腺苷酸環化酶相關蛋白2、纖維連接蛋白1表達與胃癌病理類型及預后關系探討

馬 蓉,張新愛,楊 洋,吳紅梅

(寶雞市人民醫院病理科,陜西 寶雞721000)

胃癌是常見惡性腫瘤，具有較高的發病率，在我國致死率僅次于肺、肝癌[1]。盡管手術及放、化療對其生存情況有所改善，但其5年生存率仍較低，嚴重影響人類健康[2]。有研究表明分子生物標志物的發現和應用將改善患者的預后，腺苷酸環化酶相關蛋白2(Adenylate cyclase-associated protein 2,CAP2)存在于人體的腦、心臟、骨骼、肌膚中，有研究表示其在肝癌、乳腺癌、膀胱癌等腫瘤組織中呈現高表達，近來研究表明其與胃癌的發展及預后也存在一定關系[3]。纖維連接蛋白1(Fibronectin,FN1)是細胞外基質糖蛋白，參與基質重塑，在細胞黏附、生長中發揮作用，與腫瘤、關節炎等疾病相關[4]。本研究探討胃癌及癌旁組織中CAP2、FN1的表達及其表達量與患者病理類型及預后的關系，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2016年2月至2017年12月來我院行胃癌根治術手術切除術患者118例，男63例，女55例，年齡為26～73歲，平均(48.59±7.34)歲。所有患者術后切除標本于30 min內采集，并取離腫瘤邊緣5 cm以上的癌旁組織作為對照。病例納入標準：①接受手術前未經過放、化療，術后經病理確診為胃癌；②患者均同意進行手術；③患者病歷資料完整。排除標準：①合并惡性腫瘤患者；②伴有心、肝、腎等重大疾病患者；③不能完成隨訪患者；④術中死亡患者。本研究經醫學倫理委員會同意。

1.2 檢測方法 采用免疫組化法檢測胃癌組織及癌旁組織中CAP2、FN1的表達情況。步驟：切片、烤片，常規脫蠟后，用梯度酒精脫水處理，再進行微波抗原組織修復15 min，冷卻后用PBS沖洗，再用3% H2O2孵育10 min，PBS沖洗2次后，加入正常山羊血清進行封閉20 min，加入兔單抗CAP2(或兔單抗FN1)，37 ℃下孵育1 h，TBST沖洗2次。加入鼠兔通用二抗，37 ℃下孵育1 h，PBS沖洗2次，再行DAB顯色、蘇木素復染、脫水、透明等，最后用中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。參考Sung等[5]標準，出現棕黃色顆粒為CAP2及FN1表達陽性細胞，以0～4分來判定陽性細胞的百分比(陽性細胞數/總細胞數×100)：陽性細胞百分比<5%(0分)；陽性細胞百分比為6%～25%(1分)；陽性細胞百分比為26%～50%(2分)；陽性細胞百分比為51%～75%(3分)；陽性細胞百分比>75%(4分)。染色強度按無染色，弱、中、強染色分別評為0、1、2、3分。以兩個指標的乘積(IS)作為總評分：<4分為低表達，≥4分為高表達。

1.3 觀察指標 以電話及門診形式對所有患者進行隨訪，隨訪內容包括：患者病情進展、影像學檢查，記錄患者生存情況，在第1年每3個月隨訪1次，第2～3年，每6個月隨訪1次，隨訪截止時間2020年2月。

2 結 果

2.1 CAP2、FN1在胃癌組織及癌旁組織中的表達 CAP2、FN1在胃癌組織中呈高表達(P<0.05)，在癌旁組織呈低表達(P<0.05)，見表1。

表1 CAP2、FN1在胃癌組織及癌旁組織中的表達(例)

2.2 胃癌病理類型與CAP2、FN1表達的關系 CAP2、FN1表達與組織分化、淋巴結轉移、浸潤深度有關(均P<0.05)，與性別、年齡、癌細胞類型、腫瘤部位、腫瘤大小無關(均P>0.05)，見表2。

