表柔比星+奧沙利鉑+卡培他濱方案治療晚期胃癌療效與微小RNA-196a表達的關系

既往研究顯示，兩藥或三藥聯合化療方案可使晚期胃癌病人生存期延長。EOX方案（表柔比星+奧沙利鉑+卡培他濱）可改善胃癌病人預后。miRNA可通過靶向調控相應基因來促進或抑制癌基因表達，最終參與腫瘤疾病發(fā)生、發(fā)展。miR-196a是近些年發(fā)現的一種與胃癌有關的miRNA，與胃癌發(fā)生、侵襲、轉移等密切相關。為分析EOX方案治療晚期胃癌的療效與血清微小RNA-196a（miR-196a）表達的關系，本研究選取96例晚期胃癌病人進行了研究，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年3月至2015年1月南陽油田總醫(yī)院實施EOX方案化療的96例晚期胃癌病人，所有病人均接受4～6個周期的化療，依據實體瘤療效評價標準（RECIST）評價標準將病人分為有效組43例、無效組53例。96例晚期胃癌病人年齡范圍為44～75歲，年齡（59.2±12.0）歲，男61例、女35例。納入標準：①胃癌的診斷標準參考國內2013年《胃癌規(guī)范化診療指南（試行）》中的標準，病人病情均經過胃鏡取活組織病理學檢查證實；②病人年齡≤75歲；③TNM分期：Ⅲb期～Ⅳ期；④病人腫瘤晚期無法手術治療；⑤美國東部腫瘤協作組織（ECOG）評分＜2分；⑥本研究實施前與病人及其近親屬簽署知情同意書，本研究符合《世界醫(yī)學協會赫爾辛基宣言》相關要求。排除標準：①合并其他部位惡性腫瘤；②預計生存時間＜3個月；③腦血管病史；④嚴重的肝腎功能疾病；⑤對治療藥物嚴重不耐受。

1.2 化療方法

所有病人均接受4～6個周期的化療，化療方案為EOX方案，第1天給予病人45mg/m表柔比星（意大利Antibioticos S.p.A.，批次9912E1，批號X19990296）+70mg/m奧沙利鉑［齊魯制藥（海南）有限公司，批次12303，批號H20093168］靜脈滴注，1次/天；第1～14天給予病人310 mg/m卡培他濱（上海羅氏制藥有限公司，批次SH019，批號H20073024）口服，2次/天，21 d為1個周期。

1.3 評價、檢測方法

選用實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應（qRT-PCR）法檢測并對比兩組化療前后的血清miR-196a表達水平，收集兩組病人化療前后外周靜脈血各4 mL，選用Trizol法進行總RNA提取操作，瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA完整性，引物設計通過Primer Premier5.0軟件實現，PCR反應體系如下：應用SYBR?Green方法逆轉錄出互補DNA（cDNA），后選擇SYBR?Premix Ex Taq TM II進行mi R-196a的Real Time PCR反應，miR-196a：逆轉錄引物，5′-CAGAAGGAATGCACAGCCAACAACA-3′；正向引物，5′-CGTCAGAAGGAATGATGCACAG-3′；反向引物，5′-ACCTGCGTAGGTAGGTTTCATGT-3′；U6（內參）：逆轉錄引物，5′AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′；正向引物，5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′；反 向 引 物，5′AACGCTTCACGAATTT-3′；反應條件為：95℃5 min，95℃20 s，72℃30 s，72℃3 min，共進行36個循環(huán)，選用德國LC480熒光定量PCR儀檢測結果。采用相對熒光定量統計方法，采用2標準化法計算血清中miR-196a表達水平。同時檢測并記錄病人化療前的臨床病理學特征參數，采用logistic回歸分析法探討血清miR-196a表達水平對化療效果的影響。

參照RECIST實體瘤療效評價標準分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩(wěn)定（SD）、疾病進展（PD），CR+PR為有效。

