云南省昆明市2014—2019年豬偽狂犬病感染情況調(diào)查

杜 敏 ， 金衛(wèi)華 ， 吳海興 ， 黃文忠 ， 夏春香 , 曹 睿

(昆明市動物疫病預(yù)防控制中心 ， 云南 昆明 650000)

豬偽狂犬病(Porcine pseudorabies,PR)是由偽狂犬病病毒(Pseudorables virus,PRV)引起的一種急性傳染病。多種動物都可感染PRV，其中豬最為敏感，病豬、帶毒豬為本病重要傳染源。PRV主要通過口鼻、精液、胎盤等方式傳播，可引起仔豬出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和急性死亡、育肥豬呼吸障礙和生長緩慢以及種豬繁殖障礙等[1-2]。豬感染PRV后可終生帶毒并且不斷排毒，該病毒會破壞機體免疫系統(tǒng)，引起機體免疫抑制，容易繼發(fā)感染其他疫病[2-3]。近年來，昆明市養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展迅速，2014—2017年生豬飼養(yǎng)量基本維持在700萬頭以上，分別為704萬頭、733萬頭、743萬頭和720萬頭，2018年、2019年有所下降，生豬飼養(yǎng)量分別為369萬頭和345萬頭。自2011年以來，我國多個地區(qū)發(fā)生豬PR的流行，其病毒的致病力明顯增強，發(fā)病率和死亡率也明顯上升，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失[4-5]。為掌握昆明市PR流行情況，評估免疫效果和暴發(fā)風(fēng)險，本中心獸醫(yī)實驗室連續(xù)對昆明市豬PR開展血清學(xué)抗體檢測和病毒核酸檢測，以期為昆明市豬PR的防控與凈化提供有效的數(shù)據(jù)支撐和科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集 按照各年度昆明市動物疫病監(jiān)測與流行病學(xué)調(diào)查計劃，春季、秋季各開展1次集中監(jiān)測，樣品從定點監(jiān)測豬場及定點監(jiān)測鄉(xiāng)鎮(zhèn)采集，每年的抽檢數(shù)量大致依據(jù)豬養(yǎng)殖量分配，群體數(shù)量按不同規(guī)模進行隨機采樣，即存欄10只及以下的養(yǎng)殖場(戶)全部采樣，存欄10只以上的按10%的比例進行采樣。2014—2019年對規(guī)模場和散養(yǎng)戶，共249場次的2 948份豬血清樣品進行了PRV gE抗體檢測；對規(guī)模場、散養(yǎng)戶和屠宰場，共174場次的1 487份豬組織樣品和442份公豬精液進行了PRV病原檢測。

1.2 主要儀器 生化培養(yǎng)箱(上海躍進醫(yī)療器械有限公司)、酶標(biāo)儀(Anthos 2010)、組織研磨儀(北京鼎浩源科技有限公司TL 2020)、Ⅱ級生物安全柜(Thermo 1300 SERIES A2)、核酸提取儀(西安天隆科技有限公司NP 968)、PCR儀(ABI PTC-200)、凝膠成像系統(tǒng)(BIO-RAD)。

1.3 主要試劑 PRV gE抗體檢測試劑盒(武漢科前生物股份有限公司)、核酸提取試劑盒(西安天隆科技有限公司)、PRV PCR檢測試劑(TaKaRa PremixTaqTM)。

1.4 方法

1.4.1 抗體檢測 采用gE-ELISA方法，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行檢測和結(jié)果判定。

1.4.2 病原檢測 豬組織樣品經(jīng)研磨處理成勻漿液，然后離心取上清液提取核酸進行PCR檢測。核酸提取、PCR檢測和結(jié)果判定均按照試劑盒說明書進行。

1.4.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 使用Excel對檢測數(shù)據(jù)按不同年度、不同場點類別、不同區(qū)域進行統(tǒng)計分析，利用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS對數(shù)據(jù)進行差異顯著性分析。

2 結(jié)果

2.1 血清學(xué)檢測

2.1.1 時間分布 2014—2019年采用ELISA方法，對全市162個鄉(xiāng)(鎮(zhèn))、210個村委會共計249個監(jiān)測場點的2 948份豬血清樣品進行PRV感染抗體(gE抗體)檢測，檢出陽性樣品609份，個體陽性率為20.66%；檢出陽性場點49個，場點陽性率為19.68%。2014—2019年P(guān)RV感染抗體個體陽性率呈逐漸上升趨勢，從15.13%上升到35.18%，差異顯著(95%CI,P<0.05)；場點陽性率也逐年上升，從20.00%上升到29.41%，差異不顯著(95%CI,P>0.05)。檢測結(jié)果見表1。

表1 2014—2019年昆明市豬PRV感染的血清學(xué)檢測結(jié)果

2.1.2 群間分布 共集中檢測249個監(jiān)測場點，包括規(guī)模場134個、散養(yǎng)戶115個。規(guī)模場和散養(yǎng)戶的個體感染抗體陽性率分別為22.23%和14.01%，但差異不顯著(95%CI,P>0.05)。規(guī)模場和散養(yǎng)戶的場點感染抗體陽性率分別為26.12%和12.17%，規(guī)模場的場點感染抗體陽性率顯著高于散養(yǎng)戶(95%CI,P<0.05)，感染情況較散養(yǎng)戶更為嚴(yán)重。檢測結(jié)果見表2。

