國產(chǎn)與進(jìn)口尼莫地平片溶出曲線相似性分析*

孔彬，劉曉霞

(新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)醫(yī)院藥學(xué)部，烏魯木齊 830002)

尼莫地平是1，4-二氫吡啶類鈣離子拮抗劑，其主要作用為抑制血管平滑肌細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流，臨床上主要用于缺血性腦血管疾病、蛛網(wǎng)膜下腔出血、突發(fā)性耳聾及輕、中度高血壓等[1]。溶出度是口服藥品固體制劑的重要質(zhì)量指標(biāo)[2]，《中華人民共和國藥典》2015年版規(guī)定，尼莫地平片溶出度測(cè)定采用普通溶出儀，按照溶出度釋放度測(cè)定法(通則0931第二法)[3]。該藥物生產(chǎn)廠家較多，當(dāng)前我國國家藥品監(jiān)督部門開展的“國家仿制藥質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)”工作[4-5]，要求國產(chǎn)與原研藥品生物等效，因此在模擬的胃腸道環(huán)境下，在各種溶出介質(zhì)中均具有相似的溶出度曲線[6-8]，這對(duì)于控制藥品工藝將起到重要作用。筆者在本研究采用光纖藥物溶出度實(shí)時(shí)測(cè)定儀(fiber-optic medicine dissolution process monitoring system-601，F(xiàn)ODT-601)測(cè)定[9]，以德國拜耳公司原研生產(chǎn)尼莫地平片為對(duì)照，隨機(jī)選取國內(nèi)6個(gè)廠家生產(chǎn)的尼莫地平片，按一致性評(píng)價(jià)原則采用水、pH值6.8磷酸鹽緩沖液、pH值1.2鹽酸、pH值4.5醋酸鹽緩沖液4種溶出介質(zhì)模擬胃腸道環(huán)境，雙波長法扣除輔料，無需濾過，通過FODT-601直接測(cè)定該藥物的吸光度，不用稀釋溶出液，減少人工環(huán)節(jié)和誤差，并通過儀器自動(dòng)測(cè)定，實(shí)現(xiàn)原位、實(shí)時(shí)、直接獲得完整的溶出度曲線，計(jì)算f2因子，對(duì)相似性進(jìn)行評(píng)價(jià)[10]，為仿制藥質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)考察藥物溶出度提供檢測(cè)手段。

1 材料

1.1藥品與試劑 尼莫地平對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100270-200002，含量：100%)；尼莫地平片(A廠，拜耳醫(yī)藥保健有限公司，規(guī)格：每片30 mg，批號(hào)：BJ18197；B廠，產(chǎn)地：山西，規(guī)格：每片20 mg，批號(hào)：131245；C廠，產(chǎn)地：西安，規(guī)格：每片20 mg，批號(hào)：E1406009；D廠，產(chǎn)地：杭州，規(guī)格：每片20 mg，批號(hào)：140311；E廠，產(chǎn)地：河北，規(guī)格：每片20 mg，批號(hào)：023140204；F廠，產(chǎn)地：天津，規(guī)格：每片20 mg，批號(hào)：140403；G廠，產(chǎn)地：鄭州，規(guī)格：每片20 mg，批號(hào)：140402)。磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、冰醋酸、醋酸鈉、濃鹽酸均為分析純，水為純化水。

1.2儀器與設(shè)備 光纖藥物溶出度實(shí)時(shí)測(cè)定儀(型號(hào)：FODT-601，上海富科思生物技術(shù)發(fā)展有限公司)、電子分析天平(型號(hào)：AB135-S，梅特勒-托利多儀器公司，感量為0.01 mg)、真空脫氣儀(型號(hào)：ZKT-18，天大天發(fā)儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1溶出介質(zhì) ①水[含0.3%十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate，SDS)]；②pH值 1.2鹽酸溶液(含0.3%SDS)③pH值4.5醋酸鹽緩沖液(含0.3%SDS)④pH值6.8磷酸鹽緩沖液(含0.3%SDS)。

2.1.2對(duì)照品溶液 精密稱取尼莫地平對(duì)照品6.81，6.62，6.74，6.81 mg，分別置于100 mL量瓶中，使用4種溶出介質(zhì)分別溶解、稀釋至刻度，制成對(duì)照品溶液。精密量取濃度為68.1，66.2，67.4，68.1 μg·mL-1的尼莫地平對(duì)照品溶液5.0，10.0，15.0，20.0，28.0 mL，分別置于50 mL量瓶中，作為系列濃度溶液。

2.2專屬性考察 取濃度為34.2 μg·mL-1尼莫地平對(duì)照溶液在FODT-601的6個(gè)通道上在220～550 nm波長范圍內(nèi)掃描光譜。結(jié)果238 nm波長處吸光度符合測(cè)定要求，確定該測(cè)定波長，采用550 nm為參比波長，用雙波長法消除輔料干擾。

