氣相色譜法測定水產(chǎn)品中五氯苯酚及其鈉鹽殘留量

胡浩光，劉少彬，郭楚儀，姚婉儀，謝翠美

(東莞市動物疫病預防控制中心，廣東 東莞 523002)

五氯苯酚(Pentachlorophenol)是一種中等毒性的農(nóng)藥。中毒之后因心力衰竭和交熱引起死亡,它能抑制細菌的腐蝕作用、阻止真菌的生長是重要的防腐劑,一直以來被用作木材和皮革品的防霉劑，其鈉鹽用于消滅血吸蟲中間宿主釘螺[1]，也是土壤殺菌劑和拌種劑，用于防治小麥腥黑穗病，馬鈴薯痂瘡病，棉花立枯病等，目前PCP和NAPCP是最佳、最廉價的藥劑，在發(fā)展中國家產(chǎn)生很大的收益，作為清塘藥物被廣泛用于池塘。PCP和NAPCP是我國主要的污染物之一，因其化學性質(zhì)穩(wěn)定，不易降解，是一種遺傳毒性物質(zhì)，導致基因突變和染色體畸變，對生殖細胞和胚胎有致突變、致畸風險[2]，而且有較高的水溶性，通過水載體擴散，最終危害人體健康。我國農(nóng)業(yè)部2002年發(fā)布《無公害食品漁用藥物使用準側》，明確規(guī)定動物生產(chǎn)中禁用五氯苯酚。對于五氯苯酚的檢測方法，主要有GC法[3]、生物膜電極法[4]、毛細管區(qū)帶電泳法[5]、LC法[6]、氣質(zhì)聯(lián)用法[7]、LC-MS-MS法[8]、分光光度法9]等。氣相色譜法和高效液相色譜法是水產(chǎn)品檢測采用的主要方法。本文研究建立的水產(chǎn)品中五氯苯酚及其鈉殘留量測定的氣相色譜法，操作簡便、靈敏度高，檢測結果準確。

1 材料與方法

1.1 標準品與試劑

五氯苯酚標準品，購自德國Dr.Ehrenstorfer GmbH公司，純度99%以上；正己烷為色譜純，均購自Fisher scientific飛世爾實驗器材(上海)有限公司；試驗用水為超純水，購自東莞市怡豐貿(mào)易有限公司，18.2 MΩ·cm；無水硫酸鈉(650 ℃灼燒4 h，冷卻后置干燥器內(nèi)中備用)為分析純；硫酸為優(yōu)級純，購自廣州化學試劑廠；碳酸鉀為分析純，購自廣州化學試劑廠,實驗用水為Milli-Q制備的超純水。

1.2 儀器與設備

氣相色譜7890,美國安捷倫公司；冷凍離心機,德國SIGMA公司；電子天平(感量0.0001),德國SARTORIUS公司: 電子天平(感量0.01),賽多利斯公司；MS1渦旋振蕩器,德國IKA公司；超純水儀,美國Millipore公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品預處理

將水產(chǎn)品可食部分，切成0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的小塊，打成肉糜混合均勻，待測或放置冰箱中冷藏備用。

1.3.2 樣品提取

稱1.00 g試樣于50 mL具塞聚乙烯離心管中，加入8 mL硫酸-水(1:1)，旋渦混合器混合1 min，80 ℃水浴半個小時，冷卻后加10 mL正己烷，旋渦混合器混合3 min，10000 r/min離心5 min。抽取上層正己烷提取液于50 mL離心管中。

1.3.3 凈 化

向提取液中加8 mL碳酸鉀溶液，旋渦混合2 min，充分混合提取，10000 r/min離心5 min，吸出下層提取液到15 mL具塞離心管中。

1.3.4 衍生化

向碳酸鉀提取液中加0.2 mL乙酸酐，振搖1 min并不斷放氣，加入4 mL正已烷萃取，旋渦混合2 min，充分混合提取，10000 r/min離心5 min，正己烷提取液提取液移于5 mL容量瓶中，用正己烷定容至5.0 mL，混勻后經(jīng)裝有2.0 g的無水硫酸鈉柱脫水，取1.0 mL供氣相色譜分析用。

1.4 氣相色譜測定

1.4.1 氣相色譜測定條件

色譜柱：HP-5石英毛細管柱(30 m×0.320 mm×0.25 μm)，進樣量1 μL。脈沖分流進樣，分流比40:1，脈沖壓力為10 psi,脈沖時間為0.75 min。升溫程序為:初溫140 ℃，保持1 min；10 ℃/min至200 ℃，保持5 min，然后設定30 ℃/min升至260 ℃，保持2 min。進樣口溫度260 ℃，檢測器溫度為300 ℃。載氣為氮氣，流速1.2 mL/min。外標法定量。

