95例患兒的聽力損失高危因素與耳聾基因的相關(guān)性

余鳳慈，劉 蕓，譚允寧，鄺雪芳，何清泉

(佛山市婦幼保健院耳鼻咽喉科，廣東 佛山 528000)

聽力損失是導(dǎo)致耳聾障礙的常見疾病，新生兒發(fā)病率約為2.5‰[1]，而發(fā)病的新生兒中約1/2存在導(dǎo)致聽力損失的高危因素[2]。既往對(duì)新生兒聽力篩查與聽力損失高危因素的相關(guān)研究較多，對(duì)耳聾基因篩查的研究也陸續(xù)有所報(bào)道，但對(duì)耳聾基因異常與耳聾高危因素的相關(guān)性研究不多。本研究選擇2015年1月1日至2017年12月31日于佛山市婦幼保健院聽力中心就診的存在高危因素并檢查發(fā)現(xiàn)聽力損失的患兒進(jìn)行耳聾基因篩查，探討聽力損失高危因素與耳聾基因異常的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1研究對(duì)象

選擇2015年1月1日至2017年12月31日在佛山市婦幼保健院就診的有聽力損失高危因素同時(shí)存在聽力篩查異常的患兒95例為研究對(duì)象，男52例，女43例。研究對(duì)象納入標(biāo)準(zhǔn)：①患兒年齡為0～3歲；②快速腦干誘發(fā)電位(automated auditory brainstem response,AABR)和(或)耳聲發(fā)射(otoacoustic emission，OAE)檢查未通過(guò)；③聲導(dǎo)抗儀(中耳分析儀)和耳內(nèi)鏡檢查排除中耳積液；④行聽性腦干檢查V波閾值>30dBnHL；⑤具有耳聾高危因素的患兒；⑥通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)認(rèn)證并審批通過(guò)，患兒家屬的同意，并簽訂知情同意書。

聽力損失程度分級(jí)：根據(jù)聽力較好耳的聽性腦干誘發(fā)電位(auditory brainstem response，ABR)的波V閾值將聽力損失程度分為：V波閾值≤30dBnHL為正常，31～50dBnHL為輕度聽力損失，51～70dBnHL為中度聽力損失，71～90dBnHL為重度聽力損失，≥1dBnHL為極重度聽力損失[3]。

1.2耳聾基因檢測(cè)

選取2015年1月1日至2017年12月31日在佛山市婦幼保健院聽力中心就診的病例，通過(guò)采集末梢血，制作成血片送至深圳華大基因研究院，采用基質(zhì)輔助激光解吸附或電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)，結(jié)合PCR原理和質(zhì)譜技術(shù)，高通量檢測(cè)耳聾易感基因GJB2、GJB3、SLC26A4和線粒體12SrRNA(MTRnR1)的20個(gè)突變位點(diǎn)的突變情況，包括GJB2位點(diǎn)：235de1C，167de1T，176_191de116 GCTGCAAGAACGTGTG，299_300de1AT，35de1G；GJB3位點(diǎn)：538C>T，547G>A；SLC26A4位點(diǎn)：IVS7-2A>G，281C>T，1174A>T，1226G>A，IVS15+5G>A，1975G>C，2027T>A，2162C>T，2168A>G，1229C>T，589G>A；線粒體12SrRNA位點(diǎn)：1494C>T，1555A>G。

