寬苞糙蘇根降三萜化學(xué)成分研究

鄧瑞雪，黃玉陽，許藝凡，劉 普

寬苞糙蘇根降三萜化學(xué)成分研究

鄧瑞雪，黃玉陽，許藝凡，劉 普*

洛陽市天然產(chǎn)物功能因子研究及產(chǎn)品開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南科技大學(xué)化工與制藥學(xué)院，河南 洛陽 471023

研究寬苞糙蘇var根降三萜類化學(xué)成分。用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、以及制備高效液相色譜等多種色譜分離手段進(jìn)行分離純化，用有機(jī)波譜手段鑒定分離得到的化合物結(jié)構(gòu)。從寬苞糙蘇根的95%乙醇提取物中分離得到8個(gè)降三萜類化合物，分別鑒定為糙蘇醛A（1）、糙蘇酮（2）、糙蘇四醇A（3）、糙蘇四醇 B（4）、糙蘇六醇A（5）、糙蘇六醇B（6）、糙蘇六醇C（7）、糙蘇六醇D（8）。化合物1為新化合物，化合物3、4、6～8為首次從寬苞糙蘇中分離得到的化合物，這些化合物表現(xiàn)出一定的腫瘤細(xì)胞抑制活性。

寬苞糙蘇；降三萜；抗腫瘤；糙蘇醛A；糙蘇四醇A；糙蘇六醇B

糙蘇屬Linn.是被子植物門木蘭綱野芝麻亞族下的1個(gè)屬，該屬植物多為多年生草本，全球共有約100種，分布于地中海，亞洲中部至東部。我國有60余種（變種/變型），分布于全國各地，西南各省區(qū)種類最多[1-2]。藥用植物糙蘇Turcz. 生長于疏林下或草坡上，廣泛分布在全國各地。民間以糙蘇根入藥，性苦、辛，微溫，具有消腫、生肌、續(xù)筋、接骨，以及補(bǔ)肝、腎，強(qiáng)腰膝、安胎等功效[3-4]。研究發(fā)現(xiàn)，藥用植物糙蘇中主要化學(xué)成分有苯乙醇苷類、三萜類、二萜類、環(huán)烯醚萜苷類、黃酮類、多糖和揮發(fā)油等[5-15]。課題組前期研究了湖北恩施土家藥“四楞麻”（糙蘇根）的化學(xué)成分及其活性，從中分離得到一系列結(jié)構(gòu)新穎的28-降齊墩果烷型螺環(huán)三萜（降三萜）類化合物，活性測試顯示該類化合物具有較好的生物活性[16-21]。寬苞糙蘇Turcz. var.Sun ex C. H. Hu為藥用植物糙蘇的1個(gè)變種。課題組前期對(duì)寬苞糙蘇的化學(xué)成分進(jìn)行了初步研究，發(fā)現(xiàn)其中也含有降三萜類化合物[22]。為了進(jìn)一步闡明寬苞糙蘇降三萜類化合物結(jié)構(gòu)及活性特點(diǎn)，本研究對(duì)其降三萜類化學(xué)成分進(jìn)行了分離鑒定，采用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜以及制備高效液相色譜等多種分離方法，從寬苞糙蘇的95%乙醇提取物中分離得到8個(gè)降三萜類化合物（圖1），分別鑒定為糙蘇醛A（phlomisal A，1）、糙蘇酮（phlomisone，2）、糙蘇四醇A（phlomistetraol A，3）、糙蘇四醇A（phlomistetraol B，4）、糙蘇六醇A（phlomishexaol A，5）、糙蘇六醇B（phlomishexaol B，6）、糙蘇六醇C（phlomishexaol C，7）和糙蘇六醇D（phlomishexaol D，8）。其中，化合物1為新化合物，化合物3、4、6～8為首次從寬苞糙蘇中分離得到的化合物，這些降三萜類化合物表現(xiàn)出一定的抑制腫瘤細(xì)胞活性。該研究為寬苞糙蘇的研究開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。

圖1 化合物1～8的結(jié)構(gòu)

