態(tài)適應(yīng)性強(qiáng)、果品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、耐貯性好及供應(yīng)周期長(zhǎng)，世界上相當(dāng)多的國(guó)家都將其列為主要消費(fèi)果品而大力推薦［1］。蘋(píng)果果實(shí)含有較多易被人體吸收的游離多酚，在抗氧化、預(yù)防心腦血管疾病及抗腫瘤等方面均具有較好的作用［2］。然而我國(guó)果園土壤多數(shù)瘠薄，有機(jī)質(zhì)含量低（國(guó)外果園土壤有機(jī)質(zhì)含量在3%以上，我國(guó)多在0.5%～2%之間），果樹(shù)根系生活環(huán)境因素的穩(wěn)定性差，嚴(yán)重制約了地上部樹(shù)體正常生長(zhǎng)發(fā)育，是果實(shí)品質(zhì)差的主要原因之一。有計(jì)劃地增施有機(jī)肥是增加土壤有機(jī)質(zhì)含量的重要手段［3］。彭先云［4］研究了有機(jī)肥在農(nóng)產(chǎn)品應(yīng)用中的作用，表明了有機(jī)肥的施加不僅可以改善土壤的狀況，促進(jìn)微生物的轉(zhuǎn)化，而且能有效提高農(nóng)作物的品質(zhì)。近年來(lái)，隨著可持續(xù)農(nóng)業(yè)的發(fā)展，微生物肥料作為一種新型肥料，對(duì)保護(hù)環(huán)境、促進(jìn)“綠色和生態(tài)農(nóng)業(yè)”的發(fā)展有很大幫助，通過(guò)所含微生物的生命活動(dòng)來(lái)活化土壤中的養(yǎng)分，促進(jìn)植物養(yǎng)分吸收及植株生長(zhǎng)，提升農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)［5］，在改良土壤、抑制病菌、促進(jìn)作物生長(zhǎng)方面具有顯著作用［6］。

近年來(lái)，采前套袋技術(shù)在果業(yè)生產(chǎn)中已廣泛應(yīng)用。很多研究表明，果實(shí)套袋在改善果實(shí)外觀品質(zhì)［7］，減少病蟲(chóng)害發(fā)生的同時(shí)，對(duì)果實(shí)內(nèi)在品質(zhì)也產(chǎn)生一定影響［8-11］。Sharma等［12］發(fā)現(xiàn)蘋(píng)果套袋后果實(shí)硬度降低；Amarante等［13］研究表明‘考密斯梨’在貯藏過(guò)程中套袋果實(shí)更容易軟化；Liu等［14］研究結(jié)果也顯示，套袋能影響蘋(píng)果果實(shí)中糖、酸及其它內(nèi)含物的含量。‘新紅星’（Malus domesticaBorkh cv.Starkrimson）原產(chǎn)于美國(guó)，1952年由Bisbee發(fā)現(xiàn)，1956年正式命名［15］，其果實(shí)果面濃紅，色澤艷麗，果形高樁，五棱突出，外形美觀，香甜可口，綜合品質(zhì)極佳，推出后各國(guó)競(jìng)相引種試栽，中國(guó)從1964年引入，并逐步推廣［16］。‘新紅星’喜光照強(qiáng)、日照時(shí)間長(zhǎng)、溫差大、氣候相對(duì)干燥的環(huán)境［17-18］，果實(shí)成熟早，樹(shù)體強(qiáng)壯、直立，果枝粗壯，易形成短果枝，在山東地區(qū)種植適宜采前套袋。

