氣相色譜-質譜聯用檢測硅橡膠可提取液中的環硅氧烷

張晗，諸磊(上海格氏流體設備科技有限公司，上海 201712)

0 引言

根據最新《化學藥品注射劑生產所用的塑料組件系統相容性研究技術指南(試行)》的要求，對于硅橡膠管的可提取物液要進行環硅氧烷類物質的研究和分析，規定使用的提取溶劑為50%乙醇水溶液。當前需要找到方便合適的方法，對硅膠管中四種常見的環硅氧烷類物質進行分析。對于環硅氧烷類物質的檢測，目前主要采用GC-MS[1]或GC-FID[2]及電噴霧質譜[3](ESI/MS)等方法對環硅氧烷類物質分析。

1 測定方法

1.1 儀器和試劑

(1)氣相色譜質譜聯用儀，型號：AgiLent8860-5977B，儀器設備編號：SB-166；色譜柱：HP-5MS(AgiLent)；移液器：賽多利斯(1mL-5mL)，BRAND(20μL-200μL)；渦旋混勻儀：上海滬西分析儀器有限公司，型號：XW-80A；容量瓶(10mL、20mL)；四種環氧硅烷標準品；

(2)六甲基環三硅氧烷(first standard，99.9%，批號：FS1612448)、八甲基環四硅氧烷(上海安譜實驗科技股份有限公司，98%，批號：6-MWC-11-1)、十甲基環五硅氧烷(上海安譜實驗科技股份有限公司，99.1%,批號：BCBW5572)、十二甲基環六硅氧烷(上海安譜實驗科技股份有限公司，98%，批號：2-JLW-13-1)；乙酸乙酯：HPLC 級(CNW TechnoLogies GmbH，批 號：H4410432)；二氯甲烷：HPLC級(CNW TechnoLogies GmbH，批號：66620432)。

1.2 測定方法

1.2.1 色譜條件

進樣口溫度：290℃質譜離子源溫度：230℃；載氣：氦氣；流速：1.0mL/min 進樣量：1μg。升溫程序：初始溫度為50℃，保持3min；以2℃/min的速度升至70℃,以6℃/min升至150℃，保持3min。

1.2.2 步驟

(1)對照溶液的配制。精密稱取六甲基環三硅氧烷(D3)0.1009g，八甲基環四硅氧烷(D4)0.1836g，十甲基環五硅氧烷(D5)0.1016g，十二甲基環六硅氧烷(D6)0.1080g置于20mL量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，混勻，作儲備液1。D3濃度5040.0μg/mL，D4濃度8996.4μg/mL，D5濃度5034.3μg/mL，D6濃度5292.0μg/mL取1mL上述溶液放入10mL容量瓶，用乙酸乙酯稀釋至刻度，混勻，作為儲備液2。

(2)供試品溶液的配制。本試驗取兩個樣品，一個為硅膠管，一個為濾芯，使用50%乙醇溶液，經可提取物制備裝置，分別抽提24h和48h，所得溶液經旋蒸儀濃縮10倍，得到供試樣品1和2。

分別精密移取提取試驗中的供試樣品，使用二氯甲烷反復萃取三次，最后取下層有機相注入氣相色譜儀進行測定，采用外標法定量。計算公式如下：

式中：C為供試品溶液中環氧硅烷的含量(μg/mL)；A為根據標準曲線得到的供試品溶液中環硅氧烷的峰面積；RF(pk)為環硅氧烷的校正因子。

2 方法驗證

2.1 專屬性試驗

取對照品溶液，在上述色譜條件下進行測定，保留時間為分鐘，滿足分離要求。空白無干擾。

2.2 檢出限和定量限

取一定體積的對照儲備液分別用乙酸乙酯進行稀釋，注入氣相色譜儀測定，直到所得的信號約為3倍/10倍基線噪聲信號時，所對應的量即為檢出限、定量限，換算得到模型溶劑中D3、D4、D5和D6的檢出限(μg/mL)分別為：0.02、0.03、0.02、0.02和定量限(μg/mL)分別為：0.05、0.09、0.08、0.03。

