下調miR-616-3p對補體攻擊骨髓間充質干細胞的影響

周建國，劉如月，韓 楓，劉一亮

（1.商丘市第一人民醫院骨一科，河南商丘476000；2.南華大學附屬南華醫院手足顯微外科，湖南衡陽421002）

骨髓間充質干細胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）作為一類多功能干細胞，具有分化成多種細胞的潛能，如心肌細胞、成骨細胞、脂細胞等［1］。因而BMSCs能作為同種異體移植的種子細胞，參與多種細胞以及器官損傷等疾病的治療［2］。但BMSCs的臨床應用面臨較多困難，例如BMSCs異體移植后存活率較低等。針對存活率較低的原因，目前認為可能是由于宿主補體系統識別并攻擊BMSCs所致［4］。研究表明，補體系統的活化主要通過激活補體C3來實現，而膜補體調節蛋白如CD46、CD35以及CD55對活化物質C3b的分解起調節作用［5］。micorRNAs是一類由18～24個核苷酸組成的內源性非編碼RNA小分子，能夠通過與靶基因信使RNA互補序列結合抑制靶基因的轉錄，在轉錄后的調控中起重要作用［6］。有研究顯示，抑制miR-616-3p表達能通過上調補體調節蛋白CD46促進人慢性髓原白血病細胞K562抵抗補體依賴的細胞毒效應［5］。因此，miR-616-3p可能通過調控CD46表達參與補體系統對BMSCs的攻擊作用，但目前尚無相關研究。本研究通過構建miR-616-3p低表達的rBMSCs，探討在大鼠異體血清（allogeneic rat serum,ARS）干預后，miR-616-3p低表達對rBMSCs存活的影響，并闡明miR-616-3p對ARS攻擊rBMSCs作用產生影響的分子機制。

1 資料與方法

1.1 rBMSCs的分離及鑒定

SPF級健康雄性 Sprague Dawley（SD）大鼠 5只，鼠齡4-6周，體重（200.80±20.53）g，購自長沙市天勤生物技術有限公司，動物生產許可證號：SCXK（湘）2014-0010。用10%的水合氯醛腹腔注射麻醉SD大鼠，碘伏消毒后，從骨盆上離斷取下股骨。將股骨置于碘伏內浸泡5 min后，剔除股骨周圍軟組織，剪斷股骨。……