1 儀器與材料

Bruker AVANCE 400 MHz核磁共振儀（Bruker公司，瑞士）；Alliance 2695，Quattro Micro TM ESI液質(zhì)聯(lián)用色譜儀（Waters公司，美國）；Waters 600制備高效液相色譜儀（Waters公司，美國）；制備HPLC色譜柱：YMC SL12S05-2520 WT柱（250 mm×20 mm，5 μm，YMC公司），YMC ODS-A柱（250 mm×22 mm，10 μm，YMC公司）；凝膠色譜柱（Toyopearl HW-40C，Tosoh公司）；柱色譜和薄層色譜用硅膠（青島海洋化工廠）；所用試劑均為分析純。

藥材根于2015年9月采自河南省嵩縣車村鎮(zhèn)，由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院高致明教授鑒定寬苞糙蘇Turcz. var.Sun ex C. H. Hu的根，標(biāo)本（FNS2015012）存放于河南科技大學(xué)天然產(chǎn)物資源標(biāo)本館。

實(shí)驗(yàn)用人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞、人宮頸癌HeLa細(xì)胞、小鼠成纖維L929細(xì)胞、人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞、人結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞、人臍靜脈內(nèi)皮HUVEC和人正常干細(xì)胞WRL-68由河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院提供。其他生化試劑購自洛陽市洛龍區(qū)科邁教學(xué)儀器經(jīng)銷部。

2 提取與分離

取自然干燥的寬苞糙蘇根10.5 kg，粉碎后用95%乙醇加熱回流提取3次，每次4 h，提取液減壓濃縮得乙醇粗提物浸膏。取乙醇粗提物加入適量的蒸餾水?dāng)嚢瑁苽涞玫揭掖蓟鞈乙骸Ｈ缓笠来渭尤氩煌軇┓謩e萃取，收集萃取液減壓濃縮除去溶劑，得石油醚浸膏55 g、醋酸乙酯浸膏83 g、正丁醇浸膏410 g。

取糙蘇根醋酸乙酯萃取層浸膏80 g，采用硅膠柱色譜分離，分別用氯仿-甲醇（15∶1、12∶1、9∶1、5∶1、3∶1、1∶1）梯度洗脫，經(jīng)過薄層色譜（TLC）分析合并獲得到22個(gè)流分Fr. 1～22。Fr. 8（3.6 g）采用硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇（15∶1、13∶1、11∶1、9∶1、7∶1、5∶1）梯度洗脫，得到組分Fr. 8.1～8.8。Fr. 8.3（569 mg）采用半制備高效液相色譜分離 [體積流量5 mL/min，甲醇-水（3∶7），色譜柱ODS-AQ]，得到化合物3（R＝12.65 min，14.6 mg）和6（R＝18.23 min，12.3 mg）。Fr. 8.6（765 mg）采用半制備高效液相色譜分離[體積流量5 mL/min，甲醇-水（3∶7），色譜柱ODS-AQ]，得到化合物4（R＝9.36 min，8.9 mg）、7（R＝12.37 min，20.3 mg）和8（R＝17.66 min，15.4 mg）。Fr. 12（2.5 g）經(jīng)過TLC分析，采用半制備高效液相色譜分離[體積流量5 mL/min，流動(dòng)相甲醇-水（4∶6）]，色譜柱ODS-AQ]，得到化合物1（18.5 mg）。Fr. 14（5.8 g）采用硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇（8∶1、6∶1、4∶1、5∶1、3∶1、1∶1）梯度洗脫，得到組分Fr. 14.1～14.4。Fr. 14.4以半制備高效液相色譜分離[體積流量5 mL/min，流動(dòng)相甲醇-水（8∶2），色譜柱ODS-AQ]，得到化合物2（R＝15.61 min，35.6 mg）。Fr. 17（3.3 g）經(jīng)過Sephadex LH-20凝膠柱分離得到流分Fr. 17.1～17.4，F(xiàn)r. 17.4采用半制備高效液相色譜分離[體積流量5 mL/min、流動(dòng)相甲醇-水（4∶6）、色譜柱ODS-AQ]，得到化合物5（R＝13.47 min，9 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1的1H-NMR (600 MHz, C5D5N) 表明化合物有5個(gè)甲基單峰信號(hào)H0.91 (3H, s), 0.97 (3H, s), 1.02 (3H, s), 1.17 (3H, s), 1.34 (3H, s)；3個(gè)與吸電子相連次甲基質(zhì)子峰信號(hào)H4.18 (1H, brs), 4.51 (1H, m), 5.22 (1H, br s)；1個(gè)和吸電基團(tuán)相連的亞甲基質(zhì)子信號(hào)H4.33 (2H, d,= 11.0 Hz)；1個(gè)雙鍵質(zhì)子信號(hào)H6.22 (1H, brs) 和1個(gè)醛基質(zhì)子信號(hào)H10.17 (1H, s)。