表2 2014—2019年昆明市不同場點類型豬PRV感染的血清學(xué)檢測結(jié)果

2.1.3 地區(qū)分布 對昆明市不同地區(qū)進行豬PR感染抗體檢測，結(jié)果顯示：昆明市各地區(qū)都有PRV感染情況，感染抗體個體陽性率介于13.86%～51.39%，主城區(qū)顯著高于北部、南部地區(qū)(95%CI,P<0.05);場點感染抗體陽性率介于13.95%～30.00%，地區(qū)間差異不顯著(95%CI,P>0.05)。其中昆明主城區(qū)感染情況較為嚴(yán)重，感染抗體個體陽性率達到了51.39%，其防控形勢比較嚴(yán)峻。檢測結(jié)果見表3。

表3 2014—2019年昆明市不同地區(qū)豬PRV感染的血清學(xué)檢測結(jié)果

2.2 病原學(xué)檢測 2014—2019年采用PCR方法，對全市130個鄉(xiāng)(鎮(zhèn))、128個村委會、42個規(guī)模場、22戶散養(yǎng)戶、109個屠宰場，共174個監(jiān)測場點的1 929份樣品進行豬PRV病原學(xué)檢測，其中豬組織樣品1 487份，公豬精液樣品442份，檢測結(jié)果全部為陰性，檢測結(jié)果見表4。

表4 2014—2019年昆明市豬組織、精液樣品PRV感染的病原學(xué)檢測結(jié)果

3 討論

血清學(xué)檢測結(jié)果顯示：2019年豬PRV感染抗體(gE抗體)個體陽性率和場點陽性率最高，分別為35.18%和29.41%。近幾年來豬PR感染抗體(gE抗體)陽性率有逐漸升高的趨勢，同時對照其他幾個省份監(jiān)測結(jié)果[6,8-10]發(fā)現(xiàn)其變化趨勢一致，都有不同程度的增幅，仍處于較高水平，說明昆明市豬PR防控工作有待進一步加強。不同場點監(jiān)測結(jié)果顯示，規(guī)模場感染抗體個體陽性率和場點陽性率均高于散養(yǎng)戶，可能與規(guī)模場豬群流動性大以及與外界交流相對頻繁有關(guān)[6-7]。不同地區(qū)統(tǒng)計結(jié)果表明，昆明市豬PR流行有一定的空間分布特征，其中主城區(qū)流行較為嚴(yán)重，可能原因：一是主城區(qū)交通四通八達，從地理環(huán)境及交通優(yōu)勢及市場流通等因素分析認(rèn)為易造成疫病的流行；二是與不同區(qū)域生豬養(yǎng)殖規(guī)模化水平、飼養(yǎng)管理模式和防疫水平等有關(guān)。昆明市豬群PRV感染范圍較廣，部分區(qū)域感染程度較為嚴(yán)重，因此，昆明市豬群PR的防控和凈化可實行區(qū)域化管理，以連續(xù)2年P(guān)RV感染抗體陽性率低于20%的區(qū)域為切入點，根據(jù)PR流行情況制訂相應(yīng)的防控和凈化措施，反復(fù)進行“檢測—分群—免疫—檢測”，逐步淘汰和縮小陽性豬群。同時加強生豬調(diào)運監(jiān)管，避免從高風(fēng)險的區(qū)域和場群引進生豬。

病原學(xué)檢測結(jié)果顯示：近幾年來均未檢測出PRV核酸陽性，公豬精液也未檢出。在監(jiān)測過程中出現(xiàn)血清學(xué)檢測感染抗體陽性但病原學(xué)檢測陰性結(jié)果，其原因可能：一是采樣的時候血清樣品和組織樣品沒有一一對應(yīng)；二是采樣監(jiān)測數(shù)量較少，覆蓋面較窄，下一步應(yīng)做好采樣工作，繼續(xù)擴大監(jiān)測范圍，增加監(jiān)測數(shù)量。種豬是關(guān)系生豬疫病控制的源頭，帶毒的種豬會成為豬場病毒的存儲器[8]，即使實驗室檢測區(qū)分了野毒感染豬，但由于目前生豬價格居高不下，也不可能將陽性豬全部淘汰，所以一旦感染，凈化工作非常艱巨。昆明市可首先以種豬場為單位實行豬PR的凈化，采用基因缺失疫苗和gB-ELISA、gE-ELISA相結(jié)合，通過疫苗免疫、檢測和淘汰相結(jié)合的方式，逐步建立高gB抗體和gE抗體為陰性的豬群，逐步達到凈化該病的目標(biāo)。

豬PR作為主要動物疫病凈化要求的病種之一，做好豬PR的控制至關(guān)重要。昆明市豬群PRV感染范圍較廣，部分區(qū)域感染程度較為嚴(yán)重，防控工作有待進一步加強，建議擴大監(jiān)測范圍，增加監(jiān)測數(shù)量，繼續(xù)做好PR監(jiān)測，掌握PR感染動態(tài)，分區(qū)域、按場點，逐步推進PR防控與凈化工作，最終達到凈化該病的目的。