高危型HPV-E6/E7 mRNA檢測在宮頸病變篩查中的臨床價值*

黃 強，錢永紅，梁寶權，葛海云△

1.江蘇省蘇州市獨墅湖醫院，江蘇蘇州 215123；2.南京醫科大學附屬蘇州醫院，江蘇蘇州 215002

宮頸癌的發病率位于女性癌癥的第4位，發展中國家宮頸癌的發生率高于發達國家[1]。高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV)的持續感染是宮頸癌癌前病變和宮頸癌的主要病因[2]。目前已經發現的HPV有150多種，其中的40多種可以導致宮頸病變。HPV檢測已被廣泛用于宮頸癌的篩查，并且明顯降低了宮頸癌的發病率和病死率。液基細胞學檢查及HPV DNA檢測是篩查宮頸病變的兩種最常用的方法[3]，但有研究表明這兩種方法的特異度較低，且不能提示患者的預后[4]。有研究報道檢測HR-HPV-E6/E7 mRNA的表達水平在宮頸病變的篩查中更有優勢[5-6]。

E6/E7為HR-HPV的早期蛋白，可影響抑癌基因從而導致宮頸癌的發生[7]，并且E6/E7在宮頸癌細胞中持續表達，因此，HR-HPV-E6/E7 mRNA用于宮頸癌的篩查在理論上是可行的[8-9]。本研究通過檢測可疑人群的HR-HPV-E6/E7 mRNA表達水平，探討其在宮頸病變篩查中的臨床意義及應用價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性選擇2018年5月至2018年10月于南京醫科大學附屬蘇州醫院婦科就診的患者388例作為研究對象，患者年齡31～62歲，平均(37.89±6.18)歲。其中行陰道鏡檢查者388例，HPV分型檢測者325例，HR-HPV-E6/E7 mRNA檢測者167例。納入標準：(1)既往無宮頸癌或癌前病變；(2)既往無宮頸治療史；(3)有2年以上性生活史。

1.2方法

1.2.1HPV檢測 采用HPV專用取樣刷于宮頸處采集標本，放置于保存液中，采用透景公司的高危型流式點陣熒光分析儀luminex200檢測HPV分型。可檢測17種高危型(HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、82)。

1.2.2HR-HPV-E6/E7 mRNA檢測 采用豪洛捷PANTHER全自動核酸檢測系統，對HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68進行HR-HPV-E6/E7 mRNA的定性檢測。操作過程由經過培訓的操作員嚴格按照操作說明書進行，檢測程序主要包括靶標捕獲、靶標擴增和檢測步驟，由內部質控監測此反應的3個步驟。

1.2.3陰道鏡活檢 由婦產科醫生在可疑病變部位取組織活檢，必要時行宮頸掻刮。2名病理科醫生雙盲閱片診斷。分類：(1)正常或炎癥；(2)宮頸上皮內瘤變(CIN)，分為CIN1(低級別鱗狀上皮內病變)，CIN2(高級別鱗狀上皮內病變)，CIN3(高級別鱗狀上皮不典型增生和原位鱗癌)；(3)宮頸浸潤癌(ICC)，包括宮頸浸潤鱗癌和腺癌。

1.3統計學處理 采用SPSS22.0統計軟件對數據進行處理分析。計數資料以頻數、率表示，組間比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法。采用Spearman相關進行相關性分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1不同HPV檢測結果中陰道鏡活檢結果比較 按HPV檢測結果(陰性、陽性)分組進行比較，HPV陽性患者中陰道鏡活檢結果為正常或炎癥者少于HPV陰性者，而HPV陽性者中CIN1、CIN2、CIN3、ICC檢出率高于HPV陰性者，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同HPV檢測結果中陰道鏡活檢結果比較(n)

2.2不同HR-HPV-E6/E7 mRNA檢測結果中陰道鏡活檢結果比較 按HR-HPV-E6/E7 mRNA檢測結果(陰性、陽性)分組進行比較，HR-HPV-E6/E7 mRNA陽性患者中陰道鏡活檢結果為正常或炎癥者少于HR-HPV-E6/E7 mRNA陰性者，而HR-HPV-E6/E7 mRNA陽性者中CIN1、CIN2、CIN3檢出率高于HR-HPV-E6/E7 mRNA陰性者，除ICC外差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同HR-HPV-E6/E7 mRNA檢測結果中陰道鏡活檢結果比較(n)

