血清uMtCK、NSE、CYFRA21-1、Pro-GRP及LD檢測在肺癌診斷中的應用及其與臨床病理分期的關系

謝春霞，田可港，徐淑華，張 磊，牟曉峰

青島市中心醫院檢驗科，山東青島 266042

肺癌是目前世界上常見的惡性腫瘤之一，起病較隱匿、惡性程度高、病情進展快。早期發現和診斷對肺癌治療和預后具有重要意義[1-2]，可提高肺癌患者的生活質量，延長其生存期限[3]。腫瘤標志物目前在腫瘤的早期預測與預后監測等方面發揮著越來越突出的作用，因其檢測過程對患者創傷較小，已廣泛用于臨床[4]。尋找新的靈敏度和特異度更高的肺癌診斷標志物，對提高肺癌的臨床診斷和治療水平有重要意義。本研究選取了廣泛型線粒體肌酸激酶(uMtCK)、神經元特異性烯醇化酶(NSE)、細胞角蛋白19片斷(CYFRA21-1)、胃泌素釋放肽前體(Pro-GRP)及乳酸脫氫酶(LD)這幾項標志物進行檢測，旨在探討上述指標在肺癌診斷、病理分型及分期判斷中的價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2018年3月至2019年2月在本院住院治療且有明確病理診斷的肺癌患者78例納入研究作為肺癌組；排除合并其他類型腫瘤的患者，排除合并嚴重心腦血管疾病的患者；其中男47例、女31例，年齡38～70歲。另外，選取同期于本院治療的良性肺部結節患者20例作為肺部良性結節組，其中男12例、女8例，年齡32～68歲。兩組間性別、年齡等一般資料比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。納入研究者均對本研究知情同意，并簽署知情同意書。

1.2儀器與試劑 羅氏公司Cobas e602型電化學發光分析儀及配套NSE、CYFRA21-1、Pro-GRP檢測試劑盒；日立公司7600型生化分析儀及利德曼公司生產的配套LD檢測試劑盒；SEBIA全自動電泳分析儀及配套的肌酸激酶(CK)同工酶電泳試劑盒。

1.3方法 于清晨抽取各組患者空腹靜脈血3～5 mL置入分離膠采血管，以3 500 r/min離心5 min，收集血清，使用電化學發光免疫分析法檢測NSE、CYFRA21-1、Pro-GRP水平；使用酶法檢測LD水平；采用瓊脂糖凝膠電泳法進行CK同工酶電泳分析。正常參考值如下，NSE：0.0～16.3 ng/mL，CYFRA21-1：0.0～3.3 ng/mL，Pro-GRP：0.0～68.3 pg/mL，LD：91～240 U/L，CK同工酶電泳：健康者及非腫瘤患者均無uMtCK的檢出。結果大于臨界值視為陽性，小于或等于臨界值則視為正常。

1.4統計學處理 本次研究的數據均采用統計學軟件SPSS18.0進行處理，計數資料以例數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；相關性分析采用Spearman等級相關分析；P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1兩組患者5項檢測指標陽性率的比較 肺癌組uMtCK、NSE及LD陽性率明顯高于肺部良性結節組(P<0.05)；肺癌組CYFRA21-1及Pro-GRP陽性率與肺部良性結節組比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組患者5項檢測指標的陽性率比較(%)

2.2不同組織類型肺癌患者5項檢測指標的陽性率比較 小細胞肺癌組NSE和Pro-GRP陽性率明顯高于非小細胞肺癌組(P<0.05)，而uMtCK、CYFRA21-1及LD陽性率在兩組間比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 不同組織類型肺癌患者5項檢測指標的陽性率比較(%)

2.3不同TNM分期肺癌患者5項檢測指標陽性率的比較 Ⅲ～Ⅳ期肺癌患者uMtCK、NSE、CYFRA21-1、及LD陽性率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)，而兩組間Pro-GRP陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表3。

表3 5項檢測指標在肺癌不同病理分期中的陽性率比較(%)

2.4肺癌組中uMtCK與NSE、CYFRA21-1、Pro-GRP及LD的相關性分析 血清uMtCK與NSE、CYFRA21-1及LD呈正相關(r=0.424、0.488、0.721，P<0.05)，而uMtCK與Pro-GRP無相關性(r=0.117,P>0.05)。

2.5肺癌患者5項檢測指標與臨床病理特征的相關性分析 5項檢測指標與年齡(分為<55歲和≥55歲，前者秩序更高)無明顯相關性(P>0.05)。NSE及Pro-GRP與肺癌病理類型(分為小細胞肺癌、鱗癌、腺癌)相關(r=0.570、0.653，P<0.05)。uMtCK、CYFRA21-1及LD與肺癌病理類型無明顯相關性(P>0.05)。uMtCK、NSE、CYFRA21-1、Pro-GRP、LD均與TNM分期(分為Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期)相關(r=0.419、0.552、0.522、0.356、0.549，P<0.05)。

