細胞周期蛋白D1、基質金屬蛋白酶 -9 在胃癌組織中的表達水平及與幽門螺桿菌感染的相關性

陸 蓮

（江南大學附屬醫院病理科，江蘇無錫 214062）

胃癌是一種惡性腫瘤，其發病初期無明顯癥狀，隨著病情發展進入晚期，患者將表現出消化道出血癥狀，如疼痛、嘔血、黑便等，如提示疼痛持續放射性向腰背部展開，則表示腫瘤已經侵犯胰腺被膜。腫瘤細胞的增殖、凋亡在惡性腫瘤的發展中起著重要的作用，細胞周期蛋白D1（cyclinD1）具有促進細胞增殖由G1 期轉變為S 期的作用，cyclinD1 蛋白表達的增加主要見于惡性腫瘤的發生過程；基質金屬蛋白酶 -9（MMP-9）是可對腫瘤細胞侵襲的組織學屏障起破壞作用[1]。幽門螺桿菌（Hp）感染可引發機體發生免疫反應與炎癥損傷，進而促進胃癌的發生[2]。相關研究表明，Hp 陽性患者胃癌發生率明顯高于Hp 陰性患者，且清除Hp 可以有效降低胃癌的發生率[3]。因此，本研究旨在探討cyclinD1、MMP-9 在Hp 感染性胃癌組織中的表達水平與Hp 感染的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2018 年1 月至2021 年1月江南大學附屬醫院收治的100 例胃癌患者的臨床資料，其中男性63 例，女性37 例；年齡48～73 歲，平均（58.37±7.42）歲；TNM 臨床分期[4]：Ⅰ+Ⅱ期40 例，Ⅲ+Ⅳ期60 例；分化程度[5]：中高分化65 例，低分化35 例。納入標準：符合《胃癌》[6]中的相關診斷標準者；且經病理學檢查確診者；臨床資料完整者；近期未接受抗Hp 治療者等。排除標準：伴有其他惡性腫瘤者；嚴重肝、腎等功能損傷者；胃癌復發者等。本研究已通過院內醫學倫理委員會批準。

1.2 檢測方法

1.2.1 Hp 感染 ①改良Giemsa 染色：取所有患者的病理組織，做石蠟切片，進行脫蠟水化，在2%的Giemsa染色劑中染色30 min，取出后立即用自來水進行沖洗脫水透明處理，采用油鏡觀察Hp 感染情況（×1 000），其中改良Giemsa 染色Hp 菌體呈紫紅色。②14C 呼氣實驗：檢測前采集所有患者空腹6 h，且口服14C 尿素膠囊后的100 mL 呼出氣體，進行14C 紅外線能譜儀檢測；14C 呼氣實驗Hp 陽性超基準值（DOB） ＞2.5。Hp 感染判定標準：改良Giemsa 染色、C-14 呼氣實驗均為陽性。

1.2.2 cyclinD1、MMP-9 表達 取所有患者的病理組織，做石蠟切片，進行脫蠟水化，每隔3 min 用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗1 次，共沖洗3 次。使用微波將pH值 = 6.0 的檸檬酸鹽緩沖液加熱至沸騰，取出組織切片后，放置于耐高溫塑料切片架上，靜置自然泠卻10 min后，每隔3 min 用蒸餾水和PBS 反復沖洗各2 次。滴1 滴3%的過氧化氫于切片上，靜置10 min 后，PBS再次沖洗3 次。cyclinD1 陽性染色主要定位于細胞核，陽性著色為棕黃色；MMP-9 陽性染色主要定位于細胞質，陽性著色為棕黃色。綜合判定標準為染色強度和陽性細胞數占腫瘤細胞的百分比，染色強度：棕褐色（3分）、棕黃色（2 分）、淡黃色（1 分）、無染色（0 分）；陽性細胞數在腫瘤細胞中占比：＞50%（3 分）、25%～49%（2分）、5%～24%（1 分）、＜5%（0 分），最后計算兩項結果的乘積，乘積 ＞ 2 則判定為陽性[7]。

1.3 觀察指標 ①Hp 感染、cyclinD1、MMP-9 表達與胃癌患者臨床病理特征的關系，其中臨床病理特征包括胃癌TNM 臨床分期、分化程度。②胃癌患者Hp 感染與cyclinD1、MMP-9 表達的相關性。

1.4 統計學分析 采用SPSS 21.0 統計軟件分析數據，計數資料采用[ 例(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗，采用Pearson相關系數法進行相關性分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Hp 感染與胃癌患者臨床病理特征的關系 100 例胃癌患者中Hp 感染70 例，非Hp 感染30 例；非Hp 感染胃癌患者TNM 臨床分期為Ⅰ期和Ⅱ期、低分化程度占比均低于Hp 感染患者，但經比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 Hp 感染與胃癌患者臨床病理特征的關系比較[ 例(%)]