表2 胃癌病理類型與CAP2、FN1表達的關系(例)

2.3 CAP2、FN1表達與預后關系 隨訪3年，存活71例，總生存率為60.17%。CAP2低表達組的3年生存率為76.47%，高于CAP2高表達組的47.76%(P<0.01)；FN1低表達組的3年生存率為77.55%，高于FN1高表達組的47.83%(P<0.01)，見表3(圖1)。

表3 CAP2、FN1表達與預后關系

圖1 CAP2、FN1表達與生存分析

3 討 論

多數胃癌患者確診時已處于晚期，患者預后較差，若能從分子水平探究胃癌的發病機制，尋找新的預后指標，并進行靶向治療，將有利于延長患者的生存時間[6]。CAP2最初在酵母中發現，能夠調控信號轉導及細胞骨架，在調節肌動蛋白細胞骨架中起著重要作用，與細胞遷移相關，是腫瘤發生、轉移的基礎，能為分子靶向治療提供依據[7]。在肝細胞癌、乳腺癌中CAP2均呈高表達，并與患者生存情況有關[8]。還有研究[9]表明CAP2在惡性黑色素瘤中過表達，參與了惡性黑色素瘤的侵襲行為，是其預后的一種新標志物。本研究中，CAP2在胃癌組織中呈高表達，其表達量與組織分化、浸潤深度、淋巴結轉移有關，說明CAP2參與胃癌的發生與發展。CAP2定位于ras基因的下游，參與了細胞的極化，能夠通過調節細胞增殖活性，從而促進腫瘤的發生[10]。還有研究[11]表明CAP2通過促進LRP5/6磷酸化，參與Wnt信號調節，從而影響胃癌發展。CAP2低表達組的3年生存率為76.47%，高于CAP2高表達組的47.76%，說明CAP2的表達量與胃癌患者預后相關，能作為預后的標志物。葛思堂等[12]研究表明CAP2在胃癌組織中的表達量均高于癌旁組織，且CAP2高表達組患者術后5年生存率低于低表達組，與本研究結果一致。Li等[13]研究表明CAP2在增強細胞運動中起著重要作用，在胃癌中表達水平上調，是胃癌的重要分子標志物。

FN1是一種多功能異二聚體糖蛋白，與宿主防御和轉移相關，能夠維持基底膜的穩定性，參與乳腺癌、鼻咽癌等多種疾病的發生與發展[14-15]。有研究[16]表明FN1被用于檢測EMT標記物，還是頭部頸鱗狀細胞放射抗性的潛在生物標志物；也有研究[17]表明FN1通過激活MMP2/MMP9(EMT通路)促進胃癌細胞的增殖；同時在腦膠質母細胞瘤、肺癌、食管癌中均呈高表達，與預后顯著相關。本研究中，FN1在胃癌組織中呈高表達，其表達量與組織分化、浸潤深度、淋巴結轉移有關，說明FN1參與胃癌的發生與發展。FN1低表達組的3年生存率為77.55%，高于FN1高表達組的47.83%，說明FN1表達量與胃癌患者預后相關。FN1與細胞黏附、細胞骨架蛋白調節有關，能通過調節A431-Ⅲ細胞中VEGF通路、PI-3K/Akt2通路，進而參與腫瘤的信號通路的調控[18]。孫陽等[19]研究表明FN1高表達是胃癌預后不良的因素，FN1使得腫瘤細胞具有運動性，使其具有侵襲及轉移能力。

綜上，CAP2與FN1在胃癌組織中表達水平均較高，其表達量與組織分化、浸潤深度、淋巴結轉移相關，參與腫瘤的進展，較高水平的CAP2與FN1表達會影響患者的生存情況，CAP2、FN1可作為腫瘤治療的藥物靶點。