以往套袋栽培的研究多集中于套袋對(duì)果皮結(jié)構(gòu)［19］、色澤變化［20］和芳香物質(zhì)的影響［21］以及套袋時(shí)期、方法［22］等方面，而解袋后隨著天數(shù)的增長(zhǎng)含微生物菌劑的有機(jī)肥對(duì)蘋(píng)果果實(shí)品質(zhì)的影響研究報(bào)道較少。故本試驗(yàn)以山東地區(qū)‘新紅星’蘋(píng)果果樹(shù)為試材，研究含微生物菌劑的有機(jī)肥對(duì)蘋(píng)果解袋后0～15 d內(nèi)果實(shí)內(nèi)在品質(zhì)、呼吸速率、乙烯釋放速率、果實(shí)細(xì)胞顯微結(jié)構(gòu)、硬脆性及關(guān)鍵酶和基因表達(dá)的影響，從而為科學(xué)有效地提高蘋(píng)果品質(zhì)及果實(shí)耐儲(chǔ)性提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)于2018年在山東省招遠(yuǎn)市金嶺鎮(zhèn)蘋(píng)果基地進(jìn)行，試驗(yàn)材料為5年生‘新紅星’蘋(píng)果樹(shù)，試驗(yàn)于2018年3月進(jìn)行，選取樹(shù)勢(shì)一致、生長(zhǎng)旺盛的果樹(shù)40棵，共設(shè)4個(gè)處理：T1，5000 g有機(jī)肥；T2，5000 g有機(jī)肥+10 g微生物菌劑，T3，10 g微生物菌劑；CK，對(duì)照。每個(gè)處理10棵果樹(shù)，施肥用量見(jiàn)表1。除了施肥種類不同，其余種植管理水平均相同。2018年3月5日將肥料均勻撒在樹(shù)盤(pán)下，2018年9月15日測(cè)定供試土壤基本理化指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)表2。2018年9月16日果實(shí)解袋，分別在解袋后第0、3、6、9、12、15 d取蘋(píng)果樣品，每次取樣時(shí)選取樹(shù)冠外圍同一高度同一部位的果實(shí)，選取大小均一、果面整潔、無(wú)病蟲(chóng)害、無(wú)機(jī)械損傷的果實(shí)，每個(gè)處理每次采摘30個(gè)蘋(píng)果，套網(wǎng)袋后裝入紙箱立即帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行測(cè)定。

表1 不同處理施肥用量

表2 土壤基本理化指標(biāo)

1.2 測(cè)定方法

1.2.1 蘋(píng)果表皮細(xì)胞形態(tài)觀察

觀察蘋(píng)果表皮細(xì)胞形態(tài)時(shí)用鑷子輕輕將蘋(píng)果赤道周?chē)谋砥に合虏⒅瞥刹Ｆ贏XIO熒光顯微鏡下觀察并拍照［23］。

1.2.2 蘋(píng)果內(nèi)在品質(zhì)測(cè)定

可溶性固形物含量用WYT手持糖量計(jì)測(cè)定；可溶性糖含量采用蒽酮法測(cè)定［24］；可滴定酸用酸堿中和滴定法測(cè)定［25］。

1.2.3 果實(shí)呼吸速率及乙烯釋放速率

用SY-1022果蔬呼吸儀測(cè)定呼吸強(qiáng)度；參考Gwanpua等［26］的測(cè)定方法，略有改動(dòng)，采用GC-9A氣相色譜儀測(cè)定乙烯含量，利用N2000色譜軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理［27］。

1.2.4 揮發(fā)性物質(zhì)測(cè)定

頂空固相萃取：將蘋(píng)果樣品洗凈，5點(diǎn)均勻取樣，稱取切碎的新鮮果實(shí)40.0 g，加入100 mL的錐形瓶中，加入內(nèi)標(biāo)物3-壬酮（0.4 mg/mL）10 μL，加蓋封口后于加熱板上平衡10 min。將萃取頭于進(jìn)樣口250℃老化20 min，取出插入平衡好的樣品瓶中進(jìn)行吸附，吸附45 min后將萃取頭插入氣相色譜質(zhì)譜進(jìn)樣口解析3 min。

氣相色譜質(zhì)譜分析條件：參照王傳增等［28］方法，利用Shimadzu GC/MS-QP2010氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀。色譜條件：色譜柱Rtx-1MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）柱；升溫程序：35℃保持2 min，以6℃/min的頻率升溫至120℃，保持1 min；以10℃/min的頻率升溫至180℃，再以20℃/min的頻率升溫至230℃，保持5 min。質(zhì)譜條件：載氣為He氣，流量1.03 mL/min，電離方式EI，電子能量70eV。離子源溫度200℃，掃描質(zhì)量范圍：45～450 amu。進(jìn)樣：不分流進(jìn)樣。

1.2.5 果實(shí)硬脆度

用TA.XT Express型質(zhì)構(gòu)儀測(cè)定蘋(píng)果硬脆度，每個(gè)處理選擇5個(gè)蘋(píng)果，每個(gè)蘋(píng)果選取赤道位置的4個(gè)點(diǎn)，結(jié)果取20個(gè)點(diǎn)的平均值。每次測(cè)定要調(diào)節(jié)參數(shù)一致，并且保持蘋(píng)果跟探頭垂直接觸［29］。