1.3問(wèn)卷調(diào)查

統(tǒng)一設(shè)計(jì)調(diào)查問(wèn)卷，采用現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查方式。問(wèn)卷內(nèi)容主要包括：13項(xiàng)聽力損失高危因素，聽力損失高危因素的統(tǒng)計(jì)參照中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部印發(fā)的《新生兒疾病篩查技術(shù)規(guī)范(2010年版)》。患兒就診時(shí)，接診醫(yī)生先讓患兒家長(zhǎng)填寫問(wèn)卷內(nèi)容，再詢問(wèn)患兒家長(zhǎng)并查看患兒的既往病史資料，內(nèi)容包括：一般情況，有無(wú)先天性耳聾家族史、新生兒黃疸達(dá)到換血要求、新生兒窒息、入住新生兒重癥監(jiān)護(hù)病房(neonatal intensive care unit，NICU)、TORCH感染、出生低體重(<1 500g)、新生兒呼吸窘迫綜合征、顱面形態(tài)畸形等，顱面形態(tài)畸形包括耳廓、耳道畸形等。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1聽力測(cè)試結(jié)果

95例受檢者中，重度及以上聽力損失21例，中度聽力損失34例，輕度聽力損失40例；發(fā)現(xiàn)耳聾基因突變者10例，占10.53%(10/95)，其中GJB2基因突變占比為6.32%，SLC26A4基因突變占比為4.21%。

2.2耳聾基因篩查結(jié)果

有高危因素的聽力損失患兒耳聾基因異常情況見表1。其中有永久性聽力障礙史(先天性耳聾家族史)的31例患兒無(wú)合并其他高危因素，24例入住NICU的患兒中有17例新生兒黃疸達(dá)到換血要求、新生兒窒息、機(jī)器通氧超過(guò)48h的患兒是重復(fù)病例；13例機(jī)器通氧超過(guò)48h的患兒分別與出生低體重(<1 500g)、新生兒呼吸窘迫綜合征的患兒為重復(fù)病例，其中6例出生低體重(<1 500g)、7例新生兒呼吸窘迫綜合征的患兒分別與機(jī)器通氧超過(guò)48h的患兒為重復(fù)病例，實(shí)際總病例數(shù)為95例。

表1 不同高危因素的聽力損失患兒耳聾基因突變分布Table 1 Distribution of deafness gene mutation in children with hearing loss with different high-risk factors

31例有永久性聽力障礙史(先天性耳聾家族史)的患兒中，檢出有耳聾基因突變9例，檢出率為29.03%，占比最高。其他高危因素中，其中入住NICU及新生兒黃疸達(dá)到換血要求這兩項(xiàng)分別有1例患兒發(fā)病，實(shí)際為同一個(gè)病例。有永久性聽力障礙史(先天性耳聾家族史)的患兒與入住NICU的患兒的耳聾基因突變檢出率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，χ2=5.622，P<0.05；與新生兒黃疸達(dá)到換血要求的患兒比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，χ2=0.912，P>0.05。其他有高危因素發(fā)病的患兒未攜帶突變的耳聾基因。

2.3耳聾基因異常分布

10例耳聾基因突變者中，GJB2基因突變占比為60.0%，SLC26A4基因突變占比為40.0%。具體耳聾基因異常情況見表2。

表2 10例耳聾基因突變檢測(cè)結(jié)果Table 2 Result of detection of gene mutation in 10 cases with deafness

2.4耳聾基因異常患兒的其他家庭成員耳聾基因異常情況

5例GJB2基因突變患兒父母耳聾基因篩查結(jié)果顯示，1例患兒父親、母親均為235de1C純合突變，4例患兒的父親、母親均為235de1C雜合突變，1例GJB2基因突變患兒父母未做耳聾基因篩查，見表3。

表3 耳聾基因異常患兒的其他家庭成員耳聾基因異常情況Table 3 Gene abnormalities of other family members of children with deafness gene abnormalities

2.5耳聾基因異常患兒的聽力損失情況

6例GJB2基因突變患兒，均為雙耳重度或重度以上聽力損失，4例SLC26A4基因突變患兒，目前其中1例雙耳重度以上聽力損失，1例雙耳中度聽力損失，1例一耳中度、一耳輕度聽力損失，1例雙耳輕度聽力損失。GJB2、SLC26A4基因突變患兒不同聽力損失程度分布見表4。

