皮下埋植超長效氨氯地平制劑對自發性高血壓大鼠血壓及血藥濃度的影響

盧麗娟，羅玉梅，曾貴榮，王文峰

(1.廣東醫科大學第一臨床醫學院，廣東 湛江 524023；2.深圳市龍崗區人民醫院科教科，廣東 深圳 518172; 3.湖南省藥物安全評價研究中心，湖南 長沙 410331)

根據《中國心血管病報告2018》[1]，中國成人高血壓患病率為27.9%，高血壓患者2.45億，每5個成年人中至少有1人患高血壓。目前，高血壓發病率仍呈上升趨勢。高血壓是心腦血管疾病發病的主要危險因素，超過半數的心腦血管病發病與高血壓有關。控制血壓達標是減少心血管疾病，降低死亡率的重要手段。我國目前高血壓呈現三高三低的現狀：即患病率高、事件率高、致死致殘率高；而知曉率、治療率、達標率分別低達51.6%、45.8%、16.8%。

高血壓治療率和達標率低的原因與目前高血壓的治療方法有關，因為患者需長期口服1種或多種(1次或多次/d)藥物控制血壓，給工作及生活帶來不便，加上服藥導致的消化系統及其他系統的毒副作用，造成患者主動或被動停藥，嚴重影響高血壓的治療率及達標率。國內外均有學者在尋找治療1次即可長效穩定降壓，且毒副作用小的降壓方法。本研究組前期實驗應用硅膠管作為緩釋劑載體，內置原藥，兩端封口制成纈沙坦緩釋制劑，埋植于自發性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)皮下，可達到與每天口服藥物一樣的目標血壓長達2周，并維持穩定的血藥濃度[2]。高分子有機材料聚己內酯(polycaprolactone)具有極好的組織相容性、力學強度及易成型性，埋植在體內可自行降解吸收，在美國已獲FDA批準用于臨床[3-4]。為了避免藥物釋放完后需再次手術取出藥物載體，本研究參考文獻[5-6]方法用聚己內酯制作緩釋藥劑載體，加入氨氯地平原藥，制成氨氯地平緩釋制劑，一次性埋植于SHR頸部背側皮下，旨在探討皮下埋植緩釋藥物制劑1次，療效即可長達數月，且作用持續穩定的高血壓治療方法。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗動物：20周齡雄性SHR 32只，WKY大鼠8只，體重180～220 g，購于北京維通利華實驗動物技術有限公司，實驗動物生產許可證號：SCXK(京)2016-0006。動物實驗在湖南省藥物安全評價研究中心實施，大鼠飼養于屏障環境中，環境相同且適宜，實驗動物使用許可證號：SYXK(湘)2015-0016。

干預藥物制備：稱取高分子有機材料聚己內酯(上海甄準生物科技有限公司，批號55207253)1.5 g，加入甘油0.5 g，1,5-戊二醇0.02 g放入反應釜內，邊加熱邊攪拌，加熱至150 ℃，待反應釜里的原料成膠黏狀態時，加入氨氯地平原料藥(上海瑞永生物科技有限公司，批號190705)0.5 g，攪拌5 min，充分混勻后注入10腔模具(每腔直徑為1 mm，長度為20 mm)內；將模具放置于鼓風干燥箱內加熱到100 ℃，加熱50 h后關閉電源；待冷卻后打開模具，取出呈圓柱形固態藥劑(每支重量250 mg，含氨氯地平原料藥50 mg)，分別置入醫療滅菌袋包裝，鈷60滅菌待用。另稱取10 mg氨氯地平原藥加蒸餾水10 mL配成濃度1 mg/mL氨氯地平溶液，即配即用。

儀器：BP-100A型全自動大小鼠無創血壓測量系統(成都泰盟軟件有限公司)；LABOSPECT003型自動生化分析儀(日本日立公司)；TD4型低速離心機(南京普朗公司產品)；ME2002E型電子天平(日本島津公司)；DM2000型生物顯微鏡(德國Leica公司)；Nexera X2型液相色譜儀(日本島津公司)。

