葡萄皮中白藜蘆醇浸膏的提取工藝優化

（西北民族大學化工學院 甘肅 730106）

葡萄（拉丁學名：Vitis vinifera）為葡萄科葡萄屬的木質藤本植物，果實球形或橢圓[1]。根據特性來看，葡萄介于熱性和涼性之間，屬于平性水果，所以這一類的水果更加的適合多數人食用。有開胃健脾、補虛強腎、補氣益血、強健筋骨等作用。葡萄皮中白藜蘆醇的含量高于葡萄的其他部位。白藜蘆醇現在已經被研究發現具有非常高的藥用價值且已經成為了世界上不可或缺的營養和藥用的商品等。

白藜蘆醇的化學名稱是3,4',5-三羥基-1,2-二苯基乙烯（3,4',5-芪三酚）。它是在植物被外界不明因素的影響下為保護自己所產生的一種抗菌素[2]。

白藜蘆醇于1940年首次從毛葉藜蘆（veratrum guandiforum）的根部分離得到。經查詢文獻得知，白藜蘆醇是一種天然的抗氧化劑，可降低血液粘稠度[3-7]，抑制血小板凝結和血管舒張，保持血液暢通[8]，具有抗動脈粥樣硬化和冠心病[9]，缺血性心臟病、高血脂的防治作用，對認知障礙也有一定的改善作用[10-12]，還可以預防癌癥的發生及發展[13-17]。

1.材料儀器與設備

(1)實驗材料

夏黑葡萄皮、無水乙醇（分析純）（中國食品藥品檢定研究院）、白藜蘆醇對照品（中國食品藥品檢定研究院）（分析純）、氫氧化鈉溶液、鹽酸溶液、蒸餾水、濾紙、硫酸鋁濾紙、容量瓶、燒杯、長頸漏斗、玻璃棒、鐵架臺、移液管、吸耳球、磨口錐形瓶、溫度計。

(2)實驗儀器與設備

紫外分光光度計（722E型-上海光譜儀器有限公司）、恒溫水浴鍋（HWS28型-電熱恒溫水浴鍋上海一恒科學儀器有限公司）、分析天平（FA1204型-天津天馬衡基儀器有限公司）、電子天平（FAZ204B型-上海精密科學儀器有限公司）、分子篩(天津華星金輝制藥機械有限公司、鼓風干燥箱（DHG-9055A-上海齊欣科學儀器有限公司）、旋轉蒸發儀（上海緒航科學儀器有限公司）。

2.實驗方法與結果

(1)檢測波長的確定

精密稱取白藜蘆醇對照品5mg于50ml的棕色容量瓶中，用乙醇（分析純）溶解并定容至刻度線，以乙醇溶液作空白對照，對白藜蘆醇對照品溶液進行全波長紫外掃描，結果表明白藜蘆醇的乙醇溶液在326nm處有最大吸收，而空白樣品在此處無吸收，對波長測定無干擾，故選擇326nm為檢測波長。

(2)標準曲線的建立

將上述配制的0.1mg/ml的白藜蘆醇標準溶液，之后通過梯度稀釋，配制成0.004mg/ml、0.005mg/ml、0.006mg/ml、0.007mg/ml、0.008mg/ml的白藜蘆醇的標準對照品溶液，以乙醇溶液作空白對照，在最大吸收波長326nm下測定吸光度，再以吸光度（A）對濃度（C）進行線性回歸，得回歸方程A=117.32x+0.00782（R2=0.9994）。

圖1

(3)材料的前處理

首先將葡萄皮去肉洗凈，置于干燥箱中，在65℃下干燥8小時至干脆，然后將其粉碎全部通過2號篩，95%通過2號篩。用托盤天平稱取葡萄皮粉末5g，置于蒸餾燒瓶中，加入35ml95%乙醇，60℃下水浴浸提60min后，常壓下長頸漏斗過濾。所得濾液按照紫外光譜條件檢測。按照水浴溫度為50℃、60℃、70℃；水浴時間為40min、60min、80min；乙醇濃度為50%、60%、70%；料液比為1:6、1:7、1:8，進行四因素三水平的正交優化。

(4)葡萄皮中白藜蘆醇的提取率的測定

根據白藜蘆醇的標準曲線計算樣品中白藜蘆醇的質量濃度，由下式計算提取率。

式中：C-葡萄皮中的白藜蘆醇的質量濃度，mg/ml；V-樣品液體積，ml；D-稀釋倍數；M-樣品質量，g。

(5)正交實驗設計

以浸提液中白藜蘆醇的浸提液為指標，按照2.3的步驟操作，分別考察不同浸提溫度（50℃、60℃、70℃）、不同浸提時間（40min、60min、80min）、不同乙醇濃度（50%、60%、70%）、不同料液比（1:6、1:7、1:8）的浸提效果。正交試驗因素與水平見表1，正交試驗設計及結果見表2。

表1 正交試驗因素與水平

表2 浸提條件及指標檢測結果

(6)數據分析與結果

由表2參數可知，對葡萄皮中白藜蘆醇提取率的影響，由大到小依次為料液比＞乙醇濃度＞浸提時間＞浸提溫度。白藜蘆醇的最佳提取工藝組合為A2B2C3D1，即浸提時間為60min，浸提溫度為60℃，料液比為1:8，乙醇濃度為50%，在上述條件同時滿足的情況下對葡萄皮中白藜蘆醇提取的效率可達到最大。計算所得其白藜蘆醇的提取率為2.079%。

3.討論

葡萄皮中的白藜蘆醇含量測定的方法有超聲萃取法、堿提酸沉法、加熱回流法等[18-19]，查詢相關文獻得知，加熱回流法更有利于白藜蘆醇的浸出。因為該方法在提取過程中，可以避免溶劑的揮發，而且溶劑可以回收循環利用，同時也避免了水溶性成分的干擾，具有操作簡便、提取效率高的特點。