加味五子衍宗濃縮丸制備工藝及質量控制研究

歐陽若水 鐘蘭英 文桂卿 鐘倪俊 卓進盛 邢益濤 王利勝

1.廣州中醫藥大學中藥學院，廣東廣州 510403；2.廣東江門中醫藥職業學院南藥學院，廣東江門 529000；3.海南省中醫院肺病科，海南海口 570203；4.海南省中醫院泌尿外科，海南海口 570203

加味五子衍宗方是來源于海南省中醫院的臨床經驗方，由枸杞子、菟絲子、五味子、車前子、覆盆子、烏藥、沉香、細辛八味藥材組成，有補腎益精、溫中止痛的功效，被廣泛用于治療腎虛腰痛、陽痿、不育等疾病。該方在臨床上以湯劑的形式服用，具有服用量大、煎煮時間長、不便攜帶等缺點，本研究旨在不改變原方的基礎上，將原方湯劑改制為濃縮丸。在濃縮丸的制備過程中，清膏的相對密度、藥蜜用量比、藥粉的細度、干燥時間、干燥溫度等，都會對濃縮丸的品質產生直接的影響[1-3]。因此，本研究以軟材性狀、成型性、水分和溶散時限為工藝評價指標[4-5]，采用單因素試驗[6]對本濃縮丸進行優化，旨在探索出合適的制備工藝，同時，在優化的工藝基礎上，對所制的濃縮丸進行質量檢測。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

電子分析天平（生產廠家：上海民橋精密科學儀器有限公司；型號：FA2014；精密度：0.0001）；四兩裝高速中藥粉碎機（生產廠家：瑞安市永歷制藥機有限公司；型號：103）；電熱恒溫鼓風干燥箱（生產廠家：上海精宏實驗設備有限公司；型號：DHG-9240A）；旋轉蒸發器（生產廠家：上海亞榮生化儀器廠；型號：RE-52 系列）；恒溫水浴鍋（生產廠家：上海亞榮生化儀器廠；型號：B-220）；小型多功能中藥制丸機（生產廠家：長沙市岳麓區中南制藥機械廠；型號：DZ-20）；智能崩解儀（生產廠家：天津市天大天發科技有限公司；型號：ZB-1E）；高效液相色譜儀（生產廠家：日本島津公司；型號：LC-20A）；色譜柱（生產廠家：Agilent；型號：ZORBAXSB-Aq）。

1.2 試藥

枸杞子、菟絲子、五味子、車前子、覆盆子、烏藥、沉香、細辛藥材均購自康美藥業股份有限公司，經檢驗均符合2015 年版《中華人民共和國藥典》[7]標準；金絲桃苷對照品（成都格利普生物科技有限公司，批號：19071603）；乙腈為色譜純，磷酸為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 成型工藝研究

2.1.1 制法

按處方稱取菟絲子20 g、覆盆子10 g、車前子10 g、烏藥10 g、沉香10 g，粉碎，過篩，混合均勻。按處方取枸杞子30 g、五味子15 g、細辛3 g，水提，濃縮，與上述細粉混合，加入適量中蜜作為黏合劑，采用塑制法[8]制丸，干燥，即得。

2.1.2 工藝流程

工藝流程見圖1。

圖1 工藝流程

2.2 評價指標測定

2.2.1 水分的測定

按照2015 年版《中華人民共和國藥典（四部）》[9]水分測定法（通則0832）項下的烘干法進行測定，含水量不得超過12.0%。

2.2.2 溶散時限檢查

按照2015 年版《中華人民共和國藥典（四部）》[9]崩解時限檢查法（通則0921）進行檢查，應在2 h 內全部溶解。

2.3 試驗因素考察

2.3.1 清膏相對密度考察

按處方量稱取水提組3 味藥材，水提后分別濃縮至相對密度為1.20、1.30、1.40、1.50（20℃），分別與粉碎組藥材細粉混勻制丸，固定藥蜜用量比為1∶0.5，藥粉細度為100 目。以軟材性狀和成丸情況為評價指標。優選出清膏相對密度為1.40。見表1。

表1 清膏相對密度考察

2.3.2 藥蜜用量比考察

按處方量稱取藥材細粉，分別加入藥蜜比為1∶0.3、1∶0.4、1∶0.5、1∶0.6 的中蜜做黏合劑，固定清膏相對密度為1.40，藥粉細度為100 目，干燥溫度為65℃，干燥時間為10 h，制丸。以成型性、水分和溶散時限為評價指標，綜合考察指標的結果，優選出藥蜜用量比為1∶0.4。見表2。

