囊狀幼蟲病的流行與發展

張南 陳恒 趙灤 藺哲廣 吉挺

（揚州大學動物科學與技術學院，揚州 225009）

1 前言

病毒嚴重危害蜜蜂健康。自1913年首次在蜜蜂中分離出第一個病毒后，至今已經發現超過20 種蜜蜂病毒[1]，其中常見的七種病毒分別為：蜜蜂殘翅病毒（DWV）、以色列急性麻痹病毒（IAPV）、急性蜜蜂麻痹病毒（ABPV）、慢性蜜蜂麻痹病毒（CBPV）、黑蜂王臺病毒（BQCV）、蜜蜂囊狀幼蟲病病毒（SBV）、克什米爾病毒（KBV）。囊狀幼蟲病毒的傳播范圍較廣[2]，目前英國、澳大利亞、印度、丹麥、南非、尼泊爾及中國等國家均有報道[3]。1972年在我國廣東省首次發現東方蜜蜂幼蟲感染囊狀幼蟲病毒[4]，隨后SBV 便向中國大部分地區蔓延，引起成片的幼蟲死亡，導致中華蜜蜂蜂群數量急劇下降。由于蜜蜂生存環境的溫度較高且比較擁擠，一旦出現病毒攜帶者，會造成病毒的快速傳播，感染病毒的蜜蜂將會出現細胞凋亡、組織損傷以及靶基因功能紊亂[5]。我們對近年來有關囊狀幼蟲病的研究報道進行綜述，旨在為囊狀幼蟲病的防治提供新的見解。

2 SBV簡述

2．1 SBV的結構

SBV 屬于傳染性軟腐病病毒科（Iflaviridae），具有大約9000～11000 堿基的單股正鏈RNA 基因組。最常見的感染途徑是攝入被病毒污染的食物，感染過程很快，一旦進入宿主細胞，幾小時內就能產生子代病毒[6]。SBV 編碼一個大的開放閱讀框，結構蛋白位于5’端，VP1、VP2 和VP3 形成其衣殼，其中VP1 氨基酸序列為高變區，序列的差異可能揭示了不同病毒之間不同的病毒活性；RdRp、3C 非結構蛋白位于3’端，RdRp 具有高度保守型[7]。SBV 一般指從西方蜜蜂病群內分離出的，而從東方蜜蜂群內分離出的SBV 變異菌株稱中華蜜蜂囊狀幼蟲病毒（CSBV），與SBV 具有不同的抗原性[8]。史紅霞等[9]研究證明RdRp 可作為CSBV 的RNA 干擾治療的靶基因。

隨著不斷的研究，發現SBV 病毒多樣性的增加。由于SBV 為正鏈RNA 病毒，其復制時沒有校對機制，導致SBV 在宿主體內很容易發生變異，發展成具有不同侵染力及不同毒性的菌株。有學者認為SBV 和CSBV 為不同的血清型[10]且兩種血清型都能分別對東方蜜蜂蜂群和西方蜜蜂蜂群感染，特別的是，兩種血清型各有9 個特異性保守氨基酸序列。在自然選擇和免疫壓力下，SBV 和CSBV 可能在宿主之間進行交換，表明這些病毒是獨立進化的[11]。CSBV 可以導致西方蜜蜂的死亡[12]，同時從西方蜜蜂中分離出的SBV 也能跨越物種屏障感染東方蜜蜂[13]。下文所述及SBV 除明確指出外，均包括感染西方蜜蜂的SBV 和感染東方蜜蜂的CSBV。

2．2 SBV的流行規律

SBV 主要感染蜜蜂幼蟲階段，并表現出較高的流行率，患病初期，工蜂辨別出幼蟲在封蓋子脾中死亡后，隨即將房蓋咬開，清理因病死亡的幼蟲，蜂王繼續在幼蟲脾中產卵，形成卵、蟲、蛹、空房相間的“花子”現象[14]。隨著患病的幼蟲增多，工蜂來不及清除，未能清除的患病幼蟲軀體變軟，顏色由白色晶亮逐漸變黃、黃褐色，直至變成黑褐色龍舟狀鱗片。死亡的幼蟲頭尖上翹，呈尖頭狀，蟲體呈下粗上細，含有SBV的液體在未脫落的外表皮與蟲體間積累，感染的幼蟲從巢房中取出呈囊袋狀，尸液無臭味，死亡幼蟲在脾上成片分布[15]。1～2日齡幼蟲易染病，5～6日齡預蛹期死亡率較高。病情嚴重時，染病蜂場會出現幾箱蜂甚至十幾箱蜂群一起離開巢箱掛在樹上的現象[16]。由于高溫下病毒的蛋白質易失活，低溫下病毒保持穩定。所以SBV 多發生于春季（3～5月）及晚秋至初冬（10～11月），寒潮頻繁、氣溫變化劇烈的時期，夏季高溫時病情消失。

