臍動脈血流參數聯合血清NLRP3炎癥小體預測子癇前期的臨床價值

張洪文，韓秋峪，林小滿，孫潔蕓

(徐州醫科大學附屬醫院婦產科，江蘇 徐州 221000)

妊娠期高血壓疾病是妊娠期較為常見的并發癥，國內該病的發生率為10%左右。妊娠期高血壓是由多種病因引起的全身多器官和系統的病變，屬于一種綜合征[1]。子癇前期是妊娠期高血壓疾病較嚴重的時期，此期孕婦臟器病變更加嚴重[2]。所以及時對子癇前期的發生風險進行有效評估，對早期發現、預防該病具有十分重要的臨床意義。臍動脈血流參數收縮期/舒張期流速比值(S/D)、阻力指數(RI)、搏動指數(PI)在母胎循環出現問題時會發生改變[3]。子癇前期孕婦的胎兒血流動力學改變可在發病前2～3周通過胎心監護發現，因此理論上來說S/D、PI、RI的改變可用于子癇前期的預測。最新研究發現NLRP3炎癥小體介導的炎癥及其相關下游產物也與妊娠期高血壓疾病的進展存在緊密的關系[4]，然而其對子癇前期的預測價值尚未完全明確。目前關于臍動脈血流參數聯合血清NLRP3炎癥小體檢測用于預測子癇前期的研究甚少，本文擬分析臍動脈血流參數聯合血清NLRP3炎癥小體檢測預測子癇前期的臨床價值，為臨床上該病的診斷提供參考依據。

1資料與方法

1.1研究對象

選擇2017年1月至2020年1月徐州醫科大學附屬醫院收治的子癇前期孕婦82例作為研究組，患者年齡22～38歲，平均(29.13±5.06)歲；孕周23～37周，平均(33.09±2.17)周；病情嚴重程度[5]：輕度33例，重度49例。同期選取在我院規律產檢并且分娩結局正常的單胎妊娠孕婦50例作為對照組，年齡23～40歲，平均(29.08±5.24)歲；孕周23～38周，平均(34.08±2.15)周。兩組孕婦年齡、孕周等一般資料比較差異均無統計學意義(P>0.05)，存在可比性，見表1。本研究經醫院倫理委員會批準，所有研究對象及其家屬均知情同意。

表1 兩組一般資料比較Table 1 Comparison of general data of the pregnant women

1.2納入排除標準

納入標準：①符合《妊娠期高血壓疾病診治指南(2015)》[5]中子癇前期的診斷標準；②子癇前期首發；③自然受孕的單胎妊娠孕婦；④規律產檢；⑤一般資料完整。

排除標準：①存在子癇前期既往病史；②免疫、凝血功能障礙；③存在對本研究結果產生影響的其他妊娠期合并癥；④急性或慢性炎癥；⑤重要臟器功能不全者。

1.3研究指標

1.3.1臍動脈血流參數

所有受試者于孕23～38周采用彩色多普勒超聲診斷儀、探頭頻率2.5～5.0mHz，經腹檢查。記錄胎盤的位置與臍動脈血流情況，將臍帶游離段長軸切面作為測量切面，取樣框置于臍帶與胎盤附著點附近2～3cm處。采樣后進行頻譜分析，得到3個或3個以上心動周期頻譜圖。儀器自動計算S/D、RI和PI，避免在胎兒呼吸樣運動時測量。由資深的產前超聲診斷醫生進行測量。

1.3.2血清NLRP3炎癥小體檢測

實時定量PCR檢測NLRP3 mRNA的表達：從血清樣本中提取RNA，檢測其純度和濃度，取2μL用于逆轉錄，參照物為β-肌動蛋白。使用實時熒光定量PCR試劑盒，25μL反應體系，逆轉錄產物4μL，擴增條件為：95℃ 5分鐘，95℃ 20秒，56℃ 5分20秒，72℃ 20秒，35次循環。β-肌動蛋白濃度主要用于校正擴增結果。上述實驗重復進行3次，計算NLRP3 mRNA的相對表達量，再取均值。