1.2 方法

將SHR隨機分成模型對照組、空白載體組、藥物灌胃組、緩釋降壓組，每組8只；另取8只雄性WKY大鼠作為正常對照組。緩釋降壓組按20 mg/kg的藥量截取降壓制劑埋植于SHR頸部背側皮下，空白載體組于相應部位埋植空白載體。藥物灌胃組SHR于每天早上9:00-10:00 用氨氯地平溶液灌胃，按成人擬推薦劑量，5 mg/次，1次/d，按人與動物的體表面積換算動物等效劑量為5 mg×0.018/0.2 kg=0.45 mg/kg。正常對照組和模型對照組大鼠給予同體積蒸餾水，給藥體積為10 mL/kg，1次/d，連續88 d。

1.3 大鼠體重測定

于藥物干預之前和藥物干預后每周末空腹稱重1次。

1.4 大鼠尾動脈血壓測量

分別于實驗開始前測量各組大鼠尾動脈血壓，實驗開始后第3天、第5天、第7天測量各組大鼠尾動脈血壓，第2周測量血壓2次，第3-12周每周至少測量血壓1次。測量前充分烤尾，采用 BP-100A型全自動大小鼠無創血壓測量系統，按照說明書要求測量大鼠清醒狀態下尾動脈收縮壓及舒張壓，3 min內測得 3 組數據，收縮壓差值不超過5 mmHg 方為有效數據，取 3 組有效數據的平均值。每次測量血壓均固定于相同時間段。

1.5 大鼠血藥濃度檢測

用藥干預后第3、5、7、14、28、56、88天采集藥物灌胃組和緩釋降壓組SHR眼內眥靜脈血，對應采血時間依次為灌藥后2、8、6、4、24、12、8 h。抗凝、離心，用Nexera X2型液相色譜儀測定血漿藥物濃度。

1.6 統計學處理

2 結果

2.1 藥物干預前和干預后各組大鼠體重比較

與正常對照組比較，模型對照組大鼠在干預前及干預第1-8周體重明顯降低(P<0.05或P<0.01)；干預1周時，緩釋降壓組大鼠體重較模型對照組明顯降低(P<0.05)，干預第2-12周時兩組體重差異均無統計學意義；從干預后第9周開始，各組大鼠體重無統計學差異。見圖1。

a：P<0.05，b：P<0.01，與正常對照組比較；

2.2 干預前各組大鼠血壓比較

干預前，與正常對照組比較，模型對照組、空白載體組、藥物灌胃組、緩釋降壓組SHR尾動脈收縮壓、平均動脈壓均明顯升高(P均<0.01)；5組舒張壓無統計學差異(P均>0.05)。與模型對照組比較，藥物灌胃組和緩釋降壓組SHR尾動脈收縮壓、平均動脈壓差別無統計學意義(P均>0.05)。與藥物灌胃組比較，緩釋降壓組SHR收縮壓、平均動脈壓差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 干預前各組大鼠血壓比較

*：與正常對照組比較，P<0.01

2.3 干預后各組大鼠尾動脈血壓比較

從干預后第5天開始至第88天，與模型對照組比較，緩釋降壓組SHR的收縮壓、舒張壓和平均動脈壓均明顯降低(P均<0.01)；藥物灌胃組、正常對照組與緩釋降壓組間收縮壓、舒張壓和平均動脈壓差異均無統計學意義(P均>0.05)。見圖2。

a：P<0.01，與模型對照組比較；b：P<0.01，與空白載體組比較

2.4 緩釋降壓制劑對大鼠血藥濃度的影響

藥物灌胃組大鼠血漿中氨氯地平濃度隨灌藥時間的推移而下降；灌藥后2 h，藥物灌胃組大鼠血漿中氨氯地平濃度可達到緩釋降壓組大鼠的4.5倍(t=5.71，P<0.01)。4 h及6 h后仍高于緩釋降壓組大鼠(4 h：t=2.86，P<0.05；6 h：t=5.43，P<0.01)，8、12 h與緩釋降壓組差異無統計學意義(t分別為2.01、1.71,P均>0.05),至24 h血藥濃度低于可測定水平的下限，明顯低于緩釋降壓組(t=2.36，P<0.05)。緩釋降壓組SHR血漿中氨氯地平濃度從埋植藥物后第3-88天，一直穩定在0.54～1.16 ng/mL。見圖3。