化合物1的13C-NMR (150 MHz, C5D5N) 和DEPT譜數(shù)據(jù)，在低磁場區(qū)域可以觀測到1個(gè)酮羰基碳信號(hào)C221.8，1個(gè)醛羰基碳信號(hào)C205.5 (s)] 和1個(gè)雙鍵碳信號(hào)C119.3 (d), 142.0 (s)；還可以在中低磁場區(qū)域觀測到3個(gè)吸電子基團(tuán)取代次甲基碳信號(hào)C65.6, 74.7, 69.3和1個(gè)吸電基團(tuán)取代的亞甲基碳信號(hào)C63.3；較高場可以看到5個(gè)甲基碳信號(hào)C16.2, 17.7, 22.5, 28.8, 25.3；9個(gè)亞甲基的碳信號(hào)C45.8, 17.9, 34.2, 23.3, 27.4, 35.3, 39.4, 41.0, 50.3，2個(gè)次甲基的碳信號(hào)C42.6, 46.4；6個(gè)季碳信號(hào): 59.1, 39.3, 38.5, 43.9, 43.0, 44.9（表1）。以上波譜數(shù)據(jù)顯示該化合物的碳數(shù)目為29，其中存在1個(gè)雙鍵碳信號(hào)，4個(gè)與羥基基團(tuán)相連接的碳信號(hào)，1個(gè)醛羰基碳信號(hào)和1個(gè)酮羰基碳信號(hào)。

從以上波譜數(shù)據(jù)信息可以看出化合物1和從糙蘇中分離得到的28-降齊墩果烷型螺環(huán)三萜類化合物波譜特征相似[16-21]，因此推測化合物1也為齊墩果烷型的降三萜類化合物。從化合物的氫譜數(shù)據(jù)和碳譜數(shù)據(jù)可以看出，化合物1與從該植物中分離得到的降三萜類化合物phlomisone的核磁共振數(shù)據(jù)非常相似[20-21]。與化合物phlomisone相比，化合物1少了一組被羥基取代的次甲基質(zhì)子信號(hào)和與吸電子基團(tuán)氧相連的碳信號(hào)，多了1個(gè)醛基質(zhì)子信號(hào)和醛羰基碳信號(hào)，推測化合物1可能為化合物phlomisone中的1個(gè)仲醇基團(tuán)被氧化為醛基基團(tuán)。

從化合物1的HMBC相關(guān)可以推出，化合物1分子中的4個(gè)羥基分別連在C-2、C-3、C-18和C-23上（表1和圖2）。H-19 到C-18、C-20、C-21和C-22的HMBC相關(guān)，從H-29到C-19, C-20和C-21的HMBC相關(guān)，以及從H-22到C-18, C-19, C-20和C-21的HMBC相關(guān)可以推測酮羰基在C-21位上。同樣，從化合物1的H-23到C-24, H-3到C-24, H-5到C-24的HMBC相關(guān)可以看出，化合物1中醛基連接在C-24位。從H-5和H-23的NOESY相關(guān)可以推測C-23位有羥基取代。

表1 化合物1的核磁共振數(shù)據(jù)(600/150 MHz, C5D5N)

圖2 化合物1的主要HMBC和NOESY相關(guān)