表2 藥蜜用量比考察

2.3.3 藥粉細度考察

將粉碎組5 味藥材粉碎，分別過60、80、100、120目篩，固定清膏相對密度為1.40，藥蜜用量比為1∶0.4，干燥溫度為65℃，干燥時間為10 h，制丸。以成型性、水分、溶散時限為評價指標，確定藥粉細度為100 目。見表3。

表3 藥粉細度考察

2.3.4 干燥溫度考察

將清膏相對密度固定為1.40，藥蜜用量比為1∶0.4，藥粉細度為100 目，制丸，分別于50、60、70、80℃不同溫度下進行干燥，干燥時間固定為10 h，以水分、溶散時限為評價指標，最終確定干燥溫度為60℃。見表4。

表4 干燥溫度考察

2.3.5 干燥時間考察

固定清膏相對密度為1.40，藥蜜用量比為1∶0.4，藥粉細度為100 目，干燥溫度為60℃，制丸，分別干燥7、10、13、16 h，以水分和溶散時限為考察指標，優選出干燥時間為10 h。見表5。

表5 干燥時間考察

2.3.6 驗證實驗

為了進一步驗證優選工藝的可靠性，分別取3 份處方量的藥材，按照優選出的條件進行試驗，測定成品的水分和溶散時限。最終確定了加味五子衍宗濃縮丸的制備工藝，清膏的相對密度為1.40，藥蜜用量比為1∶0.4，藥粉細度100 目，干燥溫度60℃，干燥時間10 h。見表6。

表6 工藝驗證考察表

2.4 質量檢查

根據上述試驗篩選出的條件，制備3 批（批號：20070101、20070102、20070103）加味五子衍宗濃縮丸，隨后依據2015 年版《中華人民共和國藥典》[9]四部通則丸劑項的相關規定對丸粒進行質量檢查。

2.4.1 溶散時限

按照2015 年版《中華人民共和國藥典（四部）》[9]崩解時限檢查法（通則0921）將樣品置于智能崩解儀中測定。批號為20070101、20070102、20070103 加味五子衍宗濃縮丸樣品溶散時限分別為23、27、26 min。3 批樣品的溶散時限均在120 min 內，符合《中華人民共和國藥典》的溶散時限規定。

2.4.2 水分檢查

按照2015 年版《中華人民共和國藥典》四部[9]水分測定法（通則0832）項下的烘干法進行測定，批號為20070101、20070102、20070103 加味五子衍宗濃縮丸樣品水分檢查結果分別為7.01%、6.89%、6.82%。3 批樣品的水分都小于9%，符合《中華人民共和國藥典》的水分規定。

2.4.3 重量差異

按照2015 年版《中華人民共和國藥典（四部）》[9]丸劑重量差異檢查法進行測定，以10 丸為1 份，取供試品10 份，分別稱定重量。3 批樣品的重量差異均在±9%以內，符合《中華人民共和國藥典》對該劑型重量差異的規定。見表7。

表7 3 批樣品重量差異檢查表（g）

2.4.4 金絲桃苷含量測定

2.4.4.1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-Aq色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（17∶83）；檢測波長：360 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；進樣量：10 μL，理論塔板數按金絲桃苷峰計算應不低于5000[7]。

2.4.4.2 對照品溶液的制備 取金絲桃苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成97 μg/mL 的溶液，即得金絲桃苷對照品儲備液。

2.4.4.3 供試品溶液的制備 取加味五子衍宗濃縮丸5 g，粉碎后精密稱定，置于50 mL 具塞量瓶中，加入80%甲醇40 mL，超聲處理（功率500 W，頻率40 kHz）1 h，放冷，加80%甲醇至刻度，搖勻，過濾，取續濾液，取1 mL 定容至10 mL 容量瓶，吸取上清液，過0.22 μm的微孔濾膜，取續濾液，即得。色譜圖見圖2。

圖2 金絲桃苷對照品及供試品高效液相色譜圖

2.4.4.4 線性實驗 精密吸取對照品儲備液1 mL，分別置于5、10、20、25、50 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件進樣，以峰面積和濃度進行線性回歸。回歸方程為Y=155 59X-1397.3（r=0.9999）。

2.4.4.5 精密度實驗 精密吸取質量濃度為3.88 μg/mL的對照品溶液適量，按上述色譜條件，連續進樣6 次，測定峰面積，RSD 值為1.70%，結果表明，儀器的精密度良好。

