健康人群尿液生化項目性別間差異及日內變異分析*

張凱，鄒雨桐，尹逸叢，國秀芝，孫丹丹，李洪雷，邱玲

(中國醫學科學院北京協和醫院檢驗科，北京100730)

尿液生化分析常用的標本類型主要是隨機尿和24 h尿。24 h尿收集繁瑣，無法判斷是否收集完整，易影響檢測結果[1]。目前臨床醫生通常選擇用隨機尿替代24 h尿來快速篩查和評估相關疾病[2-5]，也有研究者用隨機尿推算24 h尿的排泄量[6-7]。隨機尿受濃縮和稀釋的影響，各生化項目濃度的日內變異比較大，為了減小變異度，提高檢驗結果的可靠性，多采用尿肌酐(Cr)校準[8]，但很少有文獻報道經尿Cr校準后各項目變異度的減小程度。本研究通過收集健康人1日內所有隨機尿和24 h尿，分析經尿Cr校準后隨機尿各項目日內變異的減小程度及其晝夜分布的特點，分析不同性別間24 h尿生化項目的差異，為臨床醫生對解讀尿生化結果及選擇尿液標本的類型提供參考。

1 材料與方法

1.1研究對象 2018年4月至5月在北京地區招募表觀健康志愿者43名，排除劇烈運動和泌尿系統感染各1名，最終納入志愿者41名，其中男性18名。入選標準：漢族，在北京地區居住滿1年，留尿前3天清淡飲食，肝腎功能、血脂指標均在參考區間內。排除標準：近1月內有確診疾病，服藥，作息不規律或有熬夜、值夜班等情況，女性月經期，留尿期間有劇烈運動和情緒激動發生，血清<1.5 mL，有脂血、溶血和黃疸現象。本研究通過北京協和醫院倫理委員會批準(倫理審查編號：ZS-1608)，研究對象均簽署知情同意書。

1.2主要儀器與試劑 AU2700生化分析儀和AU5800生化分析儀(美國貝克曼庫爾特公司)，尿液收集容器(魔桶MOTOM1，北京金寓潤澤公司)，Cr試劑盒(酶法，四川邁克公司)，總蛋白(Pro)試劑盒(免疫比濁法，英國朗道公司)，微量清蛋白(mAlb)試劑盒(免疫比濁法，北京利德曼公司)，鉀(K)、鈉(Na)、氯(Cl)(間接離子選擇電極法)、鈣(Ca)試劑盒(偶氮Ⅲ砷法)、磷(P)試劑盒(鉬酸鹽法)、尿素(Urea)試劑盒(酶法)、尿酸(UA)試劑盒(酶法)均購自美國貝克曼庫爾特公司，以上檢測項目均采用各自配套校準品校準。所有樣本測定前后室內質控均在控，所有項目定期參加國家衛生健康委臨床檢驗中心室間質評，結果良好。

1.3方法

1.3.1尿液樣本留取及項目檢測 為志愿者提供統一的量筒(精確到1 mL)，統一講解留尿要求，所有尿液不添加防腐劑，置陰涼處保存，要求志愿者將24 h內所有的隨機尿分別收集，標明時間和尿量，每次隨機尿取2～3 mL用于檢測，其余并入容器中計算24 h尿。所有標本分裝凍存，于同一時間段內完成檢測。在檢測前尿液標本需平衡至室溫，2 500×g離心10 min后經AU2700生化分析儀完成檢測，隨機尿和24 h尿檢測項目為UA、Cr、Pro、mAlb、Urea、Ca、P、K、Na和Cl。

1.3.2血清留取及項目檢測 留完24 h尿當日清晨空腹采集靜脈血，經2 500×g離心10 min后分離血清，經AU5800生化分析儀完成肝腎功能和血脂等項目的測定。