表4 GJB2、SLC26A4基因突變患兒不同聽力損失程度分布(n)Table 4 Distribution of hearing loss in children with GJB2、SLC26A4 gene mutation(n)

3討論

3.1聽力損失與耳聾基因突變相關(guān)

0～12歲發(fā)病的GJB2及SLC26A4基因突變相關(guān)耳聾，發(fā)病年齡主要集中在嬰兒及幼兒期，均以極重度聽力損失為主，且發(fā)病年齡越小，極重度聽力損失比例越高[4]。人群中致聾基因突變攜帶率高[5]，其中GJB2基因突變攜帶率為8%～9%，SLC26A4 基因突變攜帶率1%～2%，線粒體基因突變攜帶率為0.23%[6]。先天性耳聾患者中的耳聾基因攜帶率更高，有報(bào)道提示大約60%的新生聾兒與遺傳因素有關(guān)[7]。GJB2基因是引起我國(guó)常染色體隱性遺傳性非綜合征型耳聾的最主要致病基因，在普通耳聾群體中檢出率為15%～25%[8-10]；SLC26A4基因在耳聾患者中的突變檢出率為5%～15%[10-12]。本研究主要對(duì)聽力損失患兒進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)10.53%與耳聾基因相關(guān)，其中GJB2基因突變攜帶率約為6.32%，SLC26A4 基因突變攜帶率約為4.21%，考慮到本研究?jī)H對(duì)4個(gè)常見的耳聾基因的20個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行了檢測(cè)，納入的病例有限，具有局限性。

3.2具有高危因素的聽力損失患兒GJB2基因突變分析

GJB2 基因突變可引起編碼的縫隙連接蛋白26(connexin26，Cx26)異常，導(dǎo)致K+進(jìn)入內(nèi)淋巴液的循環(huán)受阻，進(jìn)而引起Corti氏器鉀中毒，最終引起感音神經(jīng)性聾，是最常見的致聾因素[13]。2018年王登茂等[14]報(bào)道，其研究中的GJB2基因235delC位點(diǎn)純合突變患兒及235delC位點(diǎn)復(fù)合突變患兒，其聽力損失均較為嚴(yán)重。本研究中10例耳聾基因突變并聽力損失的患兒，6例GJB2基因突變患兒均為雙耳重度或重度以上聽力損失，1例GJB2基因突變患兒家族中未有先天性耳聾家族史，父母也未行耳聾基因篩查，5例GJB2基因突變患兒家族中有先天性耳聾患者，其中1例為父母雙方均為GJB2基因235de1C位點(diǎn)純合突變，3例為兄弟姐妹中有GJB2基因235de1C位點(diǎn)純合突變，1例為爺爺GJB2基因235de1C位點(diǎn)純合突變，考慮均與遺傳相關(guān)，父母雙方各將攜帶的GJB2基因突變位點(diǎn)遺傳給患兒而致病。

