人腦膜瘤組織β-catenin和Gal-3表達(dá)水平與術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系

羅方接 張代龍 鄧景陽 陳亞德 曾志明 祝展鵬

腦膜瘤占顱內(nèi)腫瘤的13%～19%，屬于富血管性腫瘤，部分腦膜瘤呈侵襲性生長，術(shù)后易復(fù)發(fā)，預(yù)后往往欠佳[1，2]。研究表明，β-連環(huán)素（β-catenin）參與細(xì)胞間粘附，其表達(dá)異常可致細(xì)胞間粘附能力下降，并且激活Wnt 通路下游靶基因，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展[3]；而半乳糖凝集素-3（Galectin-3，Gal-3）具有多種生物功能，例如調(diào)節(jié)免疫、參與細(xì)胞間粘附、參與細(xì)胞凋亡等，在腦膠質(zhì)瘤中異常表達(dá)，與腫瘤惡性程度密切相關(guān)[4]。本文探討人腦膜瘤組織β-catenin、Gal-3 的表達(dá)水平與術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系，為臨床提供參考。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集2017 年12 月至2019 年12 月手術(shù)切除的腦膜瘤標(biāo)本93 例（腦膜瘤組），其中男51例，女42 例；平均年齡（56.43±12.64）歲；癲癇38 例，視力下降26 例，顱內(nèi)壓增高10 例，肢體運動障礙7例；腫瘤直徑2～8 cm，平均（4.61±2.14）cm；腫瘤位于大腦凸面52例，矢狀竇、大腦鐮旁30例，其他部位11例。選取同期顱腦損傷內(nèi)減壓術(shù)切除的正常腦組織30 例作為對照組，其中男18 例，女12 例；平均年齡（55.91±15.47）歲。本文研究方案獲醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)①行腫瘤切除術(shù)，術(shù)后病理檢查證實為腦膜瘤；②意識清楚，溝通能力良好；③自愿簽署知情同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 合并他部位原發(fā)性腫瘤；肝、腎、心等臟器損害；既往有顱腦手術(shù)史；復(fù)發(fā)性腦膜瘤；既往有精神病史；昏迷狀態(tài)。

1.3 檢測方法 采用免疫組化法檢測β-catenin、Gal-3 表達(dá)。常規(guī)制備組織切片，存放至4 ℃冰箱備用。先進(jìn)行HE 染色，然后進(jìn)行免疫組化染色。經(jīng)脫蠟、水化處理，利用PBS 液沖洗2次，5 min/次；在高壓下行抗原修復(fù)，取切片置于檸檬鹽酸緩沖液內(nèi)，經(jīng)高壓鍋加熱10 min，自然冷卻，經(jīng)PBS 進(jìn)行3 次沖洗，3 min/次；山羊血清室溫反應(yīng)10～15 min后，加入一抗，4 ℃孵育過夜，PBS沖洗3次，3 min/次；加入二抗，室溫反應(yīng)2 h，PBS沖洗；DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、透明處理，封片后顯微鏡下觀察。

陽性結(jié)果判定[5]：若細(xì)胞質(zhì)、胞膜內(nèi)呈棕黃色顆粒，則為陽性。隨機(jī)選擇10 個高倍視野（×400），各視野隨機(jī)選擇100個細(xì)胞，根據(jù)染色強(qiáng)度、陽性細(xì)胞占比予以評分。染色強(qiáng)度：無著色為0分，淺黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。陽性細(xì)胞占比：≤5%為0 分，6%～25%為1 分，26%～50%為2 分，51%～75%為3 分，＞75%為4 分。兩項評分乘積＞4分則判定高表達(dá)，否則為低表達(dá)。

1.4 隨訪 腦膜瘤病人術(shù)后隨訪12個月，判斷腦膜瘤復(fù)發(fā)情況。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0軟件分析；計數(shù)資料行χ2檢驗；計量資料以±s 表示，行t 檢驗；采用多因素logistic 回歸分析術(shù)后復(fù)發(fā)的影響因素；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腦膜瘤術(shù)后復(fù)發(fā)率93 例腦膜瘤中，術(shù)后復(fù)發(fā)19，復(fù)發(fā)率為20.43%；74例未復(fù)發(fā)。