1.2.6 細(xì)胞壁酶活性及其相關(guān)基因表達(dá)量

根據(jù)Wei等［30］描述的方法稍作修改測(cè)定細(xì)胞壁酶活性；通過(guò)QRT-PCR測(cè)定參與細(xì)胞壁代謝基因的表達(dá)［30］，用快速通用植物RNA提取試劑盒3.0（北京）從果實(shí)中提取總RNA。基因特異性引物如表3，每個(gè)基因第0 d的表達(dá)水平設(shè)定為1.0。除特殊說(shuō)明，以上所有試驗(yàn)均設(shè)3次生物學(xué)重復(fù)。

表3 用于QRT-PCR擴(kuò)增細(xì)胞壁酶相關(guān)基因表達(dá)的引物

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS 20.0軟件進(jìn)行顯著性差異分析和相關(guān)性分析，并采用Origin 9.4軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘋(píng)果果皮細(xì)胞形態(tài)的變化

由圖1可以看出，果實(shí)成熟時(shí)（第15 d）CK組果實(shí)細(xì)胞排列不緊密，細(xì)胞較小不飽滿，著色差；T1組果實(shí)細(xì)胞大小較均勻，排列較緊密，著色較好；T2組果實(shí)細(xì)胞較大，細(xì)胞間空隙較小，細(xì)胞排列緊密，著色較好；T3組果實(shí)細(xì)胞偏小，細(xì)胞間隙較大，著色較好。成熟飽滿、排列緊密的細(xì)胞使T2組蘋(píng)果能夠更好保持水分，從而更好保持硬脆度，延長(zhǎng)貨架期。

2.2 不同肥料處理對(duì)蘋(píng)果內(nèi)在品質(zhì)的影響

由表4看出，果實(shí)解袋后可溶性糖和可溶性固形物含量變化趨勢(shì)基本一致，呈先上升后趨于平穩(wěn)的趨勢(shì)。T2組果實(shí)可溶性糖和可溶性固形物含量在解袋后第6～15 d均顯著高于其他組，果實(shí)成熟時(shí)（第15 d）兩者含量相對(duì)于CK組分別提高了12.86%和8.78%。

果實(shí)可滴定酸含量逐漸降低，T2組果實(shí)可滴定酸含量在3～15 d均低于其他組，果實(shí)成熟時(shí)（第15 d）其含量相對(duì)于CK組降低了11.86%。

果實(shí)糖酸比一直處于上升趨勢(shì)，其中在第9～12 d上升速率最為明顯，第12～15 d趨于平穩(wěn)，果實(shí)成熟時(shí)（第15 d），T2組果實(shí)糖酸比比CK組高出17.08%，果實(shí)風(fēng)味達(dá)到最佳。說(shuō)明添加微生物菌劑的有機(jī)肥有利于果實(shí)可溶性糖和可溶性固形物的積累，可以降低可滴定酸含量，從而提高果實(shí)糖酸比，有利于果實(shí)風(fēng)味的形成。

表4 解袋后果實(shí)內(nèi)在品質(zhì)的變化

2.3 不同肥料處理對(duì)果實(shí)呼吸速率和乙烯釋放速率的影響

由圖2A可知，果實(shí)呼吸速率在解袋后均逐漸上升，T1、T2、T3組果實(shí)在成熟過(guò)程中呼吸速率一直高于CK組。其中T1、T2組相對(duì)于CK組差異顯著，T1組在0～6 d呼吸速率顯著上升，在6～15 d上升幅度減緩，在第3、9、15 d較CK組分別高出27.4%、40.9%、18.6%。T2組在0～12 d呼吸速率顯著提高，12～15 d呼吸增幅減緩，在第3、9、15 d較CK組分別高出13.8%、35.6%、15.9%。

由圖2B可知，蘋(píng)果在解袋后果實(shí)乙烯釋放速率均呈上升趨勢(shì)，0～12 d乙烯釋放速率上升較快，12～15 d趨于穩(wěn)定。T3組果實(shí)乙烯釋放速率超過(guò)其他組，CK組果實(shí)乙烯釋放速率一直處于最低。T1、T2兩組在9～15 d差異不明顯，其中T2組在第0、6、12 d較CK組分別高出81.2%、120.4%、23.8%。說(shuō)明添加微生物菌劑的有機(jī)肥可提高果實(shí)呼吸速率和乙烯釋放速率，但是作用不明顯。

