β-catenin在宮頸癌組織中的表達(dá)及與手術(shù)預(yù)后的關(guān)系

宋改讓 胡 濱 崔金全

宮頸癌是女性常見惡性腫瘤之一，是由宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變發(fā)展而來，我國新發(fā)病例約占世界發(fā)病率的1/3[1]。宮頸癌在發(fā)病早期的臨床表現(xiàn)不典型，為此因此患者在就診時已多為晚期，導(dǎo)致患者的死亡率一直居高不下[2-3]?，F(xiàn)代研究顯示宮頸癌的發(fā)生發(fā)展是一個從正常到炎性進(jìn)而發(fā)展成腫瘤，同時伴有多基因改變逐漸積累的多步驟過程[4]。隨著腫瘤分子生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，從分子機(jī)制上人們對腫瘤發(fā)生與發(fā)展的分子機(jī)制的認(rèn)識不斷加深，也為腫瘤的分子靶向治療提供了1個全新的方向和目標(biāo)[5]。當(dāng)前研究表明Wnt/β-鏈蛋白(β-catenin)信號傳導(dǎo)通路的異?；罨赡茉趯m頸癌的發(fā)生和進(jìn)展過程中發(fā)揮重要作用[6]。β-catenin能誘導(dǎo)Wnt激活多種靶基因的異常表達(dá)，從而參與多種腫瘤的惡性進(jìn)展有關(guān)[7-8]。特別是當(dāng)胞質(zhì)中β-catenin大量積聚并轉(zhuǎn)位入核，啟動多個靶基因的轉(zhuǎn)錄，最終效應(yīng)是加速細(xì)胞周期的運(yùn)轉(zhuǎn)，促進(jìn)細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移[9-10]。本文具體探討了β-catenin在宮頸癌中的表達(dá)及與手術(shù)預(yù)后的關(guān)系，以明確影響宮頸癌預(yù)后的機(jī)制?，F(xiàn)總結(jié)報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

研究時間為2015年12月到2019年12月，選擇本院進(jìn)行手術(shù)治療的宮頸癌患者72例，納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床與病理資料完整；臨床分期為Ⅰ期/Ⅱ期，年齡20～70歲；具有手術(shù)指征；醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)了此次研究；患者簽署了知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床與病理資料缺項者；術(shù)前接受放療、化療或激素治療者；既往有宮頸癌病史；免疫缺陷疾病患者；妊娠與哺乳期婦女。年齡25～68歲，平均年齡(54.82±3.82)歲，年齡≥60歲30例；臨床分期：Ⅰ期48例，Ⅱ期24例；組織學(xué)分化：低分化22例，中分化30例，高分化20例；病理類型：鱗癌60例，腺癌12例。

1.2 β-catenin表達(dá)檢測

鼠抗人β-catenin單克隆抗體購自Santa Cruz Biotechnology公司，免疫組化通用型染色試劑盒購自北京中山生物技術(shù)有限公司。在手術(shù)中取所有患者的病灶組織標(biāo)本(病灶組)與癌旁組織標(biāo)本(癌旁組)，進(jìn)行蠟塊連續(xù)切片，厚度為2 μm，采用二甲苯、乙醇進(jìn)行透明化與脫水處理，滴加鼠抗人β-catenin單克隆抗體(1∶250)，4 ℃過夜，復(fù)溫后滴加二抗室溫孵育30 min，顯色后蘇木精復(fù)染，封片后在光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)果。以已有宮頸癌組織為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。β-catenin在細(xì)胞核表達(dá)陽性，陽性信號均呈棕黃色。染色強(qiáng)度：陰性為0分，弱但強(qiáng)于陰性對照為1分，染色清晰為2分，染色強(qiáng)為3分；陽性細(xì)胞數(shù)<10%為0分，10%～30%為1分，31%～60%為2分，>60%為3分。評分相加0～1分為(陰性)，2分為(弱陽性)，3～4分為(中陽性)，5～6分為(強(qiáng)陽性)，弱陽性+中陽性+強(qiáng)陽性都判斷為陽性。

1.3 隨訪預(yù)后

所有患者都給予宮頸癌根治手術(shù)治療，隨訪至今(2020年4月1日)，記錄預(yù)后與生存情況。

1.4 統(tǒng)計方法

在統(tǒng)計分析時應(yīng)用的軟件是SPSS 22.00，通過百分比以及均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示計量數(shù)據(jù)與計數(shù)數(shù)據(jù)，使用χ2檢驗和獨(dú)立樣本t檢驗來進(jìn)行對比，相關(guān)性分析應(yīng)用的是直線相關(guān)分析，多因素采用COX回歸分析，檢驗水準(zhǔn)α<0.05。

2 結(jié)果

2.1 β-catenin表達(dá)陽性率對比

病灶組β-catenin表達(dá)陽性率為50.0%，顯著高于癌旁組的15.3%(χ2=19.741，P<0.05)。

2.2 預(yù)后情況

所有患者都順利完成手術(shù)，隨訪到2020年4月1日，平均隨訪時間(16.72±1.28)個月，死亡18例，死亡率為25.0%。

2.3 β-catenin在不同臨床特征宮頸癌陽性表達(dá)結(jié)果比較

在72例患者中，不同年齡和不同病理類型宮頸癌患者β-catenin表達(dá)陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；Ⅱ期宮頸癌患者β-catenin表達(dá)陽性率顯著高于Ⅰ期患者、低分化患者顯著高于中低分化患者、預(yù)后不良患者顯著高于預(yù)后良好患者(P<0.05)。見表1。