化合物1的相對(duì)構(gòu)型可以通過NOESY相關(guān)來確定。從化合物1中H-2和H-25，以及H-3和H-25之間的NOESY相關(guān)可以推測C-2和C-3的羥基為α構(gòu)型；從H-18和H-27的NOESY相關(guān)可以推測C-18的羥基為β構(gòu)型。因此化合物1的相對(duì)構(gòu)型與文獻(xiàn)報(bào)道的化合物phlomisone一致[20-21]。故化合物1鑒定為(17)-2α,3α,18β,23-tetrahydroxy-19(18→17)- abeo-28-norolean-12-en-21-oxo-24-aldehyde，通過檢索SciFinder，發(fā)現(xiàn)該化合物為未見文獻(xiàn)報(bào)道的新化合物，命名為糙蘇醛A。

化合物2：白色晶體（甲醇）；mp 289.5～290.5 ℃；ESI-MS:513 [M＋Na]+，分子式為C29H46O6；1H-NMR (400 MHz, C5D5N): 0.97 (3H, s, H-26), 1.10 (3H, s, H-27), 1.18 (3H, s, H-25), 1.22 (3H, s, H-29), 1.39 (3H, s, H-30), 1.90, 2.55 (各1H, d,= 13.5 Hz, H-19), 2.21, 2.75 (各1H, d,= 17.6 Hz, H-22), 4.10, 4.27 (各1H, d,= 11.0 Hz, H-24), 4.25 (1H, brs, H-18), 4.44, 4.65 (各1H, d,= 11.1 Hz, H-23), 4.52 (1H, m, H-2), 5.14 (1H, brs, H-3), 6.25 (1H, brs, H-12)；13C-NMR (100 MHz, C5D5N): 44.0 (C-1), 66.9 (C-2), 74.3 (C-3), 48.1 (C-4), 45.5 (C-5), 19.5 (C-6), 35.3 (C-7), 40.3 (C-8), 48.5 (C-9), 38.8 (C-10), 24.1 (C-11), 120.0 (C-12), 142.7 (C-13), 44.7 (C-14), 28.3 (C-15), 36.1 (C-16), 43.7 (C-17), 75.5 (C-18), 51.1 (C-19), 45.8 (C-20), 222.1 (C-21), 41.8 (C-22), 69.8 (C-23), 64.7 (C-24), 18.0 (C-25), 18.3 (C-26), 23.5 (C-27), 26.2 (C-28), 29.5 (C-29)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致[20-21]，故鑒定化合物2為糙蘇酮。

化合物3：白色無定形粉末；ESI-MS:483 [M＋Na]+，分子式為C29H48O4；1H-NMR (400 MHz,CD3OD): 0.80 (3H, s, H-24), 0.98 (3H, s, H-26), 1.02 (3H, s, H-29), 1.03 (3H, s, H-30), 1.08 (3H, s, H-25), 1.14 (3H, s, H-27), 3.41, 3.54 (各1H, d,= 11.0 Hz, H-23), 3.61 (1H, brs, H-3), 3.90 (2H, m, H-2, 18), 5.78 (1H, brs, H-12)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 42.7 (C-1), 67.3 (C-2), 78.9 (C-3), 42.7 (C-4), 44.5 (C-5), 19.1 (C-6), 34.7 (C-7), 40.8 (C-8), 48.3 (C-9), 39.3 (C-10), 24.0 (C-11), 119.2 (C-12), 143.7 (C-13), 45.4 (C-14), 28.2 (C-15), 37.1 (C-16), 51.2 (C-17), 76.4 (C-18), 53.1 (C-19), 39.9 (C-20), 43.1 (C-21), 30.8 (C-22), 71.4 (C-23), 17.8 (C-24), 17.9 (C-25), 18.3 (C-26), 23.6 (C-27), 30.5 (C-28), 30.7 (C-29)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致[20]，故鑒定化合物3為糙蘇四醇A。