2.3線性關(guān)系考察 分別精密量取“2.1.2”項(xiàng)系列溶液，進(jìn)樣測(cè)定，以相對(duì)百分濃度(C)為縱坐標(biāo)，吸光度(A)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行溶出度實(shí)驗(yàn)。相對(duì)百分濃度(C)范圍，水：20.43%～114.32%；pH值1.2鹽酸溶液：19.86%～111.23%；pH值 4.5醋酸鹽緩沖液20.22%～113.24%；pH值6.8磷酸鹽緩沖液20.43%～114.42%。線性曲線的回歸方程見表1～4。

表1 溶出介質(zhì)為水(含0.3%SDS)時(shí)的回歸方程

表2 溶出介質(zhì)為pH值1.2鹽酸溶液(含0.3%SDS)的回歸方程

表3 溶出介質(zhì)為pH值4.5醋酸鹽緩沖液(含0.3%SDS)的回歸方程

2.4精密度實(shí)驗(yàn) 取“2.1.2”項(xiàng)的對(duì)照品溶液，在FODT-601上24 h內(nèi)連續(xù)測(cè)定6次A值，結(jié)果A值RSD=0.68%(n=6)；連續(xù)測(cè)定6 d，結(jié)果A值RSD=1.13%(n=6)，說明該方法日內(nèi)精密度及日間精密度均為良好。

表4 溶出介質(zhì)為pH值6.8磷酸鹽緩沖液(含0.3%SDS)的回歸方程

2.5回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取尼莫地平藥粉適量(相當(dāng)于尼莫地平5 mg)，置100 mL量瓶中，用溶媒溶解稀釋至刻度，分別加入尼莫地平對(duì)照品約12.0，18.0，22.0 mg，配制成低、中、高濃度供試品溶液各3份，用溶媒稀釋至刻度，搖勻。同法制備其他3種溶媒的供試品溶液。分別在FODT-601上測(cè)定A值，代入標(biāo)準(zhǔn)方程，計(jì)算方法回收率。結(jié)果4種低、中、高濃度供試品溶液平均回收率為95.4%～102.3%，RSD為2.12%～3.52%(n=3)，說明該方法的準(zhǔn)確度較好。見表5。

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 量取溶出實(shí)驗(yàn)過程中30 min時(shí)溶出液適量，分別于室溫放置0，4，8，12，24 h，在FODT-601上238 nm波長處掃描測(cè)定A值，24 h內(nèi)連續(xù)測(cè)定5次，測(cè)得吸光度的RSD=2.60%，表明該供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7溶出曲線測(cè)定 采用FODT-601，轉(zhuǎn)籃法，2 mm的測(cè)定探頭，溶媒900 mL，轉(zhuǎn)速：100 r·min-1，溫度：(37±0.5)℃，打開溶出儀監(jiān)測(cè)系統(tǒng)輸入溶出度測(cè)定參數(shù)，掃描空白溶液之后，在經(jīng)脫氣處理的溶媒中投入藥片，開始監(jiān)測(cè)：時(shí)間30 min。在4種溶媒里測(cè)定7個(gè)不同廠家的溶出曲線結(jié)果：原位在線監(jiān)測(cè)，每分鐘采樣1次，將7個(gè)廠家每個(gè)廠家12片藥片平均值匯總后，得到30 min內(nèi)平均溶出曲線，對(duì)4種不同溶媒中不同廠家藥片平均曲線比較，見圖1。同一廠家在不同溶媒中的平均溶出曲線比較見圖2。

結(jié)果表明：參比制劑A廠在4種溶媒中的實(shí)時(shí)溶出曲線及溶出百分率均>80%，但是在pH值6.8磷酸鹽緩沖液中溶出速度較快。B、C廠在4種溶出介質(zhì)中溶出百分率均小于<65%。D廠在4種不同溶媒中溶出曲線顯示：在pH值1.2鹽酸和水中溶出百分率<60%，pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液中溶出百分率均>60%，在pH值6.8磷酸鹽緩沖液中溶出速度較慢。E廠在4種溶媒中溶出曲線趨勢(shì)較一致，在水中溶出速度較快，溶出百分率均<80%。F廠在4種溶媒中溶出曲線趨勢(shì)不一致，溶出百分率均<70%。G廠在4種溶媒中溶出曲線趨勢(shì)較一致，但溶出百分率均<70%。綜合以上得出：在4種溶媒中，6個(gè)廠家藥品終點(diǎn)溶出百分率均<80%，只有原研藥廠A廠的終點(diǎn)溶出百分率>80%。

