混勻不充分致糖化血紅蛋白色譜圖基線斜升2例報道

吳學兵，朱 峰，王君鋒，任芳芳

上海市松江區泗涇醫院檢驗科，上海 201602

糖化血紅蛋白(HbA1c)是目前臨床診治糖尿病的參考指標之一，目前HbA1c的測定方法主要有色譜法、電泳法、免疫法和化學法等，各種方法檢測結果的差異和影響因素是臨床關注和探討的課題[1-2]，每個方法都有其局限性，目前國內較多實驗室采用美國Bio-Rad公司離子交換高效液相法檢測，本文報道2例因貧血血細胞沉淀過快致混勻不充分，從而使吸取紅細胞過少導致HbA1c色譜圖基線斜升，現報道如下。

1 病例資料

病例1，女，84歲，因高血壓收治入院，相關實驗室檢查如下：血紅蛋白86 g/L，紅細胞計數3.02×1012/L，血細胞比容26.9%，血清總蛋白57 g/L，清蛋白28.7 g/L，清蛋白/球蛋白(A/G)1.0，空腹血糖6.14 mmol/L。圖1為HbA1c首次檢測結果為4.1%，圖譜基線向上斜升，HbA1a面積比40.1%，天然(非糖化)血紅蛋白(HbA0)為56.7%；圖2為充分顛倒混勻后復查HbA1c為6.0%，圖譜基線始于Y軸的0.0點，穩定而不斜升，HbA1a的面積比3.0%，HbA1b為0.9%，HbF為1.3%，HbLA1c為2.0%，p3為4.5%，p4為1.3%，HbA0為82.1%。

圖1 病例1 HbA1c首次檢測圖譜

圖2 充分顛倒混勻后復查病例1 HbA1c檢測圖譜

病例2，男，92歲，冠心病伴心律失常收治入院，相關實驗室檢查如下：血紅蛋白72 g/L，紅細胞計數2.05×1012/L，血細胞比容20.3%，血清總蛋白56.7 g/L，清蛋白22.9 g/L，A/G 0.7，空腹血糖4.3 mmol/L。圖3為HbA1c首次檢測結果為7.2%，圖譜基線向上斜升，HbA1a的面積比20.7%，HbA1b為5.6%，p3為4.9%，HbA0為63.0%。圖4為充分顛倒混勻后復查HbA1c為6.4%，圖譜基線始于Y軸的0.0點，穩定而不斜升，HbA1a的面積比為2.4%，HbA1b為1.9%，HbLA1c為1.7%，p3為4.1%，p4為1.5%，HbA0為83.1%。

圖3 病例2 HbA1c首次檢測圖譜

圖4 充分顛倒混勻后復查病例2 HbA1c檢測圖譜

采用上海科華科技有限公司真空采血管取患者靜脈血2 mL，乙二胺四乙酸三鉀(EDTA-K3)抗凝，立即充分顛倒混勻5次，采用美國Bio-Rad公司VARANTⅡ TURBO HbA1C色譜離子交換高效液相法檢測，上海市臨床檢驗中心室內質控及室間質評均在控合格。本文兩例患者因同時檢測空腹血糖發現病例1空腹血糖為6.14 mmol/L，病例2空腹血糖為4.30 mmol/L，與相應的首次HbA1c檢測結果為4.1%和7.2%審核報告時有不符合現象，再觀察標本及分析色譜圖等情況、再復檢。

2 討 論

HbA1c檢測的方法涉及層析技術、電泳技術、免疫技術、生化(酶學)技術、快速檢測技術，所有方法的被分析物HbA1c都是自我定義的，而實際HbA1c值是不同的，由于受各種干擾，如紅細胞生存期的改變、異常血紅蛋白、黃疸和高脂血癥、乙酰化血紅蛋白、氨基甲酰化血紅蛋白等因素均可造成HbA1c值出現假性升高或降低[3]；美國Bio-Rad高效液相色譜儀檢測HbA1c的原理是層析站雙泵預先將設置的離子濃度遞增的緩沖液推進分析柱，血紅蛋白通過柱中物質的離子相互作用而分離，分離的血紅蛋白通過濾色光度計在415 nm波長變化測定各峰含量，但在實際操作中吸取紅細胞量過少導致結果不準，文獻中鮮有提出，臨床這類標本并不少見，但有學者建議患者連續2次檢測HbA1c的結果的差異>0.5%為臨床上有顯著改變需要進行治療方案的調整，實驗室檢測的精密度要小于2.4%才能滿足上述改變的檢測要求[4]。美國Bio-Rad公司VARANTⅡ TURBO HbA1c離子交換高效液相法是采用臨床數據管理軟件(CDM)生成每個標本檢出峰的保留時間和一張色譜圖，HbA1c峰以陰影表示，正常典型色譜圖應是HbA1c峰形尖銳和均衡(無肩峰和拖尾峰)，基線始于Y軸的0.0點，穩定而不斜升[2]。而Bio-Rad公司的色譜圖可能在峰型、峰分辨率、基線等方面8種非典型色譜圖影響HbA1c結果的準確性[5]，不應報告結果，但造成非典型色譜圖對應的具體因素未能指明，需要在實際工作中總結和探索；本文兩例患者因同時檢測空腹血糖發現病例1空腹血糖為6.14 mmol/L，病例2空腹血糖為4.30 mmol/L，與相應的首次HbA1c為4.1%和7.2%審核報告時有不符合現象，再觀察標本情況、復檢。從兩例患者的檢查結果看，第1例HbA1c首次檢測結果為4.1%，復查后為6.0%，第2例HbA1c首次檢測結果7.2%，復查后6.4%，分析原因可能為臨床標本多而批量檢測時間長，兩例均因貧血導致血細胞下沉過快，混勻不及時而致吸取紅細胞濃度不足，均出現非典型基線斜升圖譜，而再經充分混勻后復查，均呈正常典型色譜圖。雖然實驗室每天室內質控均在控，但只注意中文檢驗信息系統數據，如本文2例觀察到色譜圖的基線斜升，可采取混勻后不放在批量里而即刻上機單獨檢測等處理方法，提示今后注意查對每個樣本色譜圖，將其寫入規范操作和報告審核流程，對有疑問時注意其他相關檢測指標對照(如血糖)或加強臨床溝通，確保報告結果的準確性；在對此類樣本復檢時無論是充分顛倒混勻還是即刻上機單獨檢測都是確保此類樣本能吸取一定量的紅細胞為目的，本文對血紅蛋白低于何濃度會出現基線斜升的臨界點未深入探討，有等待于今后進一步探索。

(致謝：本文得到上海市臨床檢驗中心居漪主任的幫助和指導，在此深表謝意！)