2．3 SBV的傳播途徑

病毒的傳播通常分為水平傳播和垂直傳播兩種途徑。垂直傳播又稱為縱向傳播，指病毒從成年個體傳播給其后代。據研究發現[17]，在感染病毒的蜂群中，盡管蜂王未表現出病毒感染的病理癥狀，但在其糞便或任何解剖組織中仍可檢測出SBV，感染病毒蜂王所產的卵檢測出了病毒，證明SBV 可以通過親代垂直傳播給子代。

蜂群中的水平傳播是SBV 的一種主要傳播方式。水平傳播又稱為橫向傳播是指病毒在同代個體之間傳播，包括食源、交尾及媒介三種傳播方式。成年工蜂是造成病毒通過食源傳播的主要傳播者，隱性感染的成蜂飼喂健康幼蟲時將病毒傳染給健康的幼蟲及采蜜采粉或迷巢將病毒傳播給其他蜂群；雄蜂感染SBV 后與蜂王交尾，使蜂王感染SBV[18]；體外寄生的螨可能在SBV 傳播中起著重要作用[19]。

SBV 可以感染各個階段的蜜蜂且在宿主中可存活4 周[20]。由于成年工蜂的衛生學行為，清理染病幼蟲時可能感染SBV，從而成為病毒攜帶者。SBV 對成年工蜂造成的危害主要體現在兩方面，一方面SBV 可能縮短成年工蜂的壽命[21]；另一方面可能會造成蜜蜂種群在經濟上的重大損失。新西蘭的研究表明，感染了SBV 的成年工蜂，在采集花蜜時可能會對農作物授粉產生不利的影響，特別是在初夏開花且只產生花粉的植物[22]。成年工蜂在蜂群中擔任著哺育、衛生、采集等工作，哺育染病幼蟲或清理因病死亡的幼蟲后，SBV會在下顎腺積累[23]。由此可見，無癥狀感染的成年工蜂同樣會引起SBV 在蜂群中的傳播。

2．4 檢測方法

在疾病爆發前準確、快速地檢測出病毒，有助于將感染的蜂群與健康的蜂群隔離。雖然可根據出現的典型癥狀判斷，然而出現特征癥狀時已錯過了最佳時期。與傳統的血清學方法相比，更多學者選擇采用分子學實驗方法檢測病毒。

RT-PCR 技術為目前報道出來的診斷囊狀幼蟲病毒方法之一，Yan X 等[24]首次用RT-PCR 方法檢測CSBV，Pair2 引物適用于無任何癥狀的感染幼蟲和成年工蜂的CSBV 檢測；張明華等[25]選擇結構蛋白VP3 基因為靶基因，根據GenBank中序列合成1對特異性引物。RT-PCR 法具有快速、可靠、重現性好、特異、靈敏等優點，其原理為根據一段序列設計特異性的引物進行擴增，然而SBV 的多樣性導致基因組不同區域檢出率差異較大[26]。

酶聯免疫測定法具有很高的特異性，Li Ming 等[7]建立以VP2 蛋白為靶抗原制備單克隆抗體ELISA，不能與其他蜜蜂病毒發生反應，僅能與CSBV 發生反應。此法易于標準化、批量生產、適用于大量臨床樣本檢測。

3 SBV感染對東、西方蜜蜂的影響

蜜蜂感染SBV 后，為調整病毒侵染帶來的影響，機體會及時做出營養代謝及免疫方面的反應。工蜂特有的衛生行為，能快速清除感染SBV 的病死蜂；腸道環境形成的化學屏障可抑制病原體繁殖和擴散[12]。然而這種應對機制并不足以抵消SBV 造成的幼蟲死亡及成蜂壽命減短。東方蜜蜂和西方蜜蜂為目前全世界飼養的主要蜂種，在長期的進化過程中，蜜蜂進化出了獨特的免疫系統和免疫機制。在東方蜜蜂和西方蜜蜂發育的不同階段，其響應SBV 脅迫的免疫應答也不同。

4日齡東方蜜蜂幼蟲感染SBV，免疫相關基因表達顯著上調且可能影響幼蟲的營養代謝，研究表明[27]幼蟲感染CSBV，體內18 種碳水化合物和能量代謝相關蛋白下調，甚至其中8 種下降10 倍。西方蜜蜂幼蟲應對SBV 侵染的方式完全不同，西方蜜蜂4日齡幼蟲感染SBV，機體的營養代謝相關基因顯著上調，而免疫相關基因顯著下調。碳水化合物是蜜蜂幼蟲快速生長的主要能量來源[28]，東方蜜蜂幼蟲為了提高自身免疫能力，以消耗營養儲備為代價。相反，西方蜜蜂幼蟲感染病毒后，為保證早期生長及化蛹變態期的營養物質需要，機體提高了營養代謝相關基因的表達。

