慢性阻塞性肺疾病患者外周血淋巴細胞亞群及免疫細胞表達變化與肺功能的相關性研究

馮軍軍，李鑫，邵旦

作者單位： 315200 寧波，寧波市鎮海區中醫醫院

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是呼吸科常見疾病，近年來該病的發病率呈增長趨勢[1]。多數學者認為在COPD 的發生及發展過程中，存在不同程度的炎性反應，且T 細胞水平異常及免疫失衡是導致COPD 發生的重要因素[2]。研究表明，T 淋巴細胞是反映機體細胞免疫功能的有效指標之一，CD4+能促進細胞免疫功能的發揮，而CD8+則對細胞免疫功能具有抑制作用，抑制性T 細胞（Treg）及輔助性T 細胞17（Th17）常參與患者的各種自身免疫性疾病和慢性感染性疾病，也在COPD的發病過程中發揮著重要作用[3]。本研究通過檢測穩定期與急性期COPD 患者T 淋巴細胞亞群及免疫細胞水平的變化，探討其與肺功能指標的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2018年10月至2019年10月寧波市鎮海區中醫醫院收治的160例COPD患者，其中穩定期患者（穩定期組）80 例，急性期患者（急性期組）80 例。穩定期組男51 例，女29 例；年齡51～69歲，平均（58.5±7.0）歲。急性期組男48 例，女32例；年齡53 ～69 歲，平均（59.3±7.3）歲。另外選取同期健康體檢者95 例作為對照組，其中男68 例，女27 例；年齡54～68歲，平均（60.9±6.1）歲。3 組一般臨床資料差異無統計學意義（P ＞0.05）。

1.2 納入及排除標準 納入標準：（1）符合中華醫學會呼吸病學分會《慢性阻塞性肺疾病診治指南（2013 年修訂版）》[4]中的COPD診斷標準，具有呼吸困難、咳嗽及咳痰等臨床表現，經肺功能、CT 等檢查確診；（2）對本研究知情，且自愿簽署知情同意書。排除標準：（1）合并非COPD 引起的高血壓、糖尿病及其他臟器病變者；（2）其他系統感染、免疫功能異常及惡性腫瘤者。

1.3 方法

1.3.1 淋巴細胞亞群及免疫細胞水平檢測方法 采集所有患者晨起空腹血，使用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，取FCM專用試管2 支，分別加入單克隆三色抗體CD4-FITC/CD8-FE 5 l，均加入30 l抗凝血，使用流式細胞檢測儀（Cyto-FLEX LX 型，由美國貝克曼庫爾特公式生產）檢測患者外周血T 淋巴細胞亞群（CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）水平；淋巴細胞分離液分離出外周單核細胞，行表面染色，避光孵育20 min，上機檢測Treg及Th17 水平。采用ELISA 法檢測所有患者的中性粒細胞及巨噬細胞水平。

1.3.2 肺功能檢測方法 所有患者均由同一專職醫師行肺功能檢測，肺功能測定前24h 需停用口服平喘藥物。肺功能測定值以吸入沙丁胺醇200 g，10min后檢測數值為標準，檢測所有患者第1 秒用力呼氣容積占預計值百分比（FEV1%）、用力肺活量占預計值百分比（FVC%）及第1 秒用力呼氣容積與用力肺活量比值（FEV1/FVC）。

1.4 統計方法 采用SPSS 19.0 統計軟件進行分析，計量資料以均數±標準差表示，多組比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t 檢驗；采用Pearson 相關分析。P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3 組淋巴細胞亞群比較 3 組C D4+、CD8+、CD4+/CD8+、Treg 及Th17 水平差異均有統計學意義（均P ＜0.05），急性期組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平均低于穩定期組和對照組（均P ＜0.05），穩定期組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平均低于對照組（均P ＜0.05）；急性期組Th17 水平均高于穩定期組及對照組（均P ＜0.05），Treg 水平均低于穩定期組與對照組（均P＜0.05）；穩定期組Th17水平高于對照組（P＜0.05），Treg 水平低于對照組（P ＜0.05）。見表1。

2.2 3 組中性粒細胞及巨噬細胞水平比較 3 組中性粒細胞及巨噬細胞水平差異均有統計學意義（均P＜0.05），急性期組中性粒細胞及巨噬細胞水平均高于穩定期組及對照組（均P ＜0.05）。見表2。

2.3 3 組肺功能指標比較 3 組FVC%差異無統計學意義（P ＞0.05），急性期組FEV1%、FEV1/FVC 水平均低于穩定期組和對照組（均P ＜0.05），穩定期組FEV1%、FEV1/FVC 水平均低于對照組（均P ＜0.05）。見表3。

2.4 相關性分析 CD4+/CD8+、Treg 水平與FEV1%、FEV1/FVC 水平呈正相關（均P ＜0.05），CD8+、Th17、中性粒細胞水平與FEV1%、FEV1/FVC 水平呈負相關（均P ＜0.05）。見表4。

表1 3 組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、Treg、Th17 水平比較 %

表2 3 組中性粒細胞及巨噬細胞水平比較 %

3 討論

目前，COPD 的發病機制尚未完全明確，多數研究者認為其發病機制主要與炎癥機制及免疫機制等有關[5]。本研究結果顯示3組受試者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平差異均有統計學意義（均P ＜0.05），急性期組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平均明顯低于穩定期組和對照組，穩定期組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平均低于對照組（均P ＜0.05）。

3 組Treg、Th17 水平差異均有統計學意義（均P＜0.05），急性期組Th17 水平均高于穩定期組及對照組，Treg 水平低于穩定期組與對照組；穩定期組Th17水平高于對照組，Treg水平低于對照組。這說明外周血T 淋巴細胞對COPD 的發病產生作用，且與患者持續的氣道炎癥及肺泡損傷密切相關。當患者機體發生炎性反應后，為提高機體對細菌的吞噬能力，機體會產生大量的中性粒細胞[6]。而巨噬細胞亦能通過對細胞殘片及病原體的吞噬作用，激活淋巴球及其他免疫細胞，對病原體做出反應[7]。且Th17 可通過分泌白細胞介素等炎性細胞因子來募集巨噬細胞及中性粒子，加大炎性反應。本研究結果顯示CD4+/CD8+、Treg 水平與FEV1%、FEV1/FVC 水平均呈正相關（均P ＜0.05）；CD8+、Th17、中性粒細胞水平與FEV1%、FEV1/FVC水平均呈負相關（均P＜0.05）。這說明T淋巴細胞亞群相關細胞因子、免疫細胞與肺功能損傷相關，分析原因可能由于患者促炎因子與自身免疫細胞因子比例失衡，導致COPD患者存在長期的慢性炎性反應，損傷上皮細胞，造成氣道重塑，最終損傷肺功能。綜上所述，COPD 患者肺功能與T淋巴細胞亞群及中性粒細胞水平關系密切，及早發現并調整患者細胞因子及免疫失衡狀態，對臨床早期治療COPD 并監測臨床效果有指導意義。

表3 3 組肺功能指標比較

表4 T 淋巴細胞亞群及免疫細胞表達與肺功能指標的相關性