表5 尼莫地平回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

A：水溶液；B.pH值6.8磷酸鹽緩沖液；C.pH值4.5醋酸鹽緩沖液；D.pH值1.2鹽酸溶液。

本研究用A廠作為參比制劑，將A廠溶出85%時(shí)間為Ta，取樣時(shí)間為1/4Ta，2/4Ta，3/4Ta，Ta，且溶出量超過85%取樣點(diǎn)不超過一個(gè)，第一個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)溶出量的(n=12)不超過20%，其余取樣點(diǎn)的RSD不超過10%。f2值見表6。

表6顯示，只有在水中，E、F與原研藥(參比制劑)比較后f2值大于50，與參比制劑A廠溶出曲線具有相似性，其余藥廠在4種溶出介質(zhì)中相似因子比較f2值均低于50，曲線與參比制劑無相似性。

圖2 不同廠家產(chǎn)品在不同溶媒的溶出曲線

表6 6個(gè)廠家與參比制劑比較的f2值

3 討論

描繪完整的溶出曲線可以反映藥物體外溶出行為，進(jìn)一步判斷生產(chǎn)工藝是否符合規(guī)定。人體消化道體液的pH值全范圍(pH值1.2～6.8)差異較大，在不同pH值條件下藥物溶出不同會(huì)導(dǎo)致吸收效果有較大差異，仿制藥與原研藥多條特征溶出曲線對(duì)比后，盡可能一致，才能確保口服固體制劑對(duì)于不同患者均有較高的生物利用度[10]。本研究參照日本橙皮書及國家“仿制藥質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)工作方案”指導(dǎo)原則中規(guī)定，在4種不同pH值模擬胃腸液中測(cè)定尼莫地平片的溶出曲線，用f2法進(jìn)行相似性比較，在水中只有E、F兩廠f2值>50，與A廠溶出曲線相似，其余均無相似性。從結(jié)果可以看出，本研究實(shí)驗(yàn)7個(gè)廠家藥品在4種溶出介質(zhì)中4溶出曲線的一致性較差，受試制劑與A廠參比制劑比較，在模擬人體各種胃腸液環(huán)境中體外溶出曲線相似性較低，還需引起注意，改善制劑工藝水平。

《中華人民共和國藥典》2015年版中規(guī)定[3]，在尼莫地平片測(cè)定溶出度時(shí)，普通溶出儀測(cè)定過程中，手工取液后濾過并稀釋，紫外分光光度計(jì)測(cè)定吸光度后再計(jì)算累積溶出百分率，當(dāng)終點(diǎn)結(jié)果符合要求后，還需手動(dòng)擬合曲線。步驟復(fù)雜，并產(chǎn)生較多不必要人為實(shí)驗(yàn)誤差。本研究采用“光纖藥物溶出度實(shí)時(shí)測(cè)定方法”測(cè)定溶出曲線[9]，采用雙波長法自動(dòng)扣除輔料對(duì)測(cè)定的干擾，調(diào)節(jié)光程探頭測(cè)定吸光度，不需要稀釋，節(jié)省人工時(shí)間，減少人為誤差，實(shí)現(xiàn)原位、實(shí)時(shí)、測(cè)定獲得溶出曲線，軟件進(jìn)行f2計(jì)算，獲得曲線相似性結(jié)果。數(shù)據(jù)來源真實(shí)、方便、準(zhǔn)確。

目前《中華人民共和國藥典》溶出度標(biāo)準(zhǔn)是單一介質(zhì)、測(cè)定終點(diǎn)溶出度及溶出限度來質(zhì)控藥品溶出度，很難全面評(píng)價(jià)一種劑型的仿制藥品的溶出曲線。為使患者服用不同廠家藥物的臨床療效一致，仿制藥必須與原研藥進(jìn)行質(zhì)量對(duì)比和生物等效性研究[4]。仿制藥一致性評(píng)價(jià)不僅包括體內(nèi)生物等效性評(píng)價(jià)，也包括系統(tǒng)的藥學(xué)質(zhì)量評(píng)價(jià)[5]，多種溶出介質(zhì)下的溶出曲線測(cè)定能夠模擬口服制劑的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過程，是藥學(xué)質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要過程。我國正在開展“仿制藥質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)”工作，并規(guī)定指導(dǎo)原則及實(shí)施細(xì)則與方案，溶出度實(shí)驗(yàn)的重要性已深入人心，且國家藥品審評(píng)中心也已制定強(qiáng)制性要求，目的就在于提升藥品的質(zhì)量與品質(zhì)。本研究采用的實(shí)驗(yàn)方法以仿制藥一致性評(píng)價(jià)指導(dǎo)原則為根據(jù)，對(duì)仿制藥溶出曲線進(jìn)行全面的研究，為提高我國藥品制劑水平提供新的技術(shù)方法。