化合物4：白色無定形粉末；ESI-MS:483 [M＋Na]+，分子式為C29H48O4；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 0.71 (3H, s, H-24), 0.98 (3H, s, H-25), 1.02 (3H, s, H-29), 1.04 (3H, s, H-30), 1.10 (3H, s, H-26), 1.12 (3H, s, H-27), 3.26, 3.51 (各1H, d,= 11.0 Hz, H-23), 3.38 (1H, d,= 9.6 Hz, H-3), 3.74 (1H, m, H-2), 3.90 (1H, brs, H-18), 5.78 (1H, brs, H-12)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 48.1 (C-1), 69.8 (C-2), 78.3 (C-3), 44.2 (C-4), 48.2 (C-5), 19.1 (C-6), 34.6 (C-7), 40.7 (C-8), 48.6 (C-9), 39.0 (C-10), 24.1 (C-11), 119.2 (C-12), 143.7 (C-13), 45.3 (C-14), 28.1 (C-15), 37.0 (C-16), 31.2 (C-17), 76.4 (C-18), 53.1 (C-19), 39.8 (C-20), 43.1 (C-21), 30.7 (C-22), 66.3 (C-23), 14.1 (C-24), 18.1 (C-25), 18.2 (C-26), 23.7 (C-27), 30.5 (C-28), 30.5 (C-29)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致[20]，故鑒定化合物4為糙蘇四醇B。

化合物5：白色無定形粉末；ESI-MS:515 [M＋Na]+，分子式為C29H48O6；1H-NMR (400 MHz, C5D5N): 1.09 (3H, s, H-27), 1.12 (3H, s, H-26), 1.19 (3H, s, H-25), 1.27 (3H, s, H-30), 1.32 (3H, s, H-29), 4.14, 4.28 (各1H, d,= 11.1 Hz, H-24), 4.48 (1H, m, H-2), 4.50, 4.66 (各1H, d,= 11.1 Hz, H-23), 4.53 (1H, brs, H-18), 4.75 (1H, s, H-19), 4.92(1H, brs, H-3), 6.36 (1H, brs, H-12)；13C-NMR (100 MHz, C5D5N): 44.0 (C-1), 67.1 (C-2), 74.3 (C-3), 48.1 (C-4), 45.5 (C-5), 19.6 (C-6), 35.2 (C-7), 40.4 (C-8), 48.6 (C-9), 38.8 (C-10), 24.2 (C-11), 119.2 (C-12), 144.3 (C-13), 44. 5 (C-14), 27.3 (C-15), 29.3 (C-16), 51.9 (C-17), 73.8 (C-18), 82.7 (C-19), 43.1 (C-20), 38.8 (C-21), 28.4 (C-22), 69.6 (C-23), 64.8 (C-24), 17.9 (C-25), 18.4 (C-26), 23.6 (C-27), 22.5 (C-28), 29.8 (C-29)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致[20]，故鑒定化合物5為糙蘇六醇A。

化合物6：白色無定形粉末；ESI-MS/: 515 [M＋Na]+，分子式為C29H48O6；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 0.96 (3H, s, H-26), 0.97 (3H, s, H-30), 1.02 (3H, s, H-27), 1.06 (3H, s, H-25), 1.14 (3H, s, H-29), 3.45 (1H, d,= 4.1 Hz, H-21), 3.60, 3.70 (各1H, d,= 11.1 Hz, H-24), 4.16 (2H, m, H-2, 18), 3.71, 3.91 (各1H, d,= 11.1 Hz, H-23), 4.02 (1H, brs, H-3), 5.83 (1H, brs, H-12)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 43.0 (C-1), 67.2 (C-2), 73.8 (C-3), 48.0 (C-4), 45.1 (C-5), 19.6 (C-6), 35.3 (C-7), 40.8 (C-8), 48.8 (C-9), 39.1 (C-10), 24.2 (C-11), 120.1 (C-12), 143.1 (C-13), 45.0 (C-14), 28.5 (C-15), 38.5 (C-16), 48.5 (C-17), 75.2 (C-18), 50.1 (C-19), 45.1 (C-20), 82.0 (C-21), 39.5 (C-22), 69.1 (C-23), 64.6 (C-24), 17.7 (C-25), 18.1 (C-26), 23.3 (C-27), 24.1 (C-28), 29.3 (C-29)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致[20]，故鑒定化合物6為糙蘇六醇B。

