血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白mRNA水平對乳腺癌化療療效的預測價值

魏 娜，倪 青，戴 民，王 舒，侯 凈，陳 歡 (貴州省人民醫院乳腺外科，貴州 貴陽 550002)

目前，乳腺癌已成為全球女性最常見的惡性腫瘤，臨床對于此病多采取手術、放療、化療和內分泌等綜合治療，其中新輔助化療在乳腺癌的治療中有重要作用，如可使部分無法手術的患者得到手術的機會，降低腫瘤期別[1]。然而由于患者的個體差異，其對化療的敏感性也各不相同，若接受到無效或低效的新輔助化療，不但影響最終療效，也在無形中增加患者的經濟負擔與精神壓力[2]。因此，如何有效預測患者的化療敏感性，從而為患者選擇最佳化療方案具有重要意義。近年來，有研究提出，乳腺癌耐藥蛋白(breastcancer resistance protein，BCRP)在預測乳腺癌化療療效中具有重要價值[3]，然而究竟有何價值，本文展開詳細描述，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2017年1月～2018年6月我院收治的65例乳腺癌患者設置為乳腺癌組，納入標準[4]：①均符合乳腺癌診斷標準；②對本次研究項目知情同意；③無其他重要臟器功能受損；④意識清醒。排除標準：①妊娠期或哺乳期乳腺癌；②乳腺癌合并腦轉移或肝轉移；③患有其他腫瘤性疾病。患者年齡25～38歲，平均(32.51±5.28)歲，右側乳癌36例，左側29例；文化水平：初中及以下15例，高中32例，大專及以上18例。另選取該時間段內來我院體檢的60例健康人群設置為對照組，年齡18～37歲，平均(31.78±5.15)歲，文化水平：初中及以下10例，高中33例，大專及以上17例。所選對象均自愿參與，近3個月內均未服用性激素類藥物，無心腦血管病變及肝功能不全，且無其他自身免疫性疾病。本次研究工作獲得了院內醫學倫理委員會批準。兩組對象的一般資料對比，差異均無統計學意義(P>0.05)，存在可比性。

1.2方法

1.2.1治療方法:乳腺癌組所有患者術前均行空心針穿刺活檢明確診斷并組織學標本接受病理科的免疫組化染色，化療方案為EC-T：表阿霉素 90 mg/m2靜脈滴注、環磷酰胺600 mg/ m2靜脈滴注，序貫多西他賽100 mg/m2靜脈輸注。一個周期進行21 d，共行8個周期，對化療后符合手術的患者按流程完成手術切除。

1.2.2儀器與方法:采用Invitrogen 公司生產的RNA 提取試劑；Promega生產的逆轉和PCR擴增試劑(引物序列：R：5′-GACTGGATGAGGTCGTCCGTTTCC- 3′；F：5′- CAGCCGTGGAACTCTT TGGGTAGAGAAG-3′)；PCR 儀購自Bio-rad 公司；小鼠抗BCRP單克隆抗體購自Abcam，UK；乳膠珠購自美國Life Technologies 公司。

1.2.3標本采集:血漿微泡采集方法：收集兩組對象入院當天晨血5ml，乳腺癌組需收集化療前和完成所有化療后兩次血。要求其隔夜空腹10 h以上，靜脈抽血，離心收集上清，將血清分裝到干凈的試管中，3 000 r/min(2 000 g)離心3 min，取上層清液5 ml，留血漿，按照血漿與磷酸鹽緩沖液(PBS)1∶2 的比例稀釋血漿樣本，在分析之前，用20 μl PBS 重懸后保存在-80 ℃冰箱待用，分析時將標本于48 h內室溫下復融，

1.2.4檢測方法:微泡標本和組織標本分別用Trizol 裂解液提取總RNA，采用MMLV試劑盒進行反轉錄并得到cDNA 標本，按照實時定量PCR 方法進行擴增，得到擴增曲線并對基因的mRNA相對含量進行計算。

