安徽省蚌埠地區某醫院婦科病人HPV感染及亞型分布

梅 娟，姚利利

宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤之一,我國每年新發宮頸癌13萬余例[1]。人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染是導致宮頸上皮內瘤變及宮頸癌發生的重要原因[2]。流行病學研究[3]證實高危型HPV感染的檢測是宮頸癌預防的關鍵。安徽蚌埠地區經濟發展相對落后，衛生醫療條件相對匱乏，目前相關HPV感染流行病學調查的報道較少。本研究通過分析我院婦科4 773例就診病人HPV檢測結果，旨在積累本地區婦科病人HPV感染的流行病學資料，以供預防和臨床工作參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象 收集2016-2017年在我院婦科進行HPV分型檢測的4 773例病人作為研究對象,年齡16～68歲。所有標本采集和檢測過程均經病人本人同意。

1.2 儀器與試劑 核酸提取液試劑盒、HPV分型檢測PCR試劑盒及HPV分型檢測雜交試劑盒均購自亞能生物技術(深圳)有限公司；PCR擴增儀器(杭州博日科技有限公司)；自動雜交儀器(亞能生物技術深圳有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 樣本采集 由專業婦科醫生用擴陰器暴露宮頸口，用無菌棉拭子擦拭宮頸口可見的分泌物，將宮頸刷置于宮頸口，輕柔旋轉宮頸刷使其順時針旋轉4～5圈，然后將宮頸刷放入加有專用細胞保存液的取樣管中保存。樣本采集后立即送檢病理科。4 ℃保存，3 d內檢測。

1.3.2 DNA分離提取與PCR擴增 取保存有宮頸細胞的細胞保存液1.0 mL，以14 000 r/min離心5 min，棄去上清液，采用核酸提取試劑盒提取DNA。取5 μL DNA提取液，加入PCR擴增體系，擴增條件：95 ℃預變性10 min;95 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，40個循環；72 ℃延伸3 min。

1.3.2 PCR產物雜交 按照試劑說明書及儀器操作指南進行操作。加入25 μL PCR擴增產物預熱至45 ℃的雜交液，開啟自動雜交程序。雜交結束后用鑷子取出雜交膜放在吸水紙上，1 h內分析結果。

1.4 結果判定 檢測結果陽性點為清晰可見的藍色圓點；根據膜條HPV分型分布圖，判斷陽性點為HPV哪種類型;Biotin對照點，反映酶與顯色底物反應，在檢測中應為陽性。內對照點(IC)為質控模板DNA 探針，若擴增反應體系中沒有抑制因素，IC點出現；以上兩對照點為陽性，其他點為陰性，應判定該樣本檢測結果為陰性，如果有一個HPV分型點為陽性，表示該樣本為單重HPV感染，一個以上分型點為陽性表示多重HPV感染。

1.5 統計學方法 采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 總體感染情況 在接受HPV檢測的4 773名婦科病人中，一共檢出1 069例HPV陽性病例，陽性率為22.40%;其中高危感染(h-HPV)率為19.76%(943/1 069)，低危感染(l-HPV)率為1.84%(88/1 069)，混合感染(h+lHPV)率為0.80%(38/1 069)，分別占HPV感染的88.21%、8.23%和3.55%。

2.2 不同年齡段病人HPV感染狀況 ≥55歲年齡組感染率為31.96%，高于其他4個年齡組感染率(P<0.01)；其他4個年齡組感染率之間差異無統計學意義(P>0.05)(見表1)。

表1 各年齡段病人HPV感染情況(n)

2.3 HPV單一及多重感染情況 在檢測的4 773例樣本中既有單一型HPV感染，也有兩種及以上基因型的混合感染。樣本的陽性例數為1 069例，其中單一感染陽性數為868例，陽性率為81.20%；多重感染陽性數為201例，陽性率為4.21%。在多重感染中以二重感染最為常見，占多重感染的78.61%(158/201)，三重及以上感染少見(見表2)。

表2 HPV單一和多重感染情況

2.4 HPV感染亞型分布 23種基因亞型在檢測中均出現，高危HPV亞型感染以HPV16亞型為最高，其次是HPV52、HPV58，低危HPV亞型感染以HPV6亞型為最高，其次為HPV11、HPV42。1069例陽性標本由于有多重感染的標本共檢出1 320例HPV亞型，其中高危型1 192例，低危型128例，占受檢人數比例分別為24.97%、2.68%，占總檢出亞型的比例分別為90.30%、9.70%(見表3)。