2 結果

2.1基線資料 基線資料如性別、年齡、估算腎小球濾過率(eGFR，根據2009年CKD-EPIcr 公式計算)、隨機尿量、24 h尿量等見表1。

表1 健康志愿者的基線資料

2.2尿生化項目經Cr校正前后CV的比較 UA、Pro、mAlb、Urea、Ca、P、K、Na、Cl經Cr校正前、后CV(%)分別為：47.66±13.9和31.20±13.02、54.45±19.63和29.10±17.30、58.39±21.59和40.38±22.44、41.26±17.48和23.42±9.38、56.10±17.79和44.41±16.13、61.58±22.21和35.81±17.59、51.75±18.28和40.45±18.42、41.94±14.80和41.03±13.46、40.02±14.68和39.87±18.40。Cr的CV(%)為53.09±18.48。UA、Pro、mAlb、Urea、Ca、P、K經校正后，CV均降低(P均<0.01)，而Na、Cl校正前、后CV差異無統計學意義(P均>0.05)。

2.324 h尿各項目在性別之間的比較 見表2。男、女性Cr水平差異有統計學意義(P<0.01)，其他項目差異均無統計學意義(P均>0.05)。

表2 24 h尿在不同性別間的比較

2.4尿生化項目的晝夜差異 見表3和圖1。UA、Na、Cl、K有晝夜差異，白天均高于夜間(P均<0.01)，P也有晝夜差異，但夜間高于白天(P<0.01)，其他項目沒有明顯的晝夜差異(P均>0.05)。

表3 尿生化項目的晝夜差異

注：A～I分別為UA、Pro、mAlb、Urea、Ca、P、K、Na、Cl日內節律。

3 討論

Cr是肌肉組織的代謝產物，肌肉質量相對恒定，而Cr可自由通過腎小球屏障且幾乎不被腎小管重吸收，所以Cr排泄也相對恒定[9]。尿Cr對降低尿mAlb變異度是一個很好的校正參數[10]。本研究顯示，經Cr校正后多個項目的變異度均下降，但Cr校正前后Na、Cl的CV差異無統計學意義；可能原因是Na排出受攝入量的多少而增減，即多吃多排，少吃少排，不吃不排，而體內Cl的變化基本與Na一致[11]。

男女間Cr差異有統計學意義(P<0.01)，所以用Cr校準時要根據性別設置參考區間或醫學決定水平等。男性體質指數(BMI)>女性，Urea/Cr與BMI具有相關性(r=0.790)[12]；本研究中男女間Urea比較的P值為0.052，接近檢驗水準0.05，所以存在差異的可能性較大，也應該考慮到性別的差異。

本研究顯示，Na、Cl、K、UA存在晝夜差異，白天排泄高于夜間，與文獻報道一致[13-16]。P也有晝夜差異，表現為晝低夜高，與Touitou等[12]的研究報道一致。若模仿日本靜岡縣大學實驗按照07：30—12：30(上午)、12：30—17：30(下午)、17：30—22：30(晚上)、22：30—07：30(夜間)分組，P/Cr(mmol/g)均值分別為12.47、13.27、15.08、15.16，則與該實驗的P排泄率(mg/h)的數據趨勢一致[17]。Ix等[18]研究也顯示，健康人P夜間排泄率高于白天。本研究顯示，Pro、mAlb、Urea、Ca沒有明顯的晝夜差異；但時間段劃分、人群選擇或計算方式可能影響結論[17]。若某些項目具有排泄節律，我們則要選擇能更好反映患者病情的特定時段來采集尿液，并提醒臨床醫生合理解讀檢驗結果。

本研究存在的不足之處主要包括2點。(1)凌晨1：00—4：00志愿者大多處于睡眠狀態，樣本量較少，分別只有2、5、2、2例；為減小抽樣誤差，將1：00—2：00和3：00—4：00樣本量分別合并，圖1E和圖1F中Ca、P在3：00—4：00與前后2個點差異較大，可能出現了較大的抽樣誤差，還需再次驗證。(2)本研究過程較復雜、耗時，自愿者不易招募，樣本量偏少，男女比例不均；激素波動對部分離子類隨機尿產物會產生影響，按晝夜分組可能掩蓋此類影響，所以還需增加樣本量，評估激素對特定項目日內變異的影響。

本研究只分析了健康人相關數據，后期還會招募處于慢性腎病各期的患者，分析各期患者各項指標的分布特點及與健康人之間的差異。