2.3不同陰道鏡活檢結果中HPV、HR-HPV-E6/E7 mRNA陽性率比較 在陰道鏡活檢結果為正常或炎癥的患者中HR-HPV-E6/E7 mRNA的陽性率低于HPV的陽性率，差異有統計學意義(P<0.05)，而陰道鏡活檢結果為CIN1、CIN2、CIN3、ICC的患者中HPV、HR-HPV-E6/E7 mRNA陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 不同陰道鏡活檢結果中HPV、HR-HPV-E6/E7 mRNA陽性率比較[%(n/n)]

2.4HR-HPV-E6/E7 mRNA陽性與宮頸病變病理分級的關系 選擇HR-HPV-E6/E7 mRNA陰性、陽性中陰道鏡活檢病理結果異常且差異有統計學意義的指標(CIN1、CIN2、CIN3)，采用Spearman相關分析HR-HPV-E6/E7 mRNA陽性與這些指標的關系，發現HR-HPV-E6/E7 mRNA陽性與病理分級(CIN1、CIN2、CIN3)呈正相關(r=0.69、0.53、0.61，P均<0.05)。見表4。

表4 HR-HPV-E6/E7 mRNA與宮頸病變病理分級的關系

3 討 論

HR-HPV首先感染宿主細胞，將其E6/E7 DNA整合入宿主細胞基因組中，在外界致癌因素刺激下，經過一系列過程，生成癌蛋白E6/E7，造成抑癌蛋白失活，最終導致宮頸癌的發生[10]。由于E6/E7基因的轉錄、翻譯是HR-HPV感染宮頸后造成惡變的重要過程，因此，HR-HPV-E6/E7可以作為預測宮頸癌發生的重要標志物[11]。

有研究報道，在30歲以下的女性中，6%的良性病例，22%的CIN1，83%的CIN2和93%的CIN3病例HR-HPV-E6/E7 mRNA檢測結果為陽性[12]。同樣，本研究發現，HR-HPV-E6/E7 mRNA陽性者宮頸高級別病變發生率較陰性者增高，除ICC外差異均有統計學意義(P<0.05)，且HR-HPV-E6/E7 mRNA陽性與宮頸病理分級呈正相關(r=0.69、0.53、0.61，P均<0.05)。宮頸癌的篩查對降低宮頸癌的發病率及病死率起著重要作用[13]，HPV分型檢測和宮頸細胞學檢測是兩種最常用的篩查方法[14]。HPV分型檢測具有較高靈敏度等優點，但是許多女性一生中曾感染過HPV，其中大多數在2年內自發消失，不會引起宮頸病變。單獨行HPV分型檢測可能會導致過度轉診陰道鏡，造成過度醫療。使用薄層液基細胞學檢測，可以對HPV陽性婦女進行分流，一定程度上提高了宮頸病變篩查的準確率[15]。但是細胞學結果的準確程度依賴于病理醫生的臨床水平，由于檢測設備和人員的差異，結果差異較大。因此，尋找一種可以對HPV陽性婦女進行分流，且主觀因素影響較小的方法非常重要。本研究中發現，HR-HPV-E6/E7 mRNA陽性可以預測宮頸高級別病變，且在正常或炎癥病理結果中HR-HPV-E6/E7 mRNA的陽性率低于HPV分型檢測中HR-HPV-E6/E7 mRNA的陽性率(P<0.05)。HR-HPV-E6/E7 mRNA陽性代表HR-HPV致癌基因的表達，其判斷標準不僅是HR-HPV感染，而是HR-HPV感染是否處于致癌活動期，故其被推薦應用于30歲以下年輕婦女宮頸癌風險評估。與細胞學檢測結果相比，其結果不依賴于病理醫生，因此可能更加客觀。在一些醫療資源貧乏地區，可以替代細胞學檢測作為篩查方法。

綜上所述，HR-HPV-E6/E7 mRNA陽性與宮頸異常病理結果相關，與HPV分型檢測相比，能在不降低宮頸病變檢出率的前提下減少一過性HPV感染的檢出，對高危婦女行HR-HPV-E6/E7 mRNA檢測可能可以更準確地判斷CIN的嚴重程度、預后及發展轉歸。但本研究的樣本量較小，且為單中心研究，還需要大樣本、多中心嚴格的病例對照研究，從而探討出更合理的宮頸病變篩查方案。