在蛹期發育階段，東方蜜蜂感染SBV 后抗病毒基因及凋亡相關基因會顯著上調，同時體內的4 種角質層蛋白下調近10 倍[27]。西方蜜蜂蛹期檢測到免疫基因及凋亡基因均顯著性下調。蜜蜂在蛹期要經歷大部分器官和組織重塑，與發育相關的蛋白質在此過程中起著至關重要的作用[29]。蛹期的蟲體表皮已形成并被包裹在角質層中，病毒侵染會導致凋亡基因的過度表達及角質蛋白顯著下降，這可能是造成幼蟲化蛹失敗甚至死亡的原因。西方蜜蜂在蛹期得以生存甚至成功化蛹的原因可能是增強了自身的免疫機能。

20日齡東方蜜蜂采集蜂感染SBV，一般的免疫基因沒有顯著變化，僅hex110、vg、toll營養代謝基因顯著下調，且體內與病毒降解相關基因的表達水平顯著上調。西方蜜蜂20日齡蜜蜂體內與RNAi 抗病毒機制相關的ago基因顯著降低。成年蜜蜂感染SBV 對其營養代謝和免疫調節方面造成一定影響，引起成年采集蜂的壽命減短[30]。

感染SBV 會引起細胞凋亡、組織損傷甚至機體的功能紊亂，這些變化都在蛋白質組的改變上進一步體現。健康蜜蜂幼蟲需要大量蛋白質以滿足正常發育和代謝[20]，蛋白質磷酸化作為最常見的翻譯后修飾之一，幾乎參與了細胞代謝的所有方面[31]。Han B 等研究數據[27]表明，SBV 感染促發了幼蟲必需蛋白質組和磷酸化蛋白質組的變化，通過破壞能量供應、蛋白質的生物合成、激素調節、抗氧化防御等途徑，造成幼蟲死亡。因此，蛋白質組及磷酸化蛋白質組的改變可能影響蜜蜂健康。

4 防治措施

4．1 預防

目前暫無囊狀幼蟲病的特異性治療藥物，因此在生產中提倡以預防為主、治療為輔的原則。囊狀幼蟲病的發病季節與氣候、蜜源及蜜蜂品種都有關[32]，所以在做預防工作時要針對這些誘病因素進行綜合考慮。在氣溫變化劇烈時期需注重蜂群的飼養管理，科學的飼養水平可以有效預防囊狀幼蟲病的發生，其實質就是提高蜂群的抗病力。保持蜂多于脾，將蜂群放置在環境干燥、通風、向陽的偏僻靜處飼養，減少驚擾可有效減少蜂群得病率。保證蜂群充足、優質的飼料，蜜蜂的營養充足，生長發育好，則抗病力強。

蜂群的抗病性與發病率有很大關系，一些群勢較強的蜂群因抗病性弱也會發病，在生產過程中需堅持長期選擇抗病力、繁殖力、生產力好的蜂群作為父母群選育，獲得抗囊狀幼蟲病的蜂群。任勤等[33]基于蜜蜂的衛生行為，通過液氮冷凍法選育出具有衛生行為的中華蜜蜂蜂群，結果表明實驗組的發病率及發病程度明顯低于對照組，選育的工蜂能及時將感染的幼蟲清除，更好地執行了衛生行為。

4．2 治療

蜂群感染SBV 時，可根據典型的病癥結合實驗室檢測診斷。初步診斷時要注意囊狀幼蟲病與歐洲幼蟲腐臭病的區別，避免誤診造成用錯藥。歐洲幼蟲腐臭病多發生于較弱的蜂群，感染的幼蟲死亡發生在封蓋前，工蜂無需打開房蓋，一般在封蓋子脾上沒有細小的穿孔。死亡的幼蟲在巢房內呈C 字形，軀體呈乳白、灰白、黃白色，呈不規律的散點狀分布，嚴重時也有成片的[34]。

一旦發現囊狀幼蟲病，不論病情輕重，需立即搬遷隔離，將染病蜂群與健康蜂群隔離，避免病毒的持續蔓延。對隔離的染病蜂群采取縮脾緊脾、扣王斷子清剿等措施，再從健康群或抗病群中移蟲，人工育王或用它們產生的自然王臺給病群換王。

目前藥物治療分為西藥和中藥兩種渠道，西藥治療方法為使用適量的抗病毒一號[35]，但使用抗病毒藥物后蜂產品中可能會有殘留。中藥的優點為有效成分不易散失及副作用小，目前中藥治療SBV 的研究正在成為新熱點。蜂農康中山[36]使用本地尖刀草陰干后放于蜂箱上治療SBV 有一定的治療效果；貫眾、板藍根、金銀花等中草藥具有抗菌、消炎、抗病毒等作用，目前作用于SBV 治療上研究相對較多[2,37]。鑒于囊狀幼蟲病毒可以跨越物種屏障感染且對蜂群具有較嚴重的危害，在生產實踐中，蜂農應該學會及早識別蜜蜂疾病，做到早發現，早防治。