2.3 線性關系試驗

取5個潔凈干燥的容量瓶，分別加入不同體積的對照儲備液，用乙酸乙酯稀釋，可以獲得一系列濃度的標準溶液，分別注入氣相色譜儀進行測定。

D3線性曲線5個濃度點分別為0.5040、1.0080、5.0400、10.0800、20.1600，峰面積分別為：7737、76017、80744、159520、289986。線性曲線為Y=14739X，相關系數為R2=0.9967，結果表明，在0～19μg/mL范圍內，線性良好。

D4線 性 曲 線5個 濃 度 點 分 別 為0.4498、0.8996、4.4982、8.9960、17.9920，峰面積分別為：11558、20511、125994、243318、447035。線性曲線為Y=25411X，相關系數為R2=0.997，結果表明，在0～18μg/mL范圍內，線性良好。

D5線性曲線5個濃度點分別為0.5034、1.0068、5.0343、10.0686、20.1372，峰面積分別為：2042、4360、25885、51017、104053。線性曲線為Y=5144.8X，相關系數為R2=0.9998，結果表明，在0～20μg/mL范圍內，線性良好。

D6線性曲線5個濃度點分別為0.5292、1.0584、5.2920、10.5840、21.1680，峰面積分別為：2252、3679、20171、37025、81125。線性曲線為Y=3767.5X，相關系數為R2=0.9979，結果表明，在0～20μg/mL范圍內，線性良好。

2.4 精密度(重復性)

平行取6份1mL對照儲備液進行稀釋，注入氣相色譜儀。計算環硅氧烷峰面積的相對標準偏差，RSD應不超過10%，D3、D4、D5和D6的相對標準偏差分別為：5.0%、3.4%、4.8%、2.7%，滿足重復性要求。

2.5 中間精密度

為了驗證本方法的精密度，還需要做中間精密度，通過計算最終相對標準偏差，來完成評判。中間精密度，需要不同的2位操作人員，在不同的日期或不同的儀器上，對同樣的濃度溶液，進樣分析，最后計算相對標準偏差。具體操作：平行取6份1mL對照儲備液進行稀釋，注入氣相色譜儀，由2名操作人員在2d分別進行測定。計算環硅氧烷面積的相對標準偏差，RSD應不超過10%，具體結果如下：D3、D4、D5和D6的相對標準偏差分別為：3.0%、3.1%、4.2%、2.2%

2.6 準確度

準確度是考查本方法的測定結果與真實值或參考值的接近程度，通過回收率(%)來表示。精密移取模型溶劑10mL，分別加入D3、D5、D6各取10μL、80μL和0.4mL標準儲備液，D4取5μL、40μL和0.2mL標準儲備液，每個濃度平行制備三次，按照樣品處理方法，最后制得加標樣品溶液，將所得溶液分別注入氣相色譜儀進行測定。回收率應在80%～120%之間，回收率總體的RSD不超過10%。最終得到結果，D3、D4、D5、D6的回收率范圍都在91.3%～107.1%之間，相對標準偏差分別為2.8%、6.7%、3.3%、6.7%。

2.7 耐用性和穩定性

為了考量本檢測方法的有效及穩定，和檢測結果和樣品的穩定，需要對方法耐用性和穩定性進行測試并得出滿足要求的數據。本實驗，通過三個方面考察：

(1)改變進樣口溫度(升高)；

(2)改變進樣口溫度(降低)；

(3)改變氣體流速；經過三個方面的考察，發現：進樣口溫度的微小變化對峰面積沒有顯著影響；改變流速時，保留時間存在±0.2min的變化，但是對峰面積沒有顯著影響。

2.8 穩定性

取對照儲備液分別在0、3、6、12、24和48h后注入氣相色譜儀。計算環硅氧烷的相對標準偏差，RSD應不超過10%，取6個時間點的穩定性峰面積數據，計算得到相對標準偏差(%)結果如下：D3、D4、D5和D6的相對標準偏差分別為：3.1%、3.4%、4.5%、3.0%。

3 結語

通過上述驗證，表明本方法的專屬性、檢出限、定量限、線性、重復性、中間精密度、準確度、耐用性和穩定性都是可靠的，證明了可以通過本方法檢測樣品中的D3、D4、D5和D6的含量。參考本方法中的1.2.2項關于供試品溶液的配制，對兩個不同的硅橡膠管樣品進行測試，精密移取提取試驗中的供試溶液1和供試溶液2，注入氣相色譜儀進行測定。樣品2和樣品均未檢出目標物質D3、D4、D5和D6。