2.2 腦膜瘤β-catenin、Gal-3 表達(dá)變化 腦膜瘤組織β-catenin低表達(dá)率（66.67%，62/93）明顯高于正常腦組織（16.67%，5/30；P＜0.05）。腦膜瘤組織Gal-3 高表達(dá)率（64.52%，60/93）明顯高于正常腦組織（6.67%，2/30；P＜0.05）。

2.3 腦膜瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的影響因素 單因素分析結(jié)果顯示，腫瘤大小、腫瘤生長方式、腫瘤切除程度、瘤周水腫、病理分級、β-catenin和Gal-3表達(dá)水平與腦膜瘤術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)（P＜0.05，表1）。多因素logistic回歸分析結(jié)果顯示，腫瘤侵襲性生長、腫瘤未全切除、腫瘤較大、瘤周水腫嚴(yán)重、病理分級高、β-catenin 低表達(dá)、Gal-3高表達(dá)是腦膜瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素（P＜0.05，表2）。

表1 人腦膜瘤術(shù)后復(fù)發(fā)危險因素的單因素分析

表2 人腦膜瘤術(shù)后復(fù)發(fā)危險因素的多因素logistic回歸分析

3 討論

部分腦膜瘤，徹底切除難度大，術(shù)后易復(fù)發(fā)[6]。腦膜瘤發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，具體機(jī)制尚不明確，但臨床認(rèn)為可能與免疫紊亂、炎癥進(jìn)展等有關(guān)[7]。丁婧和陳暉[8]研究顯示，Gal-3在細(xì)胞增殖/凋亡、炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)中均發(fā)揮重要作用。王元[9]指出β-catenin 在軟組織腫瘤中異常表達(dá)，對腫瘤發(fā)生、進(jìn)展有雙重調(diào)節(jié)作用。本文結(jié)果顯示，與正常腦組織相比，腦膜瘤組織β-catenin 呈低表達(dá)，Gal-3 呈高表達(dá)。β-catenin是一種骨架蛋白，主要表達(dá)于細(xì)胞膜，細(xì)胞核以及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)相對較少。一旦β-catenin 表達(dá)下降或缺失，則可破壞細(xì)胞之間的連接性，損害細(xì)胞間粘附力，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展與惡化[10]。但也有研究顯示乳腺癌βcatenin呈高表達(dá)[11]。這提示β-catenin在不同類型的腫瘤中表達(dá)可能存在差異。Gal-3在哺乳動物、線蟲中均表達(dá)，在進(jìn)化過程中具有高度保守性，通常在機(jī)體內(nèi)表達(dá)水平較低，但Gal-3 在多種惡性腫瘤中呈高表達(dá)，如乳腺癌、甲狀腺癌等[12，13]。Gal-3過表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)新生血管形成，誘導(dǎo)腫瘤免疫逃逸，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展[14]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，抑制Gal-3 表達(dá)后，可見腫瘤細(xì)胞凋亡增加，而增殖能力明顯降低[15]。

本文結(jié)果還顯示，β-catenin 低表達(dá)、Gal-3高表達(dá)是腦膜瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素。β-catenin低表達(dá)表，降低細(xì)胞間粘附能力，甚至導(dǎo)致該功能喪失，腫瘤細(xì)胞生長則難以受控，引起腫瘤侵襲，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，增加復(fù)發(fā)風(fēng)險。而Gal-3 高表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞運動受異常影響，促使細(xì)胞外基質(zhì)受損，使腫瘤細(xì)胞抗凋亡作用增強(qiáng)。

綜上所述，腦膜瘤β-catenin 呈低表達(dá)，Gal-3呈高表達(dá)，二者均與術(shù)后復(fù)發(fā)密切相關(guān)。