2.4 不同肥料處理對(duì)果實(shí)揮發(fā)性物質(zhì)的影響

表5 不同肥料處理對(duì)果實(shí)揮發(fā)性成分的影響

續(xù)表

由表5可知，在‘新紅星’蘋(píng)果樣品中共檢測(cè)到37種香氣物質(zhì)，酯類是蘋(píng)果香氣的重要貢獻(xiàn)者，其中主要的酯類物質(zhì)是2-甲基乙酸丁酯、乙酸己酯、2-甲基丁酸己酯、2-辛基丁酸辛酯。醇類以1-己醇為主，醛類以2-己烯醛為主，烴類中以十四烷為主。果實(shí)成熟時(shí)（第15 d），T1、T2、T3組果實(shí)香氣總含量相對(duì)于CK組分別高出8.55%、21.3%、8.2%，其中T2組果實(shí)總香氣含量明顯高于其他組，T2組酯類含量相對(duì)于CK組高出9.41%，其中丁酸丁酯、乙酸己酯、2-甲基丁酸己酯、己酸戊酯相對(duì)于CK組分別高出23.85%、21.5%、30.68%、76.43%；醇類物質(zhì)T1、T2組顯著高于CK組；T2組醛類物質(zhì)顯著低于CK組；烴類及法尼烯均高于CK組。說(shuō)明有機(jī)肥與微生物菌劑均可以提升果實(shí)中的香氣，其中添加微生物菌劑的有機(jī)肥（T2）對(duì)果實(shí)總香氣物質(zhì)的提升效果最顯著。

2.5 不同肥料處理對(duì)果實(shí)脆度的影響

‘新紅星’蘋(píng)果解袋后果實(shí)脆度均呈上升趨勢(shì)，脆度在0～9 d變化不明顯，在9～15 d變化顯著（圖3）。T2組對(duì)蘋(píng)果脆度的改善效果最好，果實(shí)成熟時(shí)（第15 d），T2組較CK、T1、T3組分別提高34.5%、20.6%、6.6%。說(shuō)明添加了微生物菌劑的有機(jī)肥（T2）對(duì)蘋(píng)果脆度改善效果最佳，提高了果實(shí)的口感。

2.6 不同肥料處理對(duì)果實(shí)硬度的影響

由圖4可知，蘋(píng)果在解袋后果實(shí)硬度呈下降趨勢(shì)，解袋后第0～6 d果實(shí)硬度變化不明顯，第6～12 d下降速度較快，第15 d時(shí)T2組較CK組高出12.8%，果實(shí)硬度仍然保持較高水平，由此可知，添加了微生物菌劑的有機(jī)肥（T2）對(duì)果實(shí)硬度的保持具有積極作用，有利于延長(zhǎng)果實(shí)貨架期。

2.7 不同肥料處理對(duì)細(xì)胞壁酶活性及相關(guān)基因表達(dá)的影響

果實(shí)硬度主要與果膠甲酯酶（PME）、多聚半乳糖醛酸酶（PG）兩種細(xì)胞壁酶有關(guān)，其酶活性與硬度呈負(fù)相關(guān)。由圖5A、B可知，各組PME、PG的活性在蘋(píng)果解袋后均呈上升趨勢(shì)，最后趨于穩(wěn)定。PME活性在解袋后第3～12 d活性增加較快，第12～15 d趨于穩(wěn)定。其中CK組果實(shí)PME活性較高，而T1、T2組PME活性較低。T1組果實(shí)在解袋后第3、9、15 d相對(duì)于CK組分別減少了7.8%、11.8%、16.8%，T2組在解袋后3、9、15 d相對(duì)于CK組分別減少了15.6%、30.2%、35.7%。PG活性在解袋后第0～9 d逐漸增加，第9～15 d趨于穩(wěn)定。其中CK組PG活性較高，T1、T2組PG活性較低。T1組果實(shí)在第3、9、15 d相對(duì)于CK組分別減少了27.3%、12.7%、14.1%，T2組在解袋后第3、9、15 d相對(duì)于CK組分別減少了21.2%、24.5%、15.3%。

由圖5C、D可以看出，MdPME相對(duì)表達(dá)量在解袋后先上升后下降，T2組果實(shí)在解袋后第3、6、12 d相對(duì)于CK組減少了38%、25.7%、19.4%；T3組果實(shí)在解袋后第3、6、12 d相對(duì)于CK組分別降低了30.4%、20.2%、11.2%。其中0～15 d CK組果實(shí)MdPG相對(duì)表達(dá)量最高，T2組最低，T2組果實(shí)在解袋后第6、12、15 d相對(duì)于CK組分別減少了15.3%、21.9%、25.4%。說(shuō)明添加微生物菌劑的有機(jī)肥（T2）可以降低果實(shí)MdPME和MdPG表達(dá)量，從而降低果實(shí)PME、PG活性，使得果實(shí)保持較高的硬度。