化合物7：白色無定形粉末；ESI-MS/: 515 [M＋Na]+，分子式為C29H48O6；1H-NMR (400 MHz, C5D5N): 1.08 (3H, s, H-27), 1.15 (3H, s, H-26), 1.20 (3H, s, H-25), 1.29 (3H, s, H-29), 1.31 (3H, s, H-30), 4.15, 4.28 (各1H, d,= 11.2 Hz, H-24), 4.51 (1H, m, H-2), 4.47, 4.65 (各1H, d,= 11.4 Hz, H-23), 4.55 (1H, brs, H-18), 4.76 (1H, s, H-19), 4.42 (1H, d,= 9.7 Hz, H-3), 6.31 (1H, brs, H-12)；13C-NMR (100 MHz, C5D5N): 48.3 (C-1), 69.6 (C-2), 80.1 (C-3), 48.4 (C-4), 49.1 (C-5), 19.5 (C-6), 34.3 (C-7), 40.4 (C-8), 48.6 (C-9), 38.7 (C-10), 24.2 (C-11), 119.2 (C-12), 144.3 (C-13), 44.6 (C-14), 27.3 (C-15), 28.4 (C-16), 51.5 (C-17), 73.8 (C-18), 82.8 (C-19), 43.2 (C-20), 38.8 (C-21), 29.4 (C-22), 69.6 (C-23), 64.5 (C-24), 18.1 (C-25), 18.4 (C-26), 23.7 (C-27), 29.9 (C-28), 22.5 (C-29)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致[19]，故鑒定化合物7為糙蘇六醇C。

化合物8：白色無定形粉末；ESI-MS/: 515 [M＋Na]+，分子式為C29H48O6；1H-NMR (400 MHz, C5D5N): 1.07 (3H, s, H-26), 1.08 (3H, s, H-29), 1.10 (3H, s, H-27), 1.21 (3H, s, H-25), 1.32 (3H, s, H-30), 3.84 (1H, m, H-21), 4.12, 4.26 (各1H, d,= 11.2 Hz, H-24), 4.33 (2H, m, H-2, 18), 4.46, 4.66 (各1H, d,= 11.2 Hz, H-23), 4.40 (1H, d,= 9.7 Hz, H-3), 6.33 (1H, brs, H-12)；13C-NMR (100 MHz, C5D5N): 48.4 (C-1), 69.5 (C-2), 80.2 (C-3), 48.3 (C-4), 49.1 (C-5), 19.6 (C-6), 34.2 (C-7), 40.3 (C-8), 48.6 (C-9), 38.8 (C-10), 24.1 (C-11), 119.7 (C-12), 143.5 (C-13), 44.6 (C-14), 28.2 (C-15), 38.1 (C-16), 49.7 (C-17), 74.6 (C-18), 49.9 (C-19), 44.9 (C-20), 81.5 (C-21), 39.8 (C-22), 69.7 (C-23), 64.8 (C-24), 17.9 (C-25), 18.3 (C-26), 23.5 (C-27), 29.5 (C-29), 25.0 (C-30)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致[19]，故鑒定化合物8為糙蘇六醇D。

4 抑制腫瘤細(xì)胞活性測試

采用MTT方法[23]，評(píng)價(jià)了分離得到的降三萜類化合物對(duì)待測細(xì)胞株的抑制作用。

降三萜類化合物抑制腫瘤細(xì)胞的活性見表2。研究結(jié)果顯示，分離得到的降三萜類化合物對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株均具有一定的抑制作用。所有8個(gè)化合物對(duì)3種腫瘤細(xì)胞A549、HT-29和HCT-116均具有較強(qiáng)的抑制作用，其IC50值均小于50 μg/mL；化合物1、2、4和6～8對(duì)腫瘤細(xì)胞株Hela和L929表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用。所有化合物對(duì)HUVEC和WRL-68細(xì)胞的抑制作用較弱，這表明降三萜類化合物對(duì)正常細(xì)胞株沒有明顯的毒性作用。

5 討論

采用多種分離方法，從寬苞糙蘇根的95%乙醇提取物中分離得到8個(gè)28-降齊墩果烷型螺環(huán)三萜類化合物，其中，化合物1為新化合物，化合物3、4和6～8為首次從寬苞糙蘇中分離得到的化合物。

