MUC1-1、TLR4在不同程度宮頸病變組織中的表達及臨床意義＊

羅蕙雨 張翠娟 林金鳳

宮頸癌屬于一種惡性腫瘤，在婦科極為常