3 討論

科學(xué)的肥水管理是蘋(píng)果健壯生長(zhǎng)和早果豐產(chǎn)的前提條件。每年9月份施基肥，主要以有機(jī)肥為主。適量施入有機(jī)肥，不僅為果樹(shù)生長(zhǎng)提供多種營(yíng)養(yǎng)，而且還能起到改善土壤理化性狀、促進(jìn)果樹(shù)生長(zhǎng)的效果［31］。‘新紅星’蘋(píng)果對(duì)土壤肥力的要求較高，其產(chǎn)量和品質(zhì)不高，一直是生產(chǎn)中的主要限制因素，除立地條件以外，肥料的施用對(duì)紅富士產(chǎn)量和質(zhì)量影響較大。因此在施肥種類上選擇以有機(jī)肥為主，以少施微生物菌劑為輔，改善土壤結(jié)構(gòu)，提高土壤有機(jī)質(zhì)含量和增加土壤通透性，更利于微生物活動(dòng)，以發(fā)揮有機(jī)肥營(yíng)養(yǎng)成分齊全、肥效緩慢持久及改良土壤等優(yōu)點(diǎn)。增施含有微生物菌劑的有機(jī)肥，可以提供給果樹(shù)所需要的各種營(yíng)養(yǎng)元素，使土壤肥力不斷提高，對(duì)果樹(shù)的根系生長(zhǎng)和分布起到一定的促進(jìn)作用，增加果樹(shù)的吸收根量，增強(qiáng)樹(shù)體的營(yíng)養(yǎng)積累，促壯樹(shù)勢(shì)，這是果樹(shù)豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的前提和關(guān)鍵。

在當(dāng)前蘋(píng)果園密植的前提下，為加強(qiáng)地下管理，國(guó)內(nèi)外果樹(shù)工作者對(duì)蘋(píng)果果皮的解剖結(jié)構(gòu)進(jìn)行了一些研究，鄧?yán)^光等［32］報(bào)道了蘋(píng)果品種果實(shí)組織結(jié)構(gòu)的差異；果皮是果實(shí)抵御外界不良環(huán)境的天然屏障，果皮細(xì)胞的緊密性不僅與果表面光潔度具有最直接的關(guān)系，而且與果實(shí)貯藏性能密切相關(guān)［33］；宮美英［34］研究發(fā)現(xiàn)蘋(píng)果果皮結(jié)構(gòu)與耐貯性密切相關(guān)。本研究表明，添加了微生物菌劑的有機(jī)肥（T2）處理果實(shí)著色好，果皮結(jié)構(gòu)緊密，且細(xì)胞小、胞壁厚，排列緊密，并有厚角蠟層或木栓層保護(hù)，對(duì)果實(shí)有更好的保護(hù)作用，大大提高了解袋后蘋(píng)果的商品價(jià)值及耐儲(chǔ)性。

果實(shí)所積累糖的種類、含量及比率對(duì)果實(shí)風(fēng)味、色澤和其它營(yíng)養(yǎng)成分有重要影響，是決定果實(shí)品質(zhì)和商品價(jià)值的主要因素［35-36］。在果實(shí)成長(zhǎng)成熟過(guò)程中，酸含量在幼果中較高［37］，隨著果實(shí)發(fā)育，一部分酸作為呼吸底物而被消耗，一部分酸轉(zhuǎn)變?yōu)樘牵麑?shí)中糖酸比得到迅速提高，使果實(shí)風(fēng)味更加濃郁。以往的研究表明，富士系蘋(píng)果的酯類物質(zhì)，尤其是乙酸乙酯等大量酯類物質(zhì)組分的變化，與果實(shí)的風(fēng)味質(zhì)量密切相關(guān)［38］。本研究表明，在‘新紅星’蘋(píng)果解袋后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)各處理可溶性固形物、可溶性糖含量均呈上升趨勢(shì)，可滴定酸處于下降趨勢(shì)，在第12～15 d糖酸比值達(dá)到最大，其中添加了微生物菌劑的有機(jī)肥（T2）處理對(duì)提升果實(shí)糖酸比效果最明顯，可能是微生物菌劑中微生物的活動(dòng)促進(jìn)了有機(jī)肥中養(yǎng)分的分解，使土壤中堿解氮、有效磷、速效鉀等已被植株吸收的養(yǎng)分含量增加，從而對(duì)果實(shí)糖酸比的提升起到關(guān)鍵性作用。