3.3具有高危因素的聽力損失患兒SLC26A4基因突變分析

SLC26A4基因突變主要表現(xiàn)為前庭導(dǎo)水管擴(kuò)大，感音神經(jīng)性聽力障礙，可引起中度至極重度耳聾[15]。SLC26A4基因突變是引起中國(guó)人大前庭水管綜合征(enlarged vestibular aqueduct，EVA)的主要原因[16]。部分EVA患兒出生時(shí)聽力可正常，1歲以后患兒開始行走活動(dòng)，容易發(fā)生頭部碰撞，碰撞后內(nèi)淋巴液經(jīng)擴(kuò)大的前庭水管從內(nèi)淋巴囊倒流入耳蝸或前庭，損傷毛細(xì)胞，從而導(dǎo)致波動(dòng)性聽力下降[17]。本研究的10例基因突變患兒中，4例SLC26A4基因突變患兒，聽力損失以輕、中度聽力損失多，但當(dāng)發(fā)生頭部碰撞等，會(huì)導(dǎo)致波動(dòng)性聽力下降；1例患兒IVS7-2A>G位點(diǎn)純合突變，其父母也均為此位點(diǎn)純合突變；1例患兒1229C>T位點(diǎn)純合突變，其父母也均為此位點(diǎn)純合突變，其父母雙方各將SLC26A4基因突變位點(diǎn)遺傳給患兒，導(dǎo)致患兒也出現(xiàn)此基因突變位點(diǎn)的純合突變；2例SLC26A4基因IVS7-2A>G位點(diǎn)雜合突變患兒；1例父親、1例哥哥為SLC26A4基因IVS7-2A>G位點(diǎn)雜合突變，均考慮為父母一方將SLC26A4基因IVS7-2A>G位點(diǎn)遺傳給患兒，此2例患兒檢測(cè)出SLC26A4基因單個(gè)位點(diǎn)突變。2018年于曉宇等[18]報(bào)道對(duì)中國(guó)華東地區(qū)135例非綜合征性EVA耳聾先證者SLC26A4 基因篩查中，也有報(bào)道非綜合征性EVA耳聾患者攜帶SLC26A4單等位基因突變，74.07%的患者攜帶有SLC26A4雙等位基因突變，7.41%的患者攜帶SLC26A4單等位基因突變，而18.52%的患者未檢測(cè)到任何SLC26A4基因突變；另一方面本檢測(cè)為耳聾基因篩查，具有局限性，而SLC26A4基因含21個(gè)外顯子[14]，可能還有SLC26A4基因其它位點(diǎn)的雜合突變但未在此次檢測(cè)范圍內(nèi)，建議進(jìn)行該基因外顯子測(cè)序。

3.4永久性聽力障礙史與耳聾基因突變相關(guān)性

本研究中10例耳聾基因突變并聽力損失的患兒，其中9例具有永久性聽力障礙史這一高危因素，占永久性聽力障礙史高危因素患兒的29.03%，檢出率最高，與其他高危因素中有發(fā)病并入住NICU的患兒比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。GJB2基因突變患兒與SLC26A4基因突變患兒的對(duì)比，由于病例數(shù)較少，未做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。輕、中度聽力損失患兒中，SLC26A4基因突變多見，重度及以上聽力損失中，GJB2基因多見。

耳聾是最主要的感覺(jué)缺陷之一，我國(guó)每年新增6萬(wàn)～8萬(wàn)聽力障礙兒童[19]，流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)中國(guó)人群的耳聾主要由GJB2、SLC26A4、線粒體12SrRNA等基因突變引起，但不同的地區(qū)突變位點(diǎn)存在差異[20]。本研究提示，95例患兒的聽力損失高危因素中，永久性聽力障礙史(有先天性耳聾家族史)與耳聾基因GJB2、SLC26A4異常具有相關(guān)性，永久性聽力障礙史(有先天性耳聾家族史)的家庭，部分耳聾遺傳與耳聾基因GJB2、SLC26A4異常遺傳相關(guān)，當(dāng)父母雙方均同時(shí)攜帶同一致病耳聾基因，包括同一基因相同位點(diǎn)、不同位點(diǎn)，就有一定幾率生出耳聾患兒，根據(jù)遺傳模式，告知先天性耳聾患兒發(fā)生的概率和風(fēng)險(xiǎn)[21]。具有永久性聽力障礙史的家庭，家庭成員均須進(jìn)行耳聾基因篩查，對(duì)耳聾遺傳給下一代的預(yù)防具有重要意義，同時(shí)，通過(guò)耳聾基因篩查，可以發(fā)現(xiàn)遺傳性耳聾者。早診斷，早干預(yù)，早期發(fā)現(xiàn)耳聾基因攜帶者，為耳聾遺傳咨詢提供依據(jù)，指導(dǎo)減少相同基因攜帶者婚配，對(duì)預(yù)防日后耳聾患兒出生有遠(yuǎn)期意義。