β1，3-N乙酰氨基葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶8表達(dá)與胃癌新輔助化療療效相關(guān)性研究

我國(guó)為胃癌的高發(fā)區(qū)域，流行病學(xué)研究顯示，胃癌在所有惡性腫瘤發(fā)病率中占第2位，在腫瘤相關(guān)死亡中占第3位。胃癌根治性切除術(shù)是目前唯一可能治愈胃癌的方法，但其遠(yuǎn)期結(jié)果仍不能令人滿(mǎn)意。有研究報(bào)道，新輔助化療可以改善病人遠(yuǎn)期預(yù)后。但值得注意的是部分病人對(duì)新輔助化療方案無(wú)效，不良反應(yīng)明顯，因此研究反映胃癌病人新輔助化療療效的指標(biāo)以準(zhǔn)確識(shí)別可受益病人至關(guān)重要。β1，3-N乙酰氨基葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶8（β 3GnT8）是一種新的糖基轉(zhuǎn)移酶基因，研究表明其可能介導(dǎo)惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。國(guó)內(nèi)有人報(bào)道β 3GnT8在胃癌組織中高表達(dá)，具有促進(jìn)胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移的作用，且與胃癌病人的不良預(yù)后有關(guān)。本研究評(píng)估β3GnT8表達(dá)與胃癌病人新輔助化療療效相關(guān)性，以探索胃癌病人新輔助化療療效預(yù)測(cè)因素。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入2013年1月至2014年7月于武漢市第一人民醫(yī)院胃腸外科住院確診為原發(fā)性胃癌的病人80例，其中男性45例，女性35例，年齡（63.37±11.06）歲，范圍為35～87歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡＞18歲；診斷符合中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)《胃癌規(guī)范化診療指南（試行）》；無(wú)遠(yuǎn)隔器官轉(zhuǎn)移；行胃癌根治性切除術(shù)且獲得癌組織及癌旁組織；初次診治病人，既往未行手術(shù)、化療及放療等相關(guān)治療；預(yù)計(jì)生存時(shí)間＞1年。排除標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)法耐受新輔助化療；伴其他類(lèi)型惡性腫瘤；嚴(yán)重肝、肺、腎等重要器官功能不全。所有病人及其近親屬均已簽署知情同意書(shū)，研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

1.2 治療方法

本研究中，根據(jù)美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)（NCCN）臨床實(shí)踐指南2011年版，病人新輔助化療方案為卡培他濱、多西他賽及奧沙利鉑（DOX方案）：第1～14天，口服卡培他濱（商品名希羅達(dá)，上海羅氏制藥有限公司，批次201004510，批號(hào)H20073023）1.0 g/m，2次/天；第1天靜脈滴注多西他賽（商品名多帕菲，齊魯制藥有限公司，批次20111324，批號(hào)H20041128）75 mg/m；第1天靜脈滴注奧沙利鉑（商品名艾恒，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批次20120916，批號(hào)H20050962）130 mg/m。每個(gè)治療周期為21 d，術(shù)前化療3個(gè)周期。治療期間常規(guī)行護(hù)肝和護(hù)胃等輔助治療，降低病人不良反應(yīng)。3個(gè)治療周期之后評(píng)估新輔助化療療效及不良反應(yīng)發(fā)生情況?；熃Y(jié)束3周后行外科手術(shù)治療。

1.3 β3GnT8表達(dá)檢測(cè)

共獲得80例胃癌組織和癌旁組織樣本，采用免疫組化法檢測(cè)胃癌病人癌組織及癌旁組織中β3GnT8和基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）的表達(dá)水平。免疫組化方法參考劉振華等。以磷酸緩沖鹽溶液（PBS）代替一抗作為陰性對(duì)照，已知陽(yáng)性標(biāo)本作陽(yáng)性對(duì)照。采用細(xì)胞染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分率進(jìn)行評(píng)分。細(xì)胞染色強(qiáng)度：0分（無(wú)染色），1分（弱染色），2分（中等染色），3分（強(qiáng)染色）。陽(yáng)性細(xì)胞百分率，0分（＜1%），1分（1%～33%），2分（＞33%～66%），3分（＞66%～100%）。蛋白表達(dá)的最終等級(jí)由染色強(qiáng)度評(píng)分和陽(yáng)性細(xì)胞百分率評(píng)分相加計(jì)算：陽(yáng)性（4～6分），陰性（0～3分）。

1.4 化療效果判定

近期療效：新輔助化療療效評(píng)估基于RECIST1.1評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。胃癌病人在行新輔助化療前、后分別行上腹部增強(qiáng)CT以對(duì)比病灶大小。療效等級(jí)分為以下四種：完全緩解：病灶完全消失；部分緩解：腫瘤長(zhǎng)徑縮減≥30%；病變進(jìn)展：腫瘤長(zhǎng)徑增加＞20%；病變穩(wěn)定：介于部分緩解與病變進(jìn)展之間。病變進(jìn)展定義為新輔助化療無(wú)效組，其余三種定義為有效組。遠(yuǎn)期療效：采用電話(huà)和門(mén)診隨訪相結(jié)合的方式，新輔助化療結(jié)束后每3個(gè)月隨訪1次。了解病人的生存狀況。隨訪截止日期為2019年7月。生存時(shí)間為死亡時(shí)間（或2019年7月）與首次新輔助化療時(shí)間的差值。