2.4.4.6 穩定性實驗 精密吸取同一份供試品溶液，分別在制備后0、2、4、6、8、10 h 按上述色譜條件進樣，測定峰面積，RSD 值為1.57%，結果表明，供試品溶液在10 h 內保持穩定。

2.4.4.7 重復性實驗 取同一批加味五子衍宗濃縮丸5 g，粉碎，按“2.4.4.3”項下制成供試品溶液，重復進樣6 次，測定金絲桃苷含量，RSD 值為1.80%，表明該方法的重復性良好。

2.4.4.8 加樣回收率實驗 精密量取已知濃度的供試品溶液（2.4956 μg/mL）1 mL，平行6 份，分別精密加入質量濃度為2.4250 μg/mL 的金絲桃苷對照品溶液1 mL，按“2.4.4.3”項下制成供試品溶液，測定金絲桃苷的含量及加樣回收率。見表8。

表8 加樣回收率實驗結果

2.4.4.9 樣品含量測定 取3 批加味五子衍宗濃縮丸，每份5 g，按“2.4.4.3”項下方法制成供試品溶液，按“2.4.4.1”項下色譜條件進樣，計算3 批加味五子衍宗濃縮丸中的金絲桃苷含量。批號為20070101、20070102、20070103 加味五子衍宗濃縮丸含量分別為0.20、0.19、0.20 mg/g。符合2015 年版《中華人民共和國藥典》[7]的規定（金絲桃苷的含量不得少于0.10%）。

3 討論

濃縮丸是指將處方中的部分藥材提取濃縮成稠膏后與剩余的藥材細粉混合制成的丸劑[10]，服用量小，易吸收、存儲和攜帶，同時其制備過程中所使用的輔料較其他劑型少，在工業大生產時能節省輔料以減少成本，符合中醫用藥特點并適用于現代機械化生產[11]。有研究表明，在治療男性不育癥疾病時濃縮丸的藥效略優于水蜜丸[12]。因此，本研究旨在不改變處方的基礎上，將原方湯劑改制成濃縮丸，以克服湯劑煎煮時間長、易變質、不易攜帶、服用體積大等缺點。

傳統的泛制法制備工藝較為繁瑣，周期長，且因生粉直接入藥，易導致微生物數量超標，而塑制法的生產效率高，成品均勻度好，不易染菌[13]，還能避免人工操作帶來的操作結果的差異性[14]。故本方采用塑制法制丸。清膏相對密度、藥蜜比例、藥粉細度、干燥時間、干燥溫度都是影響制丸的重要因素。清膏相對密度過小時，藥粉干燥而難以成團，導致無法制丸；相對密度過大時，制成的軟材太軟，易產生粘連。藥粉的細度主要影響軟材的細膩程度，從而影響丸粒的外觀性狀，藥粉過粗，制成的軟材粗糙，丸粒不圓整；藥粉過細，打粉的難度增加，損失較大[15]。

蜂蜜是良好的藥物黏合劑，可以根據調節蜂蜜的含水量來調整蜂蜜的黏性，來適應不同藥材的處理需求[16]。此外，在某些方中，蜂蜜還可起到佐、使藥的作用[17]。用于制備丸劑的蜂蜜必須經過煉制，通過煉蜜能除去雜質，殺滅細菌，除去水分以增加黏性等[18]。根據煉制的程度，蜂蜜共可以分為嫩蜜、中蜜、老蜜三種，需根據處方的藥材性質來選擇合適的煉蜜。本研究于初步試驗中發現，本處方采用中蜜制丸，所得軟材軟硬度適中，黏性較好，丸粒表面光滑圓整，故將蜂蜜煉制至中蜜作為黏合劑。

菟絲子是本方的君藥，是本方中最重要的藥材，具有免疫調節、抗氧化、抗衰老、保肝明目等多種藥理作用[19-21]，尤其對腎虛不孕、胎動不安等生殖系統疾病有顯著的治療作用[22]。金絲桃苷既是菟絲子的主要成分也是有效成分，具有抗急性肝損傷、抗抑郁、抗炎癥、抗血栓、抗癌等藥理作用[23-24]，還能通過抗氧化應激及抗炎作用減輕嚴重燒傷大鼠早期心肌損傷[25]。金絲桃苷的理化性質較為穩定，在2015 年版《中華人民共和國藥典（一部）》[7]中，菟絲子含量測定指定以金絲桃苷為主要測定指標。因此，綜合考慮，本濃縮丸選擇金絲桃苷作為質量控制的指標。