1.4.2 標準溶液的配制

準確稱取0.0100 g五氯苯酚標準品，用碳酸鉀溶液定(0.1 mol/L)容至100.0 mL，配制成100 ug/mL的標準儲備液。使用時用0.1 mol/L K2CO3溶液進行梯度稀釋，配制分別含0.5 μg/L、1.0 μg/L、5.0 μg/L、10.0 μg/L、50.0 μg/L、75.0 μg/L、100.0 μg/L的標準工作液，各取5.0 mL,分別置于15 mL具塞離心管中，加入3 mL碳酸鉀溶液，按1.3.4步驟操作。

2 結果與討論

2.1 提取優(yōu)化

向南美白對蝦樣品(1.00 g)中，加入100 μL PCP 濃度為100.0 μg/L標準工作液，渦旋混勻，硫磺化后，80 ℃水浴0.5 h，分別采用10 mL正己烷、10 mL×2次正己烷和10 mL×3次正己烷提取，平行6個，按1.3.4步驟操作，比較增加提取次數(shù)對回收率的影響，試驗結果表明，正己烷提取一次回收率結果，適合大批量水產(chǎn)品檢測要求(表1)。

表1 正己烷提取次數(shù)對五氯苯酚回收率的影響Table 1 The effects of n-hexane extraction times on recoveries(n=6)

2.2 衍生化條件優(yōu)化

2.2.1 衍生化pH條件的確定

當pH<6時，未形成酚離心，降低了乙酰化產(chǎn)率，當pH>11.5時，乙酸酐的水解快于乙酰化反應，pH為9～11是乙酸酐乙酰化的最佳反應。由于試驗的時候有酸生成，因此用0.1 mol/L K2CO3作為敷酸劑，滿足衍生條件。

2.2.2 衍生試劑的用量

取5.0 mL PCP 濃度為5.0 μg/L標準工作液6份，分別加入0、20、50、100、200、300 μL乙酸酐,按1.3.4條件處理，結果顯示，衍生試劑為200 μL時，乙酰化反應趨于最高點(圖1)。

圖1 PCP-OAc 峰面積與乙酸酐用量的關系Fig.1 The relation between peak area of PCP-OAc and dosage of acetic anhydride

2.3 色譜圖

五氯苯酚衍生后生產(chǎn)五氯苯乙酸酯，穩(wěn)定性和揮發(fā)性均有增加，按1.4.1色譜條件進行測定，圖2為PCP-OAc標準品色譜圖；圖3為南美白對蝦空白樣品和南美白對蝦添加0.2 mL 50 ng/mL PCP的加標樣品色譜圖。

圖2 PCP-OAc標準品色譜圖(10 ng/mL)Fig.2 The chromatogram of PCP-OAc standard solution(10 ng/mL)

圖3 南美對蝦空白樣品(A)和10 ng/mL加標樣品(B)的色譜圖Fig.3 The chromatogram of blank South America prawns sample(A) and 10 ng/mL spiked sample(B)

2.4 線性范圍和檢出限

PCP標準工作液經(jīng)乙酸酐衍生化后上機測定,測定其峰面積相應值,以峰面積對應的質(zhì)量濃度做工作曲線。進樣量為1 μL 時，PCP-OAc在質(zhì)量濃度為0.5～100.0 ng/mL的范圍內(nèi)呈良好的線性關系,線性方程為Area=666600106*Amt+0.8193952,線性系數(shù)r=0.99996。本方法測定條件下，按樣品中添加PCP水平為2.0 μg/kg，以信噪比S/N=3所對應的濃度為依據(jù)計算檢出限，得到五氯苯酚的檢出限為0.7 μg/kg。

3 回收率及精密度

取陰性樣品，分別加入濃度為2.0 μg/kg、5.0 μg/kg、和10.0 μg/kg標樣，每組水平7次平行樣，按上述實驗條件，測定加標回收率，數(shù)據(jù)見表2所列。五氯苯酚的回收率在82.5%～92.3%之間，重復性較好， RSD值為3.6%～12.3%，因此該方法的準確度和精確度均可以滿足測定要求。

表2 不同水產(chǎn)品的加標回收率Table 2 Recovery rates of MG in different samples

4 結 論

本實驗建立水產(chǎn)品中的五氯苯酚氣相色譜檢測方法，用正己烷萃取,再用碳酸鉀溶液反萃取,萃取物以乙酸酐衍生,生成衍生物五氯苯酚乙酸酯，再用正己烷萃取,用氣相色譜(配備電子捕獲檢測器)測定，不同濃度的加標，回收率在82.5%～92.3%，檢出限為0.7 μg/kg。結果表明：通過實驗表明，該方法切實可行，適用水產(chǎn)品五氯酚鈉及其鈉鹽殘留量的檢測。