表3 HPV感染的檢出情況

3 討論

近年來研究[4]發現，我國宮頸癌的發病率明顯升高，嚴重影響婦女的心身健康。HPV感染類型不同，其致病風險差別亦較大。有研究[5]證實HPV基因分型結果可以預測患高級別鱗狀上皮內瘤變及以上病變的風險，有助于宮頸病變病人的分層管理，具有較高的臨床應用價值。所以，對HPV的檢測及分型有著重要意義。不同地域HPV感染陽性率和型別存在差異[6]。關于安徽省蚌埠地區婦女HPV感染情況的研究報道極少，因此有必要對該地區婦科病人HPV感染情況及亞型分布特點進行研究，以期對該地區宮頸癌的防治進行指導。

本研究對安徽蚌埠地區4 773例受檢婦科病人進行HPV檢查，共檢出HPV陽性樣本1 069例，陽性率為22.40%。高危感染(h-HPV)率為19.76%。與許曉紅等[7]報道的安徽合肥地區高危型HPV感染率為18.62%的結果相似，與金夏等[8]報道的安徽合肥地區HPV感染率為12.43%相比偏高，與田斌等[9]報道的安徽銅陵地區宮頸炎女性HPV檢出率為35.3%相比偏低，這些差異存在可能與報道時間不同或者與地區差異有關，需進一步調查研究分析。與國內相關報道比較，丁雪晴等[10]報道的泰州地區陽性率為25.57%，本研究結果與之相近。與靳大川等[11-12]報道相比，本研究結果HPV感染率偏高，這與他們的研究對象是普通人群，而本研究是婦科病人，可能本身存在宮頸病變有關，所以感染率偏高，這也證實了宮頸病變與HPV感染存在關系。

本研究結果顯示，HPV感染率在各年齡組間存在差異，≥55歲年齡組感染率為31.96%，高于其他4個年齡組感染率(P<0.01)；其他4個年齡組感染率之間差異無統計學意義(P>0.05)。本研究類似于先前的報道[10-11]，但也與其他地區HPV感染相關文獻[8-9,12-14]報道明顯不同。這充分說明HPV感染具有明顯地域差異性。本研究結果中≥55歲年齡組感染率明顯較高的原因可能為絕經期婦女卵巢功能下降造成激素水平不穩，衰老導致免疫功能下降以及老年人就診意識差等因素提高了HPV的感染率。因此，本研究結果提示安徽蚌埠地區應該更多地關注年齡≥55歲女性婦科病人的HPV基因分型和宮頸癌的篩查。

HPV感染分高危型和低危型感染。HPV基因型的分布在不同地域顯示出多樣性，這種多樣性特點對未來針對特定地區人群設計有效預防HPV疫苗至關重要。西方國家HPV16和HPV18是兩個主要的基因型，與70%的宮頸癌發生相關[15]。本研究中1 069例HPV感染病例共檢測出17種高危HPV基因型，其中排名前五位基因型為HPV16、HPV52、HPV58、HPV33、HPV56型。這與李軍等[12]報道的高危HPV基因型排列順序前三位一致，這與其他報道[11，14]存在一定的差異，但排列前三位的基因型是一樣的，此差異的存在尚需進一步的研究。

HPV感染分為單重感染和多重感染。HPV多重感染可能對宮頸癌的發生、發展具有協同作用[16-17]。有研究[18]表明，HPV多重感染引起的宮頸癌比單重感染在治療中更具有耐藥性，治療失敗率是單重感染的5倍。本研究4 773例樣本中，單重感染868例，占81.20%；多重感染201例，占18.80%，與研究[12]報道相近。多重感染中主要為二重感染，占多重感染的78.61%(158/201)，這與相關報道[11-12]一致。本研究存在一定局限性，研究中使用的HPV試劑盒只能檢測出已知HPV基因型中的23種類型，導致檢測出的多重感染的例數可能比實際要低。

總之，我院婦科病人HPV感染檢測共發現15個高危基因型，以單一高危感染為多見，HPV16、HPV52、HPV58、HPV33、HPV56為排列前五位的基因型；各年齡段中以≥55歲年齡組HPV感染率最高，因此，該地區需更加關注此年齡段婦科病人的HPV基因分型和宮頸癌的篩查。