泊洛沙姆407誘導(dǎo)大鼠器官脂肪變性的相關(guān)研究

李晶晶 秧茂盛

（吉首大學(xué) 湖南·湘西 416000）

0 導(dǎo)言

“脂肪變性”是一種由多種原因引起的臨床病理綜合征，其特征是甘油三酯和膽固醇在非脂肪細(xì)胞中的積累，是細(xì)胞脂肪變性和脂質(zhì)在富氧器官，如肝臟和腎臟中的積累。肝臟是脂質(zhì)代謝的重要器官，脂肪肝和高脂血癥被認(rèn)為是代謝綜合征的病理表現(xiàn)，因此，脂肪變性及其相關(guān)疾病是世界性的公共衛(wèi)生問題。

泊洛沙姆(poloxamer)是聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯(PEO-PPO-PEO)三嵌段共聚物，其商品名為普朗尼克(Pluronic)，通式為HO(C2H4O)a-(C3H6O)b-(C2H4O)aH，其中聚氧乙烯鏈具有相對(duì)親水性，聚氧丙烯鏈具有相對(duì)親油性，化合物分子量以及分子中環(huán)氧乙烯或環(huán)氧丙烯含量的比例不同,其物理性質(zhì)也不同，因此是一種非離子型高分子表面活性劑。

P-407是一種三嵌段共聚物，已被用于建立小鼠劑量依賴性高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化模型。脂肪組織變性的動(dòng)物模型旨在再現(xiàn)器官或組織脂肪變性的臨床體征和病理特征。本研究使用泊洛沙姆407(P-407)4個(gè)月，建立一種新的脂肪組織/器官變性大鼠模型。

1 材料和方法

（1）動(dòng)物和處理。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)符合《NIH實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的護(hù)理和使用指南》原則。購(gòu)買60只2個(gè)月大的雄性Sprague-Dawley大鼠及飼料。將大鼠單獨(dú)安置在溫度，濕度和光線受控的房間（分別為22-24°C，50-60%，12/12小時(shí)的明暗循環(huán)）。適應(yīng)一周后，將動(dòng)物隨機(jī)分配進(jìn)行治療（P-407）或?qū)φ战M（鹽水）組（每組6只大鼠）。給大鼠腹膜內(nèi)注射P-407 1.0 g·kg-1或等量生理鹽水(10m L/kg)，每5天測(cè)量一次每只大鼠的體重。在實(shí)驗(yàn)期間，大鼠可自由飲水和飲食，但在采血之前，大鼠需禁食過夜（≥12小時(shí)）。

（2）血脂濃度的測(cè)定。治療0,1,2,3或4個(gè)月后，通過腹腔注射3%戊巴比妥鈉鹽(1mL/kg)對(duì)大鼠進(jìn)行終末麻醉，從心臟采集5至6m L血樣，在37°C下孵育60分鐘，離心10分鐘，收集血清并儲(chǔ)存在-80°C冰箱中直到分析。使用日立全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)樣本指標(biāo)，按試劑盒說明書進(jìn)行操作。

（3）統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)都用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±SD）進(jìn)行表示，采用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS 16.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理。組間差異檢驗(yàn)采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析。組織脂肪變性與血漿致動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)（AIP，由Lg（TG/HDL）計(jì)算而得）和TC/HDL比值的相關(guān)性分析采用Spearman非參數(shù)相關(guān)性分析。p<0.05時(shí)，則認(rèn)為組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)P-407處理的大鼠血清脂質(zhì)濃度明顯高于對(duì)照組，與先前的報(bào)道一致。（見表1）

表1：反復(fù)腹腔注射1g/kg泊洛沙姆407(P-407)對(duì)雄性大鼠血脂濃度的影響

3 討論

本實(shí)驗(yàn)證實(shí)，長(zhǎng)期腹腔注射P-407可引起高脂血癥。在P-407給藥期間，肝臟、脾臟和腎臟的脂肪變性有時(shí)間依賴性，這種脂肪變性可能與抑制脂質(zhì)代謝和脂質(zhì)在各種組織和器官中的積累有關(guān)，相關(guān)研究有待深入。已有不少研究指出，動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病的不良結(jié)局與血脂異常有關(guān)。本研究結(jié)果表明，AIP和TC/HDL比值與脂肪變性呈正相關(guān)，此結(jié)果可能有助于相關(guān)疾病的防治。

泊洛沙姆407由約70%乙烯氧化物和30%丙烯氧化物組成，平均分子量11500，熔點(diǎn)56℃，無(wú)臭、無(wú)味，易溶于水、酸、堿，對(duì)金屬離子穩(wěn)定。它具有特殊的反向熱膠凝作用，即低溫時(shí)為液體，體溫下成為凝膠，其毒性低，刺激性小，生物相容性好，是一種理想的藥物控釋材料，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、藥學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域。例如在眼用制劑中的應(yīng)用，張建強(qiáng)等以泊洛沙姆為溫敏型材料制備乳酸環(huán)丙沙星眼用即型凝膠，并對(duì)該制劑的眼刺激性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，確定了18%的泊洛沙姆407作為該眼用凝膠的基質(zhì)，且對(duì)兔眼無(wú)刺激。表明該制劑制備方法簡(jiǎn)單、劑量易于控制，展現(xiàn)出良好的眼部應(yīng)用前景。高斐等通過研究以泊洛沙姆407為溫敏材料，制成的左氧氟沙星眼用凝膠的體外釋放試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)該制劑制備方法簡(jiǎn)單，用藥劑量易于控制，表明泊洛沙姆可用眼用制劑中。包晗等以泊洛沙姆407為基質(zhì)制備成雙氯芬酸鈉眼用在體凝膠，并對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示該眼用在體凝膠制劑制備工藝簡(jiǎn)單、穩(wěn)定可靠、質(zhì)量可控。泊洛沙姆407對(duì)人體無(wú)毒，已被批準(zhǔn)用作一些藥品和個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品的輔料。它有一種獨(dú)特性質(zhì)，在低溫下是液體，受熱后變成固體，過程是可逆的。新方法正是利用了這一特性。研究人員將該物質(zhì)加熱到高于體溫，使它變成固體，用于撐開血管。溫度下降后它變成液體，不會(huì)阻塞血管。

P-407誘導(dǎo)的大鼠脂肪變性模型優(yōu)勢(shì)：（1）方便且廉價(jià)；（2）P-407劑量可以精確控制；（3）P-407給藥停止時(shí)，器官的血脂濃度和脂肪變性可恢復(fù)到基礎(chǔ)水平，這對(duì)研究高脂血癥所致?lián)p傷的時(shí)間依賴性和可逆性具有重要意義；（4）實(shí)驗(yàn)大鼠的肝臟、脾臟和腎臟均發(fā)生脂肪變性，這可能是研究多器官脂肪變性的有用實(shí)驗(yàn)工具。