牛病毒性腹瀉診斷方法及綜合防治

(武威市畜牧獸醫科學研究院，甘肅 武威 733000)

牛病毒性腹瀉病毒(簡稱BVDV)是一種與胃腸道、呼吸系統和生殖系統相關的重要病原體，具有較高的傳染性，在全世界內廣泛流行。動物感染此類病毒后，會導致動物生產機能下降、產畸形胎或死胎、產奶量下降、食欲減退、呼吸困難等癥狀，給養殖農戶帶來巨大的經濟損失。在妊娠早期，病毒有通過胎盤的能力，導致胎兒免疫耐受，生產出持續感染的(PI)小牛犢。該病毒在牛犢內長期存在，以各種方式終身排出病毒，并形成傳染源，造成病毒在畜群中難以被徹底消滅。持續感染的動物通常比短暫或急性感染的動物更有效地傳播BVDV，因為它們能夠在一生中排出大量的病毒，被認為是主要的BVDV庫。在我國牛群中，BVDV持續感染率高達2.4 %，遠遠超過很多歐美國家。因此必須要采取有效的防控措施，來阻止病毒的傳播。由于病毒感染的性質，到目前為止，還沒有完全治愈該病的方法。

1 病原學特征

BVDV屬于黃病毒科瘟病毒屬的成員，為單股正鏈 RNA 病毒，基因組大小約12.5 kb，病毒粒子在電鏡下觀察成球形，直徑大約為40～60 nm。按照基因序列的差異，BVDV可分為BVD-1和BVD-2兩種基因型。根據病毒感染細胞后，是否產生細胞病變(CPE)。將 BVDV分成兩種不同的生物型，致細胞病變型(CP)和非致細胞病變型(NCP)。感染病毒后，兩種生物型引起的癥狀不同，主要表現在疾病的發生和嚴重程度上不同，這兩種生物型在牛群中都會引起疾病。實驗表明，牛感染的90 %以上的病毒以及所有PI動物均由NCP引起。據報道，CP型與已經分離的黏膜病的暴發有關系。NCP型在自然界和PI動物中最常見，它對淋巴細胞、白細胞、呼吸道有很強的青睞性。CP型的BVDV起源于NCP的突變菌株。NCP與90 %以上的BVDV感染有關系，可引起輕度感染TI和重度感染PI動物產生。兩種生物型引起的癥狀不同，主要表現在病毒感染后，疾病的發生和嚴重程度上不同。

2 流行特點

由于氣候多變，管理不善，畜體抵抗力下降等因素，造成牛病毒性腹瀉病在我國冬春季較為高發。BVDV可通過直接接觸病畜傳播，也可通過間接吸入受病毒污染的物質傳播。經懷孕母畜胎盤傳播時，會導致出生的小牛發展為持續性感染(PI)牛，終生帶毒、排毒，成為重要的傳播來源。該病的傳染源多為患病牛，患病牛的糞便、分泌物、部分臟器排出病毒。水平傳播主要發生在通過接觸病毒脫落的動物，常見的傳輸介質包括：飼料、水、設備等鼻鉗、奶瓶奶嘴和針頭、觸診、分泌物和排泄物(尿液、糞便、粘液、牛奶)，馬蠅、馬蠅、頭蠅也有已證明能傳播BVDV。垂直傳播介質包括：受污染的精液、胚胎移植和改良活疫苗。持續感染的動物持續脫落大量BVDV，存在于全身分泌物中，包括鼻涕、唾液、精液、糞便等。這些動物作為一個主要的病毒庫來傳播病毒。迄今為止，該病毒已從40多個物種和血清學證據中分離發現，這表明大多數野生反芻動物也會感染BVDV。

3 癥狀表現

病牛初期精神沉郁、食欲減退或廢絕、體溫升高至39～41 ℃、白細胞數量減少、發燒、腹瀉、脫水、消化道粘液病變、淋巴組織壞死、蹄部炎癥、鼻腔有漿液性到粘液性。一般來說，腸系膜淋巴結腫大，水腫，腫脹出血性。在流產的胎兒中，主要病變包括結膜炎、肺炎，胸腺發育不全和非特異性心肌炎。胎盤病變主要包括血管炎，水腫，充血和出血伴有一些變性和壞死。組織病理學顯示病變較為嚴重，外周血淋巴細胞減少和出血，全身淋巴結和淋巴濾泡。

4 診斷方法

4.1 血清學診斷

除了患病動物所表現的臨床癥狀，如腹瀉、糞便稀薄、體溫升高、眼鼻部出現漿液等典型癥狀外，血清學診斷也是BVDV最常用的檢測方法。通過采集血清，檢測血清中BVDV特異抗體來間接診斷。常用的方法有酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、試管凝集試驗、瓊脂擴散試驗等。ELISA檢測具有簡便、高效、特異性強、高通量等優點，技術較為成熟，且對相關實驗人員要求比較低，適合對樣本的快速檢測。

4.2 分子生物學診斷

主要包括聚合酶鏈式反應(PCR)、實時定量 PCR(RT-PCR)、核酸探針(Nucleic Acid Probe)、環介導等溫擴增(LAMP)等技術，對BVDV進行快速診斷。這些方法各有優點和不足。其中，常規PCR比較簡便易行，多用于不同種屬的鑒別檢測，但容易出現假陽性；熒光定量PCR具有高靈敏度、高通量等優勢，但對引物和探針的設計要求比較高；LAMP技術可對乳制品、組織等樣本進行檢測，具有操作簡便、可視性強、特異性高和試驗條件要求低等優點，但對引物設計要求很高。

5 防治措施

5.1 提高飼養管理水平

定期對飼養環境進行消毒處理，保持圈舍的清潔通風，冬春季主要防寒保暖，為牛提供一個舒適的生產環境，減少疾病的發生。此外，要合理搭配飼料比例，滿足牛的生長發育需求，增強牛的抵抗力、增強體質，預防疾病的發生。

5.2 積極做好免疫接種

通過疫苗接種，讓動物體內產生大量的抗體來預防BVDV，降低發病率。目前，國內已經研發了很多疫苗，如牛粘膜病弱毒疫苗、滅活疫苗，都可以用于疾病的預防。

5.3 嚴格做好檢疫工作

對牛群定期進行檢查，發現患病動物或者可疑動物，及時進行隔離。做到“早發現、早隔離、早治療”，對圈舍進行全面消毒，對健康動物進行緊急免疫，控制傳染源。對于嚴重的患病動物，不計得失，盡快淘汰。對引入的外來牛，要嚴格進行檢疫，確保完全健康方可進行混養。

5.4 加強對PI動物的檢測

目前世界上許多國家采用的防控方案，主要依靠對PI動物的檢測，消滅它們或阻止它們返回牧群。在早期階段，特別是出生后不久，檢測PI動物是非常有益的。執行BVDV控制程序，可用的診斷試驗，如病毒分離(VI)、免疫組織化學(IHC)，用抗原捕獲ELISA(ACE)和逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測PI牛。每種檢測BVDV的方法都有其優點、缺點和適用于不同的診斷情況。根據動物年齡選擇合適的抽樣策略，優化診斷試驗。

6 結束語

綜上所述，牛病毒性腹瀉的發病率較高，給養殖戶帶來巨大的經濟損失，如果不及時進行治療，會導致極高的病死率。因此，在日常的養殖中，要加強飼養管理，增強動物的抗病能力，定期對牛群開展檢疫工作，定期進行相關檢查，為減少疾病的發生率提供科學支撐。