a：P<0.01，b：P<0.05，與藥物灌胃組比較

3 討論

目前，國內外開發的緩控釋降壓劑型有不少，如片劑(包括滲透泵型、骨架型、脈沖片)，膠囊，微丸微囊和脂質體等，這些藥物可使高血壓患者血壓24 h內維持在一定水平。但是這些類型的藥物不可掰斷或碾碎后服用，對于進食困難或鼻飼的患者不適宜，且此類藥物中有部分須空腹服用，否則會影響藥物的釋放，同時更容易出現明顯胃腸道不良反應[7-12]。而皮下埋植緩釋制劑已在避孕、腫瘤化療、戒毒等領域廣泛應用，其所表現出來的優勢同樣得到應用者的認可[13-18]。

本研究用聚己內酯制作緩釋藥劑載體，加入氨氯地平原藥，制成氨氯地平緩釋制劑，一次性埋植于SHR頸部背側皮下。在干預前及干預后1～8周，各組SHR體重低于正常對照組WKY大鼠，而各組SHR體重無統計學差異，說明組間大鼠體重的差異來源于大鼠種類的差別；這種差別在干預后第9周開始消失，說明SHR的體重增長隨月齡的增加可以達到與WKY大鼠同樣的速度；盡管干預1周時緩釋降壓組大鼠體重曾低于模型對照組，但于第2周開始，即與其他各組SHR無明顯差異；說明皮下埋植藥物或者口服氨氯地平干預并不影響大鼠體重的增長。

本實驗中，皮下埋植緩釋氨氯地平制劑第5天起即能達到與口服藥物同樣的降壓效果，血藥濃度從用藥后第3天起一直穩定在有效范圍內，波動在0.54～1.16 ng/mL，而口服藥物組大鼠血藥濃度波動范圍為0～5.2 ng/mL。由此可見，該緩釋制劑植入后可以維持穩定的藥效及藥代動力學至少88天。皮下埋植緩釋制劑可保持更為穩定的血藥濃度，因而既避免了因藥物峰值帶來的不良反應，如肝腎功能的損害，同時也避免了藥物低谷時導致的血壓控制不良，可以有效避免部分高血壓患者口服藥物治療過程中難以解決的晨峰血壓之類的問題。

本研究中SHR用氨氯地平原料藥配成溶液灌胃后2 h血藥濃度達到最高水平，隨后下降，于24 h后降至最低水平；呈現與人口服氨氯地平片后血藥濃度變化不同的特征，與吳建明等[19]報道的結果類似。其原因可能為① 由于用原料藥配制的溶液沒有片劑中所含的賦形劑，省去了藥片崩解所需的時間，進入胃腸道后即被吸收進入血循環；② 大鼠胃腸道吸收氨氯地平的速度較人類快，體內代謝該藥物的速度也快于人類，導致達峰時間提前，血藥濃度下降速率快于人類。另外，在應用氨氯地平5 d時，SHR血藥濃度達到穩態后，盡管氨氯地平血漿濃度維持在低至0.1 ng/mL的水平，仍能起到良好的降壓效果。其可能原因：盡管血藥濃度隨服藥后的時間而變化，但由于藥物的儲積現象導致靶組織中氨氯地平的濃度并不會出現太大的變化，因此規律用藥使組織中藥物濃度保持在一定的范圍，即可保持良好的降壓效果。

綜上所述，本實驗中制備的超長效緩釋氨氯地平制劑，只需皮下埋植1次即可持續平穩降壓數月甚至更長時間，經皮下組織吸收入血，可緩解由口服藥物帶來的胃腸道不適。下一步的研究將延長觀察時間，以了解該制劑是否可維持更長時間的藥效及其藥代動力學。