有研究表明蘋(píng)果果實(shí)是一種呼吸躍變型果實(shí)，其成熟的特征是乙烯釋放速率和呼吸速率呈指數(shù)增長(zhǎng)［39］，乙烯在蘋(píng)果果實(shí)成熟過(guò)程中起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用，例如揮發(fā)性物質(zhì)合成［40］和花青素積累［41］。據(jù)報(bào)道［42-43］，構(gòu)成蘋(píng)果香氣的化合物達(dá)250種以上，分別為碳水化合物、酯類、醇類、烴類、醛類及環(huán)氧化合物，其中對(duì)蘋(píng)果芳香起主要作用的是前3類物質(zhì)。研究認(rèn)為［44-45］有20～40種揮發(fā)性成分直接與蘋(píng)果香氣特征產(chǎn)生相關(guān)，如乙酸丁酯、丁酸丁酯、乙酸己酯、2-甲基丁酸丁酯、2-甲基丁酸己酯以及乙基、丙基的丁酸酯類。本研究結(jié)果表明，果實(shí)解袋后，隨著果實(shí)的成熟，果實(shí)呼吸速率及乙烯釋放率都處于上升趨勢(shì)，通過(guò)對(duì)果實(shí)香氣的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)酯類總和T2＞T1＞T3＞CK，添加了微生物菌劑的有機(jī)肥（T2）處理酯類總量最高，有機(jī)肥（T1）其次，可能是果實(shí)成熟過(guò)程中添加了微生物菌劑的有機(jī)肥為果實(shí)提供了更多微量元素，對(duì)果實(shí)成熟過(guò)程中酯類化合物的積累起到了關(guān)鍵作用。

蘋(píng)果在成熟期間，硬度逐漸降低，而脆度逐漸升高，期間發(fā)生許多生理和生化變化，是影響果實(shí)保質(zhì)期和商業(yè)價(jià)值的決定性因素［46］。果實(shí)硬脆度是多種細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化的結(jié)果，主要是細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的改變。細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和組成的變化及細(xì)胞壁修飾酶的作用是蘋(píng)果成熟期間硬度下降的主要原因［46-48］。細(xì)胞壁酶在細(xì)胞壁分解的過(guò)程中起主要作用，減少細(xì)胞間緊密程度，在果實(shí)發(fā)育的不同階段發(fā)揮不同作用［49-50］。PME、PG是作用于細(xì)胞壁果膠部分的兩種主要酶，Phan等［51］研究表明成熟期間PME活性降低，果實(shí)能保持較好的硬度。本研究表明，不同施肥處理對(duì)PME活性及MdPME表達(dá)量的影響明顯不同。相對(duì)于CK組，T1、T2組顯著降低了PME活性及其基因表達(dá)量，其中T2處理效果更顯著。還有研究表明硅酸鈉通過(guò)抑制PG的活性來(lái)延緩蘋(píng)果果實(shí)的軟化［52］。PG是另一種細(xì)胞壁修飾酶。它將果膠酸與多聚半乳糖醛酸的主鏈一起水解，導(dǎo)致果膠降解，細(xì)胞壁溶解，最終果實(shí)軟化［53］。本研究表明PG及其基因表達(dá)量在解袋后第0～12 d處于上升趨勢(shì)，第12～15 d趨于平穩(wěn)，其中T2組效果較明顯。說(shuō)明添加微生物菌劑的有機(jī)肥（T2）可以降低果實(shí)MdPME和MdPG表達(dá)量，從而降低果實(shí)PME、PG活性，使得果實(shí)保持較高的硬度，有利于提高果實(shí)的保質(zhì)期及其商業(yè)價(jià)值。

4 結(jié)論

本研究表明，添加了微生物菌劑的有機(jī)肥處理可以顯著提高解袋后蘋(píng)果果實(shí)內(nèi)在品質(zhì)，使果皮細(xì)胞排列整齊緊密，減少果實(shí)呼吸速率及乙烯釋放速率、提高果實(shí)硬脆度、降低細(xì)胞壁修飾酶的活性及相關(guān)基因的表達(dá)水平，從而為科學(xué)有效地提高蘋(píng)果品質(zhì)及果實(shí)耐儲(chǔ)性提供理論依據(jù)。