28-降齊墩果烷型螺環(huán)三萜類化合物是一種結(jié)構(gòu)罕見的化合物，生源關(guān)系的研究推測該類化合物可能由齊墩果烷型三萜轉(zhuǎn)化得到[20]。28-降齊墩果烷型螺環(huán)三萜目前只在唇型科（Labiatae）糙蘇屬Linn. 植物Falc. ex Benth.[24]和Poir.[25]，鉤萼草屬Benth.植物Benth.[26]，鉤子木屬Kud. 植物(Rehd.) Kudo[27]以及益母草屬Linn.植物益母草Sweet[28]等植物中被分離得到。由于從這些植物中分離得到的該類化合物數(shù)量和質(zhì)量都比較少，尚未有關(guān)于該類型化合物活性研究的文獻(xiàn)報(bào)道。課題組從藥用植物糙蘇及其變種寬苞糙蘇中分離得到一系列28-降齊墩果烷型螺環(huán)三萜類化合物。從文獻(xiàn)報(bào)道可以看出，28-降齊墩果烷型螺環(huán)三萜目前只在唇形科植物中被發(fā)現(xiàn)，并在糙蘇屬植物中分布較多。上述研究揭示28-降齊墩果烷型螺環(huán)三萜類化合物有可能是唇形科，尤其是糙蘇屬植物中的具有代表性的活性成分，該類成分在糙蘇屬的其它物種中也可能有分布。因此有必要對(duì)28-降齊墩果烷型螺環(huán)三萜類化合物進(jìn)行深入的化學(xué)成分的分離和活性測定的研究。

表2 分離得到的化合物的抗腫瘤活性

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 中國植物志編輯委員會(huì). 中國植物志(第66卷) [M]. 北京: 科學(xué)出版社, 1977: 119-905.

[2] Li M X, Shang X F, Jia Z P,. Phytochemical and biological studies of plants from the genus[J]., 2010, 7(2): 283-301.

[3] 中國科學(xué)院植物研究所. 中國高等植物圖鑒（第二冊(cè)）[M]. 北京: 科學(xué)出版社, 1980: 650.

[4] 南京中醫(yī)藥大學(xué). 中藥大辭典[M]. 上海: 上海科學(xué)技術(shù)出版社, 2006: 3759.

[5] Shang X F, Wang J H, Li M X,. Antinociceptive and anti-inflammatory activities ofTurcz. extract [J]., 2011, 82(4): 716-721.

[6] 易進(jìn)海, 鐘熾昌, 羅澤淵, 等. 糙蘇屬和獨(dú)一味屬植物的化學(xué)成分及其分類學(xué)的意義 [J]. 中草藥, 1992, 23(7): 382-384.

[7] But P P H, Kimura T, Sung C K,.[M]. New Jersey: World Scientific Publishing, 1997: 137.

[8] 田光輝, 劉存芳, 賴普輝, 等. 糙蘇葉子揮發(fā)油成分及其生物活性的研究 [J]. 食品工業(yè)科技, 2008, 29(5): 106-109.

[9] 田光輝, 劉存芳, 危沖, 等. 中藥糙蘇中的多糖研究 [J]. 食品科技, 2009, 34(6): 206-209.

[10] Chu S S, Liu Q Z, Jiang G H,. Chemical composition and insecticidal activity of the essential oil derived fromagainst two grain storage insects [J]., 2013, 16(1): 51-58.

[11] Guo S J, Gao L M, Cheng D L. Iridoids from[J]., 2001, 56(2): 178-180.

[12] 趙靜, 楊秀偉, 付宏征, 等. 糙蘇化學(xué)成分的研究 [J]. 中草藥, 1999, 30(2): 3-5.

[13] 劉世旺, 付宏征, 林文翰. 糙蘇的化學(xué)成分研究 (I) [J]. 中草藥, 1999, 30(3): 3-5.

[14] 楊永利, 郭守軍, 孫坤, 等. 中藥糙蘇親水性化學(xué)成分的研究 [J]. 蘭州大學(xué)學(xué)報(bào), 2004, 40(2): 67-71.

