膠體金法快速檢測茶葉中甲氰菊酯農藥殘留

梁 科，黃紫茵，葉秋雄，梁俊發，李 斌*

（1.廣東達元綠洲食品安全科技股份有限公司，廣東廣州 510530；2.廣州市食品檢驗所，廣東廣州 510410）

“茶”作為中國特色傳統飲品，其食用安全問題不僅關系到國家形象，影響我國茶葉產品進出口市場競爭力[1]。影響食品安全的主要問題是農藥殘留。部分農藥因為是脂溶性的，難以被雨水沖刷除去，若加上打藥時間與采摘時間過短，將會嚴重危害到消費者的身體狀態。

甲氰菊酯是一種擬除蟲菊酯類殺蟲殺螨劑，化學式為C22H23NO3，中等毒性，具有觸殺、胃毒和一定的驅避作用，該藥殺蟲譜廣，擊倒效果快，持效期長，對葉螨類害蟲具有良好的防治效果，特別適合在害蟲、害螨并發時使用。《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）對茶葉中甲氰菊酯的最大殘留限量值為5 mg/kg。

目前，中國茶葉農藥殘留檢測主要依據農藥的種類和特性，進行有機溶劑萃取、固相萃取和凝膠色譜等方法的提取凈化，并采用液相色譜或氣相色譜進行分離檢測[2]。但鑒于茶葉成分繁雜，用常規方法處理的提取物往往對農藥殘留的檢測干擾較大，耗時耗材，甚至導致檢測器的污染。為了前處理的高效提取，通常經過3次或多次提取，對于含水量高的樣品還需要加無水硫酸鈉，對于含糖量高的樣品則需要加入適量的水以降低糖濃度[3]。

隨著我國國家食品安全標準的不斷完善，茶葉中最大農藥殘留限量參數不斷擴增，農藥殘留限量值不斷修訂，趨于更加合理與完善[4]。即將執行的《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）對茶葉農藥殘留的要求作出顯著的調整，要求更加嚴格。為解決茶葉農殘檢測現存難題，本產品采用膠體金技術，以膠體金納米顆粒標記甲氰菊酯單克隆抗體，建立快速檢測甲氰菊酯的競爭型免疫層析試紙法。樣品中待測物在側向流動的過程中，與膠體金標記的特異性單克隆抗體結合，抑制了抗體和檢測線（T線）上包被抗原的結合，從而導致T線顏色的變化。T線顯色的強弱與待測物的含量呈負相關。通過比較檢測線T線與質控線（C線）顯色深淺來對檢驗結果進行判讀。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

采集茶葉市場20份茶葉樣品，包含綠茶、毛尖、龍井、單樅、鐵觀音、普洱茶、紅茶及烏龍茶。

陰性樣品：采用農業部標準方法[5]進行檢測，甲氰菊酯農藥殘留未檢出的樣品為陰性樣品。

1.2 材料與試劑

甲氰菊酯農藥標準品：甲氰菊酯（批號：20210215），農藥為上海農藥鑒定所生產標準品粉末，由廣東達元綠洲食品安全科技股份有限公司實驗人員精準配制為1 000 mg/L標準液，4 ℃保存備用。

1.3 試驗方法

1.3.1 標準方法

參照《食品安全國家標準 植物源性食品中208種農藥及其代謝物殘留量的測定 氣相色譜-質譜聯用法》（GB 23200.113—2018）中對茶葉菊酯類農藥的方法進行測定。

1.3.2 快速檢測方法

茶葉甲氰菊酯速測法采用廣東達元綠洲食品安全科技股份有限公司研制的速測卡，參照說明書操作，有效期內使用。

1.3.3 檢出限試驗

在經驗證結果甲氰菊酯為陰性的樣品中，添加不同濃度的甲氰菊酯標準溶液，分別進行測定，每個濃度水平檢測5批次樣品，記錄陰陽性數量，計算其靈敏度，當靈敏度達到為100%時，對應的濃度即為該方法的檢出限。

1.3.4 樣品加標試驗

在經驗證為甲氰菊酯陰性的綠茶、龍井、鐵觀音、單樅、紅茶、普洱樣品中，添加檢出限水平的甲氰菊酯標準溶液進行測試，其中，每種基質樣品加標樣品10批，陰性樣品10批，記錄陰陽性結果數量，并計算其靈敏度、特異性、假陽性率和假陽性率。

1.3.5 重復性試驗

隨機抽取5個批次的茶葉甲氰菊酯膠體金速測卡檢測陰性樣品和陽性樣品。

2 結果與分析

2.1 檢出限試驗結果

由表1可知，毛尖和鐵觀音在0.5 mg/kg、1.0 mg/kg兩個濃度點的甲氰菊酯檢出率較低，在濃度為2 mg/kg時，甲氰菊酯檢出率達到100%，紅茶、熟普在1.0 mg/kg濃度點，甲氰菊酯的檢出率達到100%，因此甲氰菊酯速測卡對4種常見茶葉樣品的最低檢出限為2 mg/kg。

表1 檢出限試驗結果

2.2 樣品加標試驗

采用茶葉甲氰菊酯快速檢測卡對60份茶葉加標陽性樣品、60份陰性茶葉樣品進行檢測，結果如表2所示，其中龍井陰性樣中有一份檢出陽性，可能為提取時提取出的茶多酚含量較高所造成的假陽性。因此，計算得茶葉甲氰菊酯膠體金快速檢測方法的靈敏度為100%，特異性為98.3%，假陽性率為1.7%，假陰性率為0%。

表2 靈敏度、特異性、假陽性及假陰性率試驗結果

2.3 重復性試驗結果

收集5個不同生產批號的茶葉甲氰菊酯膠體金卡，分別檢測6個通過標準方法驗證的樣品。由表3可知，3個陰性樣品的檢測結果都為陰性，3個陽性樣品的檢測結果都為陽性。且同一樣品，不同生產批次的卡條顯色情況一致，說明該速測卡具有較好重現性。

表3 重復性試驗結果

3 結論

茶湯成分復雜，干擾物質多，傳統方法需要多次提取、除雜，步驟煩瑣，雖然精準、可定量，但儀器昂貴、操作復雜、且一般需要專業人員進行操作。因此，本研究研制出茶葉甲氰菊酯膠體金快速檢測卡，該產品單個樣品15 min內完成，簡便快速、靈敏、適用性廣、成本低、對人體無毒害；檢出限達到2 mg/kg，低于國家標準限量要求。雖然該產品無法對農藥殘留進行定量檢測，但是隨著我國對茶葉產品質量監管的力度越來越嚴格，對于市場監管、茶企、消費者來說，該產品是對茶葉進行快篩的一款理想產品，適合于現場檢測快速檢測。