2 結果

2.1 不同化療效果病人的基線資料、病理學參數比較

有效組和無效組TNM分期、腫瘤分化程度差異有統計學意義（

P

＜0.05）；有效組和無效組病人的年齡、性別、化療周期、手術史、病灶直徑、ECOG評分比較，差異無統計學意義（

P

＞0.05）。見表1。

表1 不同化療效果晚期胃癌96例基線資料、病理學參數比較

2.2 不同化療效果的病人血清miR

-

196a表達水平比較

經過化療，有效組CR 2例、PR 41例，無效組SD 47例、PD 6例；有效組病人的miR-196a治療前后差值顯著高于無效組（

P

＜0.05）。見表2。

表2 不同化療效果晚期胃癌96例血清miR-196a表達水平比較/±s

表3 EOX方案治療晚期胃癌96例的療效與miR-196a的多因素logistic回歸分析

2.3 EOX方案治療晚期胃癌療效與miR

-

196a的多因素分析

以化療效果作為因變量（1=無效，0=有效），TNM分期、腫瘤分化程度、miR-196a表達水平作為自變量進行l(wèi)ogistic回歸分析，自變量采取向前條件法篩選，結果顯示，TNM分期增高、分化程度低、化療前miR-196a高表達水平是晚期胃癌病人EOX方案化療效果不佳的獨立危險性因素（

P

＜0.05）。見表3。

3 討論

本組研究中，給予晚期胃癌病人EOX方案化療后，總有效率約為44.79%，提示EOX方案是一種有效的晚期胃癌化療方案。近些年的研究顯示，多種藥物合用化療方案的總有效率一般在33%～76%之間，本組研究與其相似。本組研究還發(fā)現，有效組和無效組病人的TNM分期、腫瘤分化程度比較，差異有統計學意義，但有效組和無效組病人的年齡、性別、化療周期、手術史、病灶直徑、ECOG評分比較，差異無統計學意義，表明TNM分期、腫瘤分化程度與病人EOX化療療效密切相關，分析其原因可能為：（1）TNM分期越高病人遠端轉移病灶越多，化療藥物作用靶區(qū)越多，其總體療效將減退；（2）分化程度低提示病人惡性程度增高，癌細胞活性更強，對化療藥物的拮抗能力也隨之增強。

miRNA是內源性非編碼RNA的一種，其片段較小，且難以被RNA酶降解，具有較高的穩(wěn)定性，因此常被臨床用于腫瘤等疾病的檢測、診斷工作中。miR-196a是基因編碼位于人17號染色體的一種miRNA，是體細胞分化的重要調節(jié)因子。食管癌等惡性腫瘤病灶內存在明顯miR-196a高表達情況，并且高表達的miR-196a可增強RAP1A基因表達，而RAP1A基因可通過作用于基質金屬蛋白酶2來促進食管癌細胞分化、轉移。有研究發(fā)現，胃癌組織及細胞系內的miR-196a表達水平顯著上升，并且與病人疾病分期、病灶體積等成正相關。體外實驗顯示，靶向抑制miR-196a的表達可負向調控p27基因表達，進而抑制胃癌細胞的增殖。這些研究均顯示，miR-196a是胃癌發(fā)生、發(fā)展的重要影響因子。本組研究中，有效組病人在化療前、化療后的血清miR-196a表達水平均顯著低于無效組，并且有效組病人的miR-196a治療前后差值顯著高于無效組，這表明miR-196a表達水平與EOX化療方案療效密切相關，該指標或可用于提示化療療效。我們推測miR-196a低表達病人可能具有更高的化療敏感性，這可能是本組研究化療前miR-196a低表達的病人獲得更高化療療效的原因。有研究發(fā)現，給予胃癌病人化療干預后，病人miR-196a表達水平顯著下降，并且miR-196a低表達的病人生存期顯著長于高表達病人，我們的結論與其一致。logistic回歸分析發(fā)現，TNM分期增高、分化程度低、化療前miR-196a高表達水平是晚期胃癌病人EOX方案化療效果不佳的獨立危險性因素，因此臨床需根據晚期胃癌病人分期、分化程度以及miR-196a表達水平來合理確定化療方案。

本研究通過檢測研究發(fā)現，EOX方案化療后，晚期胃癌病人血清miR-196a表達水平顯著下降，與病人化療的療效密切相關，臨床或可通過檢測miR-196a來分析病人化療療效。本研究的創(chuàng)新之處在于發(fā)現血清miR-196a低表達的胃癌病人可能具有更高的EOX化療敏感性，但其機制我們尚無結論，這可能有待我們下一步的研究完善。

綜上所述，對于晚期胃癌病人，血清miR-196a在經EOX方案化療后會顯著降低，并且與病人化療效果具有一定的相關性。