3 討 論

CK是由M、B兩種不同亞基組成的二聚體，在實際檢驗過程中，時常出現CK-MB同工酶活性高于CK活性的現象，當CK-MB同工酶活性高于CK活性的30%或50%以上時，除考慮CK-BB同工酶的存在外還要考慮uMtCK的干擾。uMtCK是一種低聚的線粒體CK[5]，存在于細胞線粒體膜上，當線粒體崩解時，線粒體膜的小碎片進入血液，作為巨分子酶的一種，它常常伴隨各種腫瘤出現，目前已有uMtCK在乳腺癌、前列腺癌患者血清中過表達的報道[6]。NSE屬于糖酵解酶類，存在于惡性腫瘤中。CYFRA21-1屬于細胞角蛋白19的一部分，當細胞凋亡時，該片段會釋放進入血液循環，特別是在腫瘤細胞中，由于細胞降解水平的提升，會使大量的角蛋白可溶片段進人血液循環，從而造成CYFRA21-1水平升高。Pro-GRP是從胃組織中分離出的一種肽類物質，其在血液中水平穩定，近年來成為一種簡單易測的腫瘤標志物[7]。越來越多證據表明，ProGRP表達異常與惡性腫瘤的發生、發展有密切的關系[8-9]。LD是一種糖酵解酶，在惡性腫瘤患者體內，LD水平有升高表現。

本研究表明，肺癌患者中uMtCK、NSE及LD陽性率均高于肺部良性結節組，表明血清uMtCK、NSE及LD的檢測對臨床篩查和鑒別診斷肺部良惡性疾病具有一定的參考價值，腫瘤患者出現uMtCK的原因可能是腫瘤組織細胞和線粒體膜受到嚴重破壞，或者細胞快速增殖分解，導致線粒體CK由腫瘤組織漏出，從而使血中uMtCK水平升高，肺癌組中CYFRA21-1及Pro-GRP陽性率與肺部良性結節組比較，差異均無統計學意義，原因可能是本研究的病例數偏少，尤其是肺部良性結節組的病例數較少，影響了統計結果的準確性。

相關研究顯示，NSE水平在小細胞肺癌中顯著升高，陽性率在90%以上，是小細胞肺癌最為敏感、特異的腫瘤標志物[10-12]。本研究顯示，NSE和Pro-GRP在小細胞肺癌中的陽性率高達100.00%，說明這2項指標可能有助于區分小細胞肺癌與非小細胞肺癌[13]。CYFRA21-1在肺鱗癌中呈高表達[14]，本研究中CYFRA21-1陽性率在小細胞肺癌組與非小細胞肺癌組間比較差異無統計學意義，可能與非小細胞肺癌組中鱗癌患者比例較少有關；uMtCK和LD陽性率在兩組間比較差異均無統計學意義，原因可能為uMtCK作為新型的腫瘤標志物在良惡性腫瘤鑒別中與LD都有一定的價值，但對于不同病理類型的腫瘤診斷尚缺乏特異性，另一方面，本研究晚期肺癌患者相對較多，腫瘤標志物在不同病理類型中的表達水平均較高，因此差異較小。

血清檢測指標對肺癌臨床分期有一定價值，研究發現，NSE與肺癌腦轉移及預后有關[15]；血清CYFRA21-1水平升高與腫瘤大小、疾病分期有關，本研究結果顯示Ⅲ～Ⅳ期肺癌患者血清uMtCK、NSE、CYFRA21-1及LD陽性率均高于Ⅰ～Ⅱ期，表明其與腫瘤浸潤、轉移等病情進展情況有關，與之前的報道結論一致，血清uMtCK與NSE、CYFRA21-1及LD均呈正相關，分析原因可能是uMtCK水平越高，腫瘤細胞能量代謝越活躍，其增殖裂解的速度也就越快，從而使更多的NSE、CYFRA21-1及LD進入血液中。另外肺癌患者NSE與Pro-GRP的檢測結果與肺癌病例類型相關。本研究還顯示，5項檢測指標水平隨著肺癌患者TNM分期的升高而異常升高，提示這5項檢測指標水平與肺癌的病情嚴重程度和是否發生轉移具有一定的相關性，臨床可以通過檢測這些血清腫瘤標志物水平從而有助于了解腫瘤的大小、轉移情況等。由于本研究納入的臨床病例有限，對uMtCK在肺癌患者預后判斷及分子病理機制中的作用未能涉及，這也將是本課題組下一步研究的重點。

綜上所述，這5項腫瘤標志物在肺癌篩查中的作用各有側重，聯合檢測可輔助肺癌病理類型及TNM分期的判斷，為臨床診斷和治療提供依據。