1.3觀察指標：依據術后病理Miller-Payene分級系統評價新輔助化療效果[5]，并將結果分為5個等級：1級：侵襲性癌細胞沒有變化，或者只有個別癌細胞發生變化，癌細胞數量總體上沒有減少；2級：侵襲性癌細胞略有減少，但總數仍然很高，癌細胞減少不超過30%；3級：浸潤性癌細胞減少介于30%～90%；4級：侵襲性癌細胞減少90%以上，僅留下分散的小團癌細胞或個體癌細胞；5級：在原始腫瘤床中沒有侵襲性癌細胞，但可能存在原位導管癌。

2 結果

2.1兩組血漿微泡中BCRP mRNA 相對含量比較：乳腺癌組患者血漿微泡中BCRP mRNA 水平為(184.56±34.52)，而對照組為(62.35±16.62)，乳腺癌組明顯更高，差異有統計學意義(t=10.345，P<0.05)。見圖1。

★★P<0.001

2.2化療前后患者血漿微泡中BCRP mRNA 相對含量與化療療效的關系：所有乳腺癌患者均順利完成全部化療，化療后根據Miller-Payne分級標準，統計所有患者的病理反應性：1級11例，2級15例，3級17例，4級14例，5級8例。化療前化療反應為1級～3級組與4級～5級組患者的血漿微泡中BCRP mRNA 相對含量差異無統計學意義(P>0.05)；化療后，化療反應為1級～3級組血漿微泡中BCRP mRNA 相對含量明顯高于4級～5級組患者，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 化療前后患者血漿微泡中BCRP mRNA 相對含量與化療療效的對比

3 討論

與以往傳統的化療方式不同，新輔助化療是建立在手術基礎上所采用的術前全身性化療，旨在縮小腫瘤體積，降低腫瘤期別，為手術切除提供機會[6]。由于乳腺癌早期缺乏特異性癥狀，大部分患者就診時已處于中晚期，耽誤最佳手術治療時機，因此，新輔助化療則成為乳腺癌最主要的治療方式，但化療效果并不統一，期間仍有部分患者出現腫瘤進展，且一部分患者的新輔助化療難以達到完全病理緩解(PCR)，延誤治療，造成出乎意料的麻煩[7]。鑒于此，越來越多的人致力于尋找一種經濟可靠、可操作性強的新輔助化療療效的預測指標對新輔助化療人群進行篩選，從而提高化療有效率。

血漿微泡中BCRP是ATP結合膜轉運蛋白家族的主要成員之一，相關試驗表明BCRP可對多種化療藥物產生耐藥性，其中包括拓撲替康、伊立替康以及米托蒽醌等。本文通過分析血漿微泡中BCRP在乳腺癌與正常人群中的表達水平，分析其對乳腺癌化療療效的預測價值。結果顯示，乳腺癌組患者血漿微泡中BCRP mRNA含量高于對照組，由此可見，血漿微泡中BCRP可能參與乳腺癌的發生、發展，與之關系密切。為進一步明確血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白與化療效果的關系，依據術后病理Miller-Payene分級系統，觀察不同級別病理反應患者血漿微泡中BCRP mRNA 含量。結果顯示，新輔助化療后完全病理緩解的患者顯著延長了無進展生存期，在化療后4級～5級病理緩解的患者中血漿微泡中BCRP水平大大降低。提示血漿微泡中BCRP mRNA的含量可能與新輔助化療的療效有關。監測血漿微泡中BCRP mRNA水平對新輔助化療對乳腺癌的療效具有預測作用。這與既往的一些研究[8]結果基本一致。

綜上所述，檢測患者體內血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白mRNA 水平，將有助于乳腺癌的診斷以及化療療效的判斷，該指標水平越高，則提示化療效果越差，預后不佳，其有望成為乳腺癌化療療效的預測指標之一。