[15] Ding M M, Yan F L, Tan J,. Two new dammarane-type glycosides from[J]., 2014, 28(1): 18-23.

[16] Liu P, Yao Z, Li H Q,. Four new nortriterpenoids from[J]., 2007, 90(3): 601-606.

[17] Liu P, Li L Y, Niu R Q,. Two novel nortriterpenes from the roots of[J]., 2008, 19(10): 1228-1230.

[18] Liu P, Deng R X, Yin W P,. A new nortriterpenoid from[J]., 2010, 46(4): 566-568.

[19] Deng R X, Duan W L, Liu P,. Secondary metabolites from the roots of[J]., 2011, 13(3): 230-237.

[20] Liu P, Yao Z, Zhang W,. Novel nortriterpenes from[J].(Tokyo), 2008, 56(7): 951-955.

[21] Liu P, Qiao W, Jia W,. (17)-2α,3α,18β,23,24- Pentahydroxy-19(18→17)-abeo-28-norolean-12-en-21- one from the rhizome of[J]., 2006, 62(3): o919-o921.

[22] 張麗娜, 鄧瑞雪, 王玉, 等. 寬苞糙蘇根化學(xué)成分研究 [J]. 中國藥學(xué)雜志, 2019, 54(6): 450-456.

[23] Gao J Y, Zhao H Y, Hylands P J,. Secondary metabolite mapping identifiesinhibitors of human lung cancer cells [J]., 2010, 53(3): 723-728.

[24] Kumar R, Bhan S, Kalla A K,. 28-Noroleana-16, 21-diene triterpenes fromspectabilis [J]., 1992, 31(8): 2797-2799.

[25] ?al?? ?, K?rm?z?bekmez H, Ta?demir D,. Two new triterpene and a new nortriterpene glycosides from[J]., 2004, 87(3): 611-619.

[26] Luo Y G, Feng C, Tian Y J,. Three novel nortriterpenoids fromBenth. (Labiatae) [J]., 2003, 59(41): 8227-8232.

[27] Peng S L, Li R, Bao T N,. A new nortriterpenoid from[J]., 2005, 76(7/8): 625-628.

[28] 鄭玉清, 閆合, 韓婧, 等. 中藥茺蔚子中一個(gè)新C-28降三萜 [J]. 中國中藥雜志, 2012, 37(14): 2088-2091.

Study on nortriterpenes from roots ofvar.

DENG Rui-xue, HUANG Yu-yang, XU Yi-fan, LIU Pu

Luoyang Key Laboratory of Natural Products Functional Factor Research and Development, Chemical Engineering & Pharmaceutical College, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471023, China

To study the nortriterpenes from the root ofvar.The chemical constituents were isolated by repeated column chromatographies (Toyopearl HW-40C and preparative HPLC). The structures were elucidated on the basis of spectral data analysis.Eight nortriterpenes were isolated from the 95% ethanol aqueous extract ofvarand the structures were identified as phlomisal A (1), phlomisone (2), phlomistetraol A (3), phlomistetraol B (4), phlomishexaol A (5), phlomishexaol B (6), phlomishexaol C (7), and phlomishexaol D (8).Compound 1 is a new compound, and compounds 3, 4, 6—8 are isolated from this plant for the first time. All the nortriterpenes display varying degrees of antitumor activities against cancer cells.

Turcz var.Sun ex C H Hu; nortriterpene; antitumor activities;phlomisal A; phlomistetraol A; phlomishexaol B

R284.1

A

0253 - 2670(2021)06 - 1555 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.06.002

2020-07-08

河南省高校科技創(chuàng)新人才支持計(jì)劃（20HASTIT008）；國家自然科學(xué)基金-河南聯(lián)合基金資助項(xiàng)目（U1404831）

鄧瑞雪（1978—），女，博士，副教授，從事天然有機(jī)化學(xué)研究。

劉 普（1978—），男，博士，教授，研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物化學(xué)。E-mail: liuputju@163.com

[責(zé)任編輯 王文倩]