1.4診斷標準

子癇前期診斷的金標準：病理檢查結果。S/D、RI、PI及NLRP3診斷的臨界值：分別繪制S/D、RI、PI及NLRP3預測子癇前期的ROC曲線，根據各切點的敏感度和特異度，計算約登指數，以約登指數最大值所對應的數值作為最佳臨界值。S/D、RI、PI及NLRP3聯合診斷的方式為平行聯合，即：任何一個檢測方法出現陽性，即判定為陽性。

1.5預測效果評價

計算ROC曲線下面積(AUC)評價預測效果。AUC<0.5視為無預測價值，在0.5～0.7視為預測準確性較低，在0.7～0.9視為預測準確性較高，>0.9視為預測準確性最高。

1.6統計學方法

2結果

2.1兩組臍動脈血流參數和血清NLRP3水平比較

研究組S/D、RI、PI及NLRP3水平均高于對照組(t值分別為44.643、11.601、5.622、15.199，P<0.05)，見表2。

表2 兩組臍動脈血流參數和血清NLRP3水平比較Table 2 Comparison of umbilical arterial blood parameters and serum NLRP3 level of the pregnant women between the two

2.2臍動脈血流參數及血清NLRP3炎癥小體與子癇前期的相關性分析

相關性分析結果顯示，S/D、RI、PI、NLRP3與子癇前期的發生存在正相關關系(r值分別為0.610、0.718、0.427、0.796，P<0.05)，見表3。

表3 臍動脈血流參數及血清NLRP3炎癥小體與子癇前期的相關性分析Table 3 Correlations of umbilical arterial blood parameters and serum NLRP3 inflammasome with preeclampsia

2.3臍動脈血流參數聯合血清NLRP3預測子癇前期的效果分析

S/D、RI、PI、NLRP3預測子癇前期的敏感度在79.30%～97.60%之間，特異度在60.00%～92.00%之間，S/D、RI、PI、NLRP3聯合預測的敏感度、特異度分別為97.60%、92.00%，高于單獨檢測的預測效果(P<0.05)，見表4。

表4 臍動脈血流參數聯合血清NLRP3預測子癇前期的ROC分析Table 4 ROC analysis of umbilical arterial blood parameters combined with serum NLRP3 for predicting preeclampsia

ROC曲線分析顯示，S/D、RI、PI、NLRP3單獨預測子癇前期的AUC分別為0.886(95%CI：0.828～0.944)、0.933(95%CI：0.893～0.974)、0.756(95%CI：0659～0.854)、0.981(95%CI：0.964～0.998)，聯合預測的AUC為0.984(95%CI：0.969～0.999)，聯合檢測對子癇前期的預測準確性更高(P<0.05)。臍動脈血流參數及血清NLRP3單獨或聯合檢測以預測子癇前期的ROC曲線圖見圖1。

注：A圖為S/D、RI、PI、NLRP3單獨預測子癇前期的ROC曲線圖；B圖為S/D、RI、PI、NLRP3聯合預測子癇前期的ROC曲線圖。圖1 臍動脈血流參數聯合血清NLRP3預測子癇前期的ROC曲線圖Fig.1 ROC curve of umbilical arterial blood parameters combined with serum NLRP3 for predicting preeclampsia

3討論

3.1臍動脈血流參數及NLRP3與子癇前期的關系

子癇前期是引發全球孕婦和胎兒死亡與患病的主要原因之一，對3%～5%孕婦產生嚴重的困擾，最近幾年，該病在發達國家的發生率逐步升高[6]。從特發于腎臟到慢性腎炎再到循環系統的毒性狀態，關于子癇前期的概念近年來發生了較大的轉變，從微循環指標對此病的影響到不再重點突出血清相關蛋白對子癇前期的診斷價值，臨床上對子癇前期的認識有了很大的進步[7]。研究發現子癇前期對母胎的健康影響嚴重，由于胎盤的低灌注引發胎兒宮內生長不良，胎兒死亡率提升；存在子癇前期既往史的孕婦發生心血管不良事件及終末期腎病的幾率也大大增加，特別是早發型重度子癇前期[8]。如果對子癇前期的認知程度加深，在該病的診治和并發癥的預防方面才能更好地應對。