表1 不同臨床特征患者β-catenin表達(dá)陽性率對比(例，%)

2.4 β-catenin表達(dá)陽性與宮頸癌臨床特征、預(yù)后的相關(guān)性

β-catenin表達(dá)陽性與宮頸癌臨床分期、組織分化程度和預(yù)后(賦值：死亡=1，生存=0)均存在顯著相關(guān)性，與臨床分期和預(yù)后呈顯著正相關(guān)，與組織分化程度呈顯著負(fù)相關(guān)，見表2。

2.5 影響因素分析

在72例患者中，以預(yù)后死亡作為因變量，以臨床分期、組織學(xué)分化、病理特征、β-catenin表達(dá)作為自變量，COX回歸分析顯示：臨床分期、組織學(xué)分化、β-catenin表達(dá)為影響患者預(yù)后死亡的重要因素(P<0.05)。見表3。

表3 影響宮頸癌患者手術(shù)預(yù)后的多因素分析

3 討論

當(dāng)前宮頸癌的發(fā)病人數(shù)逐年生生上升，且呈現(xiàn)趨于年輕化趨勢。手術(shù)為早期宮頸癌的主要治療方法，能顯著提高患者的生存率[11]。本研究顯示所有患者都順利完成手術(shù)，隨訪到2020年4月1日，平均隨訪時間16.72±1.28個月，死亡18例，死亡率為25.0%。但是影響宮頸癌患者的預(yù)后因素比較多，早期預(yù)測預(yù)后在臨床上具有重要的價值。

現(xiàn)代研究表明腫瘤的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲平衡有關(guān)，細(xì)胞過度增殖與侵襲，凋亡受抑均是影響腫瘤發(fā)生發(fā)展中的重要因素[12]。特別是在宮頸癌的發(fā)生進(jìn)展過程中，生長因子及其受體介導(dǎo)的信號級聯(lián)反應(yīng)起到了重要的調(diào)節(jié)作用[13]。而從分子水平闡明宮頸癌的發(fā)病機(jī)制，探求方便有效的早期診斷指標(biāo)，能促進(jìn)改善患者的預(yù)后。β-catenin促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲是通過激活Wnt信號通路實(shí)現(xiàn)的，當(dāng)β-catenin在表皮生長因子、肝細(xì)胞生長因子等誘導(dǎo)下，其氨基端的富含絲/蘇氨酸殘基被磷酸化后可使β-catenin被泛素化并進(jìn)而被降解，造成β-catenin異常表達(dá)，促使腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移[14-15]。本研究顯示病灶組的β-catenin表達(dá)陽性率為50.0%，顯著高于癌旁組的15.3%(P<0.05)，表明宮頸癌患者多伴隨有β-catenin的高表達(dá)。

宮頸癌發(fā)病的因素比較多，現(xiàn)代研究表明該病是1個多基因作用、多因素參與的復(fù)雜過程，細(xì)胞增殖與凋亡的平衡對于維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定及組織形態(tài)至關(guān)重要，細(xì)胞凋亡的紊亂可促進(jìn)基因突變的積累和細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展[16-17]。正常成熟細(xì)胞中沒有Wnt信號，大部分β-catenin和細(xì)胞膜上的E-cadhefin分子連接，調(diào)節(jié)細(xì)胞間粘附，當(dāng)Wnt信號激活或者β-catenin基因突變時，通路中的信號分子Wnt能促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生[18]。本研究顯示不同年齡、臨床分期、組織學(xué)分化、預(yù)后的宮頸癌患者β-catenin表達(dá)陽性率對比差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；直線相關(guān)分析顯示年齡、臨床分期、組織學(xué)分化、預(yù)后與β-catenin表達(dá)陽性率都存在相關(guān)性(P<0.05)，表明β-catenin在宮頸癌中的表達(dá)與手術(shù)預(yù)后與臨床特征顯著相關(guān)。當(dāng)前也有研究顯示W(wǎng)nt/β-catenin可激活Wnt信號通路，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖[19]。特別是β-catenin也可以單獨(dú)作為惡性腫瘤預(yù)后的一個標(biāo)記物，有助于提高化療敏感性的預(yù)測價值[20]。

腫瘤共同的生物學(xué)特征是失控性生長，其主要分子機(jī)制是機(jī)體的周期調(diào)控紊亂導(dǎo)致細(xì)胞過度增殖和凋亡受阻[21-22]。本研究COX回歸分析顯示年齡、臨床分期、組織學(xué)分化、β-catenin表達(dá)為影響患者預(yù)后死亡的重要因素(P<0.05)。當(dāng)前有研究顯示β-catenin的作用不僅包括抑制細(xì)胞凋亡，而且通過促進(jìn)腫瘤新生血管形成、參與細(xì)胞周期調(diào)控等機(jī)制參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程[23-24]。不過本研究限于患者數(shù)量少及收集標(biāo)本時間較短的原因，只納入了較少的病例，可能存在一定的研究偏倚，將在下一步進(jìn)行深入分析。

總之，β-catenin在宮頸癌中呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，與患者臨床病理特征顯著相關(guān)，為影響患者手術(shù)預(yù)后的重要因素。