2 結(jié)果

2.1 癌組織與癌旁組織

β

3GnT8、MMP

-

2的表達(dá)水平

β3GnT8在胃癌組織表達(dá)陽(yáng)性率為83.75%（67例），在癌旁組織表達(dá)陽(yáng)性率為30.26%（23例）。MMP-2在胃癌組織表達(dá)陽(yáng)性率為81.25%（65例），在癌旁組織表達(dá)陽(yáng)性率為13.16%（10例）。β3GnT8、MMP-2在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于癌旁組織（

χ

=45.681、72.389，

P

＜0.001）。

2.2 β3GnT8表達(dá)與胃癌臨床參數(shù)

胃癌組織β 3GnT8和MMP-2的表達(dá)與性別、年齡、腫瘤部位無(wú)關(guān)（

P

＞0.05）。β3GnT8和MMP-2在低分化、Ⅲ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病人中表達(dá)陽(yáng)性表達(dá)率增加（

P

＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.3 β3GnT8表達(dá)與胃癌病人近期新輔助化療療效的關(guān)系

在所有行新輔助化療的80例胃癌病人中，完全緩解2例，部分緩解8例，疾病穩(wěn)定42例，疾病進(jìn)展28例。治療有效率為65.00%。β3GnT8陽(yáng)性表達(dá)組新輔助化療有效率為59.70%（40/67），且明顯低于β3GnT8陰性表達(dá)組92.31%（12/13）（

χ

=5.088，

P

=0.024）。MMP-2陽(yáng)性表達(dá)組新輔助化療有效率為58.46%（38/65），且明顯低于MMP-2陰性表達(dá)組93.33%（14/15）（

χ

=6.515，

P

=0.011）。

2.4 β3GnT8和MMP

-

2表達(dá)與胃癌病人總體生存相關(guān)性

Kaplan-Meier并log-rank分析顯示，β3GnT8高表達(dá)者中位生存時(shí)間為32個(gè)月，β3GnT8低表達(dá)者中位生存時(shí)間為60個(gè)月，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.001）。MMP-2高表達(dá)者中位生存時(shí)間為28個(gè)月，MMP-2低表達(dá)者中位生存時(shí)間為60個(gè)月，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.001）。

表1 β1，3-N乙酰氨基葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶8（β3GnT8）、基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）表達(dá)與胃癌病人80例臨床參數(shù)關(guān)系/例（%）

2.5胃癌病人多因素Cox分析

以生存狀況為因變量（0=存活，1=死亡），表1中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量為自變量，行多因素Cox回歸分析，發(fā)現(xiàn)較低分化程度、Ⅲ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、β3GnT8陽(yáng)性表達(dá)、MMP-2陽(yáng)性表達(dá)可增加新輔助化療胃癌病人死亡風(fēng)險(xiǎn)。見(jiàn)表2。

表2 胃癌病人多因素生存分析

3 討論

大規(guī)模臨床試驗(yàn)研究證實(shí)，圍術(shù)期新輔助化療可以降低病人TNM分期，改善其生存率。目前國(guó)內(nèi)外的臨床指南推薦在進(jìn)展期胃癌病人中應(yīng)用新輔助化療，極大改善了病人治療效果。然而，由于化療的不良反應(yīng)及病人的耐受性，相當(dāng)一部分病人無(wú)法完成常規(guī)治療周期的新輔助化療。在接受新輔助化療的病人中，僅有約30%可以達(dá)到臨床緩解。因此識(shí)別對(duì)新輔助化療敏感的胃癌病人對(duì)于改善臨床診療十分重要。

本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中β3GnT8、MMP-2的表達(dá)顯著高于癌旁組織，且β3GnT8、MMP-2的表達(dá)與胃癌的分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。β 3GnT8最初被稱(chēng)為β3GALT7，最早從人體肺組織cDNA庫(kù)中克隆出來(lái)。既往研究提示，β3GnT8在宮頸癌組織中的表達(dá)明顯高于正常組織，隨后有人報(bào)道β3GnT8在結(jié)直腸癌、肝癌和胃癌等腫瘤中的表達(dá)明顯增強(qiáng)，且β3GnT8與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移潛能之間存在相關(guān)性。在人胃癌細(xì)胞株中，MMP-2的表達(dá)可被β3GnT8調(diào)節(jié)。此外，β3GnT8介導(dǎo)跨膜糖蛋白147信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的能力已在胃癌細(xì)胞株SGC-7901中得到證實(shí)。然而，β3GnT8在胃癌侵襲中的調(diào)節(jié)機(jī)制和生化特性尚需進(jìn)一步探討。劉振華等報(bào)道β3GnT8在胃癌組織中的表達(dá)較癌旁組織增高，β3GnT8可能通過(guò)調(diào)控MMP-2的表達(dá)參與胃癌的侵襲、轉(zhuǎn)移，與胃癌病人的不良預(yù)后有關(guān)。本研究結(jié)果與以上研究結(jié)果均一致。

本研究發(fā)現(xiàn)β3GnT8和MMP-2陽(yáng)性表達(dá)組新輔助化療有效率為均明顯低于陰性表達(dá)組。進(jìn)一步的分析發(fā)現(xiàn)，β3GnT8、MMP-2表達(dá)是新輔助化療胃癌病人長(zhǎng)期生存的獨(dú)立影響因素，β3GnT8、MMP-2陽(yáng)性表達(dá)者死亡風(fēng)險(xiǎn)增加。表明在胃癌中，β3GnT8陽(yáng)性意味著新輔助化療療效受限，β3GnT8治療胃癌的一個(gè)潛在靶點(diǎn)。

綜上所述，胃癌組織β3GnT8表達(dá)是新輔助化療預(yù)后的獨(dú)立影響因素，β3GnT8陽(yáng)性表達(dá)者化療療效差，死亡風(fēng)險(xiǎn)增加。