NLRP3炎癥小體相關信號通路可以被多種內、外源性刺激因子激活，然而具體的作用機制未完全明確[9]。有研究認為鉀離子水平的變化可能與NLRP3炎癥小體的激活存在一定的關系，細胞膜表面5-磷酸腺苷配體門控離子通道與相關受體結合。細胞外三磷酸腺苷直接激活三磷酸腺苷嘌呤受體P2X7信號通路，誘導縫隙連接半通道開放，鉀離子流出和鈣離子流入，最終激活NLRP3炎癥小體，激活后NLRP3炎癥小體釋放大量成熟的白細胞介素-1β炎性細胞因子參與淋巴細胞的分化和遷移，并激活其他淋巴細胞。活化的淋巴細胞產生更多的炎癥因子，促進血管緊張素Ⅱ的釋放。由這些炎癥因子組成的炎癥環境可促進鈉在血管和腎臟中的滯留，引起血管重構和收縮，最終引發高血壓[10]。隨著胎兒的發育，其臍動脈舒張期血流速度加快，阻力降低。正常臍動脈波形在妊娠晚期表現為低PI和RI，在子癇前期，由于胎盤血管阻力增加，臍動脈血流量減少，多普勒超聲測速顯示胎盤阻力增加，表現為臍動脈血流速度降低或消失，PI升高[11]。梁美麗等于2020年研究發現，隨著臍動脈S/D值和舒張末期血流丟失的增加，子癇前期的發生率高于臍動脈參數正常者，另外，臍動脈血流參數異常可預測胎兒的不良結局。

3.2臍動脈血流參數及NLRP3預測子癇前期的價值

本研究結果顯示，研究組孕婦S/D、RI、PI、NLRP3值均高于對照組(P<0.05)，提示相比正常妊娠的孕婦，子癇前期組臍動脈血流參數和血清NLRP3水平均升高。相關性分析顯示，S/D、RI、PI、NLRP3與子癇前期存在正相關關系(P<0.05),提示臍動脈血流參數和血清NLRP3水平的變化與子癇前期的發生存在緊密的關系。分析認為子癇前期臍動脈血流參數的變化可能與胎盤缺血導致胎兒血流分布異常有一定的關系[12]。隨著妊娠期高血壓病情的加重，孕婦NLRP3表達水平隨之升高，兩者存在正相關關系， S/D、RI、PI和NLRP3炎癥小體也可作為妊娠期高血壓疾病早期診斷的參考指標[13]。S/D、RI、PI、NLRP3診斷子癇前期的敏感度在79.30%～97.60%之間，特異度在60.00%～92.00%之間，S/D、RI、PI、NLRP3聯合預測的敏感度和特異度分別為90.30%、60.00%，與上述指標單獨預測比較敏感度和特異度更高，有統計學意義(P<0.05)，提示S/D、RI、PI、NLRP3聯合預測相比單獨預測的效果更好。ROC曲線分析結果顯示，S/D、RI、PI、NLRP3及聯合預測子癇前期的AUC分別為0.886、0.933、0.756、0.981、0.984，有統計學意義(P<0.05)，相比單獨預測，聯合預測的AUC更大，說明聯合預測的準確性更高。

3.3小結

綜上所述，相比正常妊娠的孕婦，子癇前期臍動脈血流指標和血清NLRP3水平均有所升高，相比單獨指標預測，S/D、RI、PI、NLRP3聯合預測的敏感度和特異度更高，且診斷的準確性更高。