ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式在ANCA相關(guān)血管炎中的臨床意義

張乃丹，劉利洪，鄒雨沙，李白露，楊 浩，唐 靈，彭美君，張雪文，袁成良△

1.德陽市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,四川德陽 618000；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)檢驗(yàn)系,四川成都 610072；3.川北醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)系，四川南充 637100

抗中性粒細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)抗體(ANCA)相關(guān)血管炎(AAV)根據(jù)臨床表現(xiàn)和病理特征，主要分為顯微鏡下多血管炎(MPA)、肉芽腫性多血管炎(GPA)和嗜酸性肉芽腫性多血管炎(EGPA)[1]。AAV患者體內(nèi)可出現(xiàn)多種自身抗體，以Hep-2細(xì)胞為抗原基質(zhì)的間接免疫熒光法(IIF)是用于抗核抗體(ANA)檢測(cè)的方法；相較于ANA細(xì)胞核熒光模式，ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式的相關(guān)報(bào)道較少。本研究探討了ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式與AAV患者臨床表現(xiàn)和相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果的關(guān)系，以及與ANCA不同熒光模式的對(duì)應(yīng)關(guān)系，旨在為AAV的診斷和預(yù)后判斷提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2009年12月至2019年12月于德陽市人民醫(yī)院就診的AAV確診患者共232例納入研究，納入研究者均同時(shí)進(jìn)行了IIF-ANCA和IIF-ANA檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果分為ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式組和對(duì)照組，分組標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)[2-4]。ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式組：IIF-ANA檢測(cè)為細(xì)胞質(zhì)熒光模式，或IIF-ANA檢測(cè)為混合型，但以細(xì)胞質(zhì)熒光模式為主；對(duì)照組：IIF-ANA檢測(cè)為細(xì)胞質(zhì)陰性，或IIF-ANA檢測(cè)為混合型，但其中不包括細(xì)胞質(zhì)熒光模式。ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式組115例，男22例、女93例，平均年齡(54.85±16.83)歲；對(duì)照組117例，男73例、女44例，平均年齡(55.03±19.28)歲。兩組間性別構(gòu)成比比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

1.2方法 IIF-ANCA和IIF-ANA的檢測(cè)采用歐盟公司的試劑盒，使用的顯微鏡為奧林巴斯公司BX51型顯微鏡。抗髓過氧化物酶抗體(anti-MPO)、抗蛋白酶3抗體(anti-PR3)、抗心磷脂抗體(ACA)的檢測(cè)采用磁微粒化學(xué)發(fā)光儀(江蘇浩歐博生物醫(yī)藥股份有限公司)；補(bǔ)體C3和C4的檢測(cè)采用西門子BN-Ⅱ全自動(dòng)蛋白分析儀。血常規(guī)檢測(cè)采用希森美康公司XE-5000型血液學(xué)分析儀；凝血檢測(cè)采用希森美康公司CA-7000型分析儀；常規(guī)生化指標(biāo)檢測(cè)采用西門子ADVIA-2400型生化分析儀；試劑均采用儀器配套試劑。

2 結(jié) 果

2.1納入研究者基本特征比較 ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式組男性比例明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式組胸部受累比例明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，心血管受累比例明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。年齡、首發(fā)癥狀至確診時(shí)間、伯明翰血管炎活性評(píng)分(BVAS)及其余系統(tǒng)/部位受累情況兩組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。兩組間繼發(fā)性血管炎的比例及引起繼發(fā)性血管炎的主要疾病(系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征)所占比例比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 研究對(duì)象的臨床特征

續(xù)表1 研究對(duì)象的臨床特征

2.2ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式組和對(duì)照組臨床常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)的比較 ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式組總蛋白(TP)、三酰甘油(TG)水平和平均紅細(xì)胞體積(MCV)高于對(duì)照組(P<0.05)；ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式組血肌酐、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)水平低于對(duì)照組(P<0.05)；兩組間其余臨床常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

2.3ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式組和對(duì)照組自身抗體及補(bǔ)體水平的比較 ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式組ACA、補(bǔ)體C4水平均高于對(duì)照組(P<0.05)，anti-MPO、anti-PR3和補(bǔ)體C3水平均低于對(duì)照組(P<0.05)，見表3。

2.4ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式組中血肌酐水平的影響因素分析 采用多元線性回歸進(jìn)一步分析兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的臨床常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)對(duì)ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式組患者血肌酐水平的影響。因變量為血肌酐，預(yù)測(cè)變量為TP、TG、WBC、MCV、PLT、anti-MPO、C3和C4，多因素方差分析顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.171，P<0.05)。線性回歸分析顯示，自變量anti-MPO對(duì)應(yīng)的P<0.001，表明anti-MPO對(duì)ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式組患者血肌酐水平的影響具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表4。

2.5ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式與不同ANCA熒光模式的對(duì)應(yīng)關(guān)系分析 不同ANCA熒光模式組中ANA細(xì)胞質(zhì)顆粒型所占比例比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步做兩兩比較，核周型ANCA(pANCA)組和非典型ANCA(xANCA)組ANA細(xì)胞質(zhì)顆粒型所占比例明顯高于胞質(zhì)型ANCA(cANCA)組(P<0.017)；而pANCA和xANCA組之間ANA細(xì)胞質(zhì)顆粒型所占比例比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.017)。見表5。

表5 ANCA熒光模式與5種ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式的關(guān)系[n(%)]