2.2 cyclinD1 陽性表達與胃癌患者臨床病理特征的關系 免疫組化染色結果顯示，cyclinD1 表達陽性57例，陰性43 例；cyclinD1 陰性患者中胃癌TNM 臨床分期為Ⅲ+Ⅳ期、中高分化程度患者占比均顯著低于cyclinD1 陽性患者，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 cyclinD1 表達與胃癌患者臨床病理特征的關系比較[ 例(%)]

2.3 MMP-9 陽性表達與胃癌患者臨床病理特征的關系 免疫組化染色結果顯示，MMP-9 表達陽性80 例，陰性20例；MMP-9 陰性患者中胃癌TNM 臨床分期為Ⅲ+Ⅳ期、中高分化程度患者占比均顯著低于MMP-9 陽性患者，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表3。

表3 MMP-9 表達與胃癌患者臨床病理特征的關系比較[ 例(%)]

2.4 胃癌患者Hp 感染與cyclinD1、MMP-9 表達的相關性 與Hp 感染患者比，非Hp 感染患者中胃癌組織cyclinD1 陽性、MMP-9 陽性患者占比均顯著降低，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表4。

表4 胃癌患者Hp 感染與cyclinD1、MMP-9 的表達水平的關系比較[ 例(%)]

2.5 胃癌患者Hp 感染與cyclinD1、MMP-9 表達的相關性 胃癌患者中，Hp 感染與cyclinD1 陽性、MMP-9陽性表達均呈正相關，差異均有統計學意義（r= 0.462、0.571，均P＜0.05）。

3 討論

胃癌是由飲食、感染等致病因素導致機體胃黏膜上皮細胞發生癌變的一種疾病。手術切除仍是目前臨床治療胃癌的主要方法，也是治療胃癌的主要手段，由于大多數胃癌患者被發現時已經屬于晚期腫瘤，所以仍有大部分患者在術后存在復發和轉移的情況[8]。

Hp 是一種革蘭氏陰性菌，在大氣或絕對厭氧環境下不能生長，常寄居在胃黏膜內壁，但胃黏膜上皮脫落較快，所以寄居在胃黏膜上的Hp 會隨著胃黏膜上皮的更新而脫落，脫落后順著腸道從糞便排到體外，使食物和水源受到污染。但也有一部分Hp 不會隨著腸道排出，會經過胃 - 食管反流進入口腔，通過唾液傳播感染，Hp 可加重胃黏膜的炎癥反應，促進腸內消化和萎縮，進而加快癌變[9]。cyclinD1 含量隨細胞周期而變化，不同細胞周期時細胞內cyclinD1 的含量和活性的高峰均不同[10]。MMP-9 是一種依賴性較強的金屬酶，可有效降解細胞外基質。本研究結果，非Hp 感染患者胃癌TNM 臨床分期為Ⅰ期和Ⅱ期、低分化程度占比均低于Hp 感染患者；cyclinD1 陰性患者與MMP-9 陰性患者中胃癌分期Ⅲ+Ⅳ期、中高分化程度占比均顯著低于cyclinD1 陽性與MMP-9 陽性患者，表明在胃癌中，Hp 感染可明顯促進cyclinD1、MMP-9 的表達，進而加快病情進展。MMP-9 是一類蛋白水解酶，在正常的生理過程與疾病過程中參與細胞外基質的分解，破壞機體抑制腫瘤細胞轉移的天然屏障，進而促進腫瘤細胞轉移。胃癌患者中Hp 自身及其代謝產物在一定程度上具有致癌活性，其可促進cyclinD1 基因的激活、擴增等，同時其可通過對胃黏膜的炎癥損傷進行促進MMP-9 的表達，從而加重患者臨床癥狀[11]。本研究中，非HP 感染患者中cyclinD1 陽性、MMP-9 陽性患者均顯著低于Hp 感染患者；Hp 感染與cyclinD1陽性、MMP-9 陽性均呈正相關，表明胃癌Hp 感染與cyclinD1、MMP-9 表達水平的關系密切。

綜上，Hp 感染性胃癌中，cyclinD1、MMP-9 表達水平較高，且其與Hp 感染均呈正相關，可為胃癌患者預后分析提供參考，但本研究樣本量較少，且為單中心研究，因此后期可增加樣本后進行多中心、多方面深入研究，以便提高研究結果的準確度。