FISH和IHC法檢測乳腺癌HER2基因一致性及其臨床意義

孟亞飛，朱林琳，梁國棟，遲麗麗，高紫薇，王楊楊，高莉麗，包海龍

（內蒙古呼倫貝爾市人民醫院 病理科，內蒙古 呼倫貝爾）

0 引言

HER2（Human Epidermal Growth Factor Receptor 2）又稱為c-erbB-2基因，在促癌因素作用下參與正常細胞生長發育，會導致其突變、擴增形成惡性腫瘤[1]。HER2基因是乳腺癌患者進行靶向治療的重要靶點，對HER2基因擴增進行研究能夠指導乳腺癌治療方案制定和預后評估，能夠快速準確選擇靶向治療藥物，提高治療效果[2]。乳腺癌患者HER2基因擴增和蛋白過表達是患者預后較差、生存期較短的重要標記，分別采用IHC（Iimmunohistoclemistry）、FISH（Fluorescence in Situ Hybridization）法對患者HER2進行蛋白表達、基因檢測能夠為臨床診斷、治療提供準確指導[3]。本文選取2年間收集的50例患者資料，比較兩種檢測技術的臨床應用價值和一致性，具體如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取本院2018年5月至2020年5月，收集的乳腺癌患者組織標本和資料，患者均未行術前新輔助化療，共50例。患者均為女性，年齡36～75歲，平均（49.63±5.62）歲，中位數51歲。乳腺癌類型：浸潤性小葉癌3例，浸潤性導管癌42，導管原位癌5例。組織學分級：Ⅰ級6例，Ⅱ級23例，Ⅲ級21例。

1.2 IHC方法

采用IHC檢測HER2蛋白表達，使用即用型非生物素免疫組化試劑盒、鼠抗人單克隆抗體，按照使用說明嚴格操作[4]。將乳腺癌組織蠟塊制成4 μm切片，將載玻片經多聚賴氨酸處理，溫水裱片，將切片脫蠟，微波抗原修復。采用PBS洗片并置入濃度3%甲醇H2O2中，加入一抗，放置冰箱。PBS充分洗片，將即用型試劑滴加入切片，放置室溫孵育20 min，采用DAB顯色，在顯微鏡下觀察信號，蘇木素復染、封固，PBS作為陰性對照。

1.3 FISH方法

組織經10%福爾馬林固定，組織進行4 μm厚度切片處理，切片在室溫下脫蠟水化，100℃沸水煮30 min，采用蛋白酶K消化5 min，采用60℃烘烤5 min，將10 μL探針和雜交緩沖液混合并在85℃水浴箱中變性5 min，脫水后加探針混合物于玻片，置于42℃雜交盒中12 h，取出玻片自然干燥，采用DAPI染色，15 min左右后放置熒光顯微鏡下觀察[5]。

1.4 結果判斷

1.4.1 IHC結果

根據美國臨床腫瘤協會制定的HER2檢測評分指南[6]，腫瘤細胞無著色為陰性（0），腫瘤細胞呈弱性并且胞膜著色不完整，或胞膜染色＜10%（1+），腫瘤細胞染色≥10%并且完整，或≤30%呈強性為陽性（2+），腫瘤細胞膜染色＞30%并且完整呈強性為強陽性（3+）。

1.4.2 FISH結果

在100倍物鏡下，采用特異濾光片隨機計數20個細胞。單個間期細胞核中綠色和紅色信號各2個視為正常細胞，紅色信號總數/綠色信號總數＜1.8為陰性（無基因擴增），單個間期細胞核中紅色信號超過2個視為HER2基因擴增[7]。

1.5 統計學方法

用軟件SPSS 22.0進行數據分析，計數資料采用（%）表示，以χ2檢驗，若P＜0.05存在統計學意義。采用kappa值（k）評價FISH法與IHC法的一致性，若P＜0.05一致性較高。

2 結果

2.1 病理特征與HER2基因擴增的關系

FISH檢測基因擴增陽性率為42.00%（21/50），HER2基因擴增與患者組織性分級密切相關，組織學分級越高HER2基因擴增陽性率越高，存在統計學意義（P＜0.05），HER2基因擴增與患者年齡、腫瘤大小、位置等其他病理特征無關，見表1。

表1 病理特征與HER2基因擴增的關系[n(%)]

2.2 IHC法與FISH法檢測一致性對比

采用IHC檢測HER2蛋白表達，陽性例數24（48.00%），陽性例數中2+患者14例，其中基因擴增10例，符合率71.43%；3+患者10例，其中基因擴增9例，符合率90.00%。兩種檢測方式結果具有較高的一致性，見表2。

表2 IHC法與FISH法檢測一致性對比[n(%)]

3 討論

HER2基因表達在多種類型癌癥中出現，例如胃癌、子宮癌、前列腺癌等，其中以乳腺癌為最典型[8]。對乳腺癌患者的HER2基因表達進行研究，可以對患者腫瘤惡性程度、靶向治療、淋巴轉移以及預后起到積極作用，直接影響著患者的診療效果和生存期[9]。有國外研究顯示，在采用曲妥珠單抗治療乳腺癌患者時，HER2低表達患者的療效不確切，而療效與表達水平呈正比，HER2表達越高療效越佳。目前根據美國國立綜合癌癥指南標準，IHC是乳腺癌HER2表達的首選檢測方式，而FISH法檢查過程人為干擾因素較少，客觀標準率較高，則作為HER2檢測金標準，大多學者認為應該在IHC法檢測基礎上進行FISH復查[10]。IHC檢測HER2蛋白表達呈2+、3+的樣本，可能會出現基因擴增陰性，研究認為這與17號染色體多倍體相關，出現假陽性。基于此，本研究選取50例乳腺癌患者分別進行IHC法和FISH法檢測，對比其一致性。

研究顯示，FISH檢測HER2基因擴增例數21例，占比42.00%，HER2基因擴增陽性與患者組織性分級相關，組織學分級越高HER2基因擴增陽性率越高，P＜0.05；HER2基因擴增與患者年齡、腫瘤大小、位置等因素無關。采用IHC檢測HER2蛋白表達，陽性（2+、3+）例數24例，2+患者14例，基因擴增10例，符合率71.43%；3+患者10例，其中基因擴增9例，符合率90.00%，一致性較高。綜上，采用IHC和FISH均能夠作為乳腺癌的診斷檢測手段，具有較高的臨床價值，并且兩種方式各具特點一致性高。在對IHC表達為1+或2+樣本進行診斷時，可采取FISH法復查，提高判斷的準確性。