3 討 論

AAV患者體內(nèi)可出現(xiàn)多種自身抗體，且大多數(shù)患者伴有不同程度的腎臟受損[5-6]。2012年的Chapel Hill會(huì)議將ANCA作為對(duì)AAV具有診斷意義的血清學(xué)標(biāo)志物[7]。有專家共識(shí)明確指出，ANCA熒光模式分為必報(bào)模式(包括cANCA、pANCA)和選報(bào)模式(xANCA)[3]。ANA作為目前臨床應(yīng)用最廣泛的一組自身抗體，對(duì)于自身免疫性疾病(AID)的篩查具有重要意義。《抗核抗體檢測(cè)的臨床應(yīng)用專家共識(shí)》[4]明確指出，ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式中，必報(bào)模式包括纖維型、顆粒型、網(wǎng)狀/線粒體型、極性/高爾基體型和棒環(huán)狀型[4]。

目前關(guān)于IIF-ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式的研究主要圍繞AID進(jìn)行，并且研究較為明確的熒光模式主要為抗線粒體抗體、抗高爾基體抗體及抗棒環(huán)狀型，關(guān)于其余必報(bào)熒光模式的臨床意義暫不明確[8-10]。有文獻(xiàn)報(bào)道,抗細(xì)胞質(zhì)熒光模式出現(xiàn)在未分化結(jié)締組織病(UCTD)相關(guān)間質(zhì)性肺病(ILD)患者,但并沒有觀察到與高分辨率計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)(HRCT)的檢查結(jié)果具有相關(guān)性[11]。在抗合成酶抗體綜合征疑似患者的臨床篩查中，抗細(xì)胞質(zhì)自身抗體和抗Jo-1抗體的檢測(cè)組合顯示出較高的靈敏度(92%)和特異度(89%)[12]。在老年組(60～76歲)健康體檢人群中，IIF-ANA檢測(cè)為細(xì)胞質(zhì)熒光模式的占總陽性例數(shù)的35.71%，僅次于IIF-ANA細(xì)胞核斑點(diǎn)型(42.85%)，提示該模式的出現(xiàn)可能與患者年齡相關(guān)[13]。另有研究證實(shí)，抗線粒體抗體與特發(fā)性炎性肌病[14]及系統(tǒng)性紅斑狼瘡中循環(huán)自身抗原有關(guān)[15]。抗高爾基體抗體則易出現(xiàn)在AID、病毒感染及神經(jīng)系統(tǒng)等疾病中[16-18]。抗棒環(huán)狀型則主要出現(xiàn)在感染丙型肝炎病毒并接受干擾素/利巴韋林治療的患者中[19-22]。本研究顯示，IIF-ANA細(xì)胞質(zhì)陽性者在IIF-ANCA篩查陽性患者中的比例為17.29%，提示ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式的出現(xiàn)與AAV可能存在一定關(guān)聯(lián)，但是ANA是否參與AAV發(fā)病以及在其中的具體作用目前尚不清楚。用BVAS評(píng)價(jià)AAV活動(dòng)性，ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式組與對(duì)照組得分無明顯差異，但在臨床癥狀方面，ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式組患者的胸部受累(例如肺部結(jié)節(jié)/纖維化、胸膜炎、咯血)情況多于對(duì)照組，而心血管受累(例如心包炎、新近心肌梗死、慢性心力衰竭)情況少于對(duì)照組，提示IIF-ANA細(xì)胞質(zhì)陽性對(duì)于AAV患者肺部損傷和心臟損傷的鑒別診斷及預(yù)后判斷可能有一定價(jià)值[23-24]。

本研究顯示，與對(duì)照組AAV患者相比，ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式組患者的血肌酐和anti-MPO水平更低，提示IIF-ANA細(xì)胞質(zhì)陽性的AAV患者腎臟損傷程度更輕，線性回歸分析顯示，anti-MPO與血肌酐呈正相關(guān)，提示篩查ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式對(duì)于AAV患者腎損傷的輔助判斷有一定意義。而關(guān)于ANA在細(xì)胞質(zhì)中如何參與AAV患者腎損傷過程的機(jī)制還需要進(jìn)一步研究，AAV患者的免疫細(xì)胞如何參與細(xì)胞質(zhì)ANA生成的調(diào)控也還需要進(jìn)一步通過動(dòng)物模式來進(jìn)行研究。

本研究中，IIF-ANA細(xì)胞質(zhì)網(wǎng)狀/線粒體型在不同ANCA熒光模式的患者中均未檢出，而其余4種必報(bào)模式均有不同程度的檢出率，其中IIF-ANA細(xì)胞質(zhì)顆粒型易出現(xiàn)在pANCA組和xANCA組，而在cANCA組檢出率較低，細(xì)胞質(zhì)顆粒型是否可以成為ANCA熒光模式的預(yù)測(cè)指標(biāo)，目前暫時(shí)沒有文獻(xiàn)報(bào)道。由于IIF-ANA檢測(cè)可以在自身免疫性疾病出現(xiàn)臨床癥狀和病理損傷之前出現(xiàn)陽性，IIF-ANA細(xì)胞質(zhì)顆粒型的檢出對(duì)臨床無癥狀的早期AAV患者可能具有提示作用。

綜上所述，ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式與AAV患者的部分臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)水平有一定關(guān)系。AAV患者IIF-ANA細(xì)胞質(zhì)熒光模式可以為臨床醫(yī)師提供更多有價(jià)值的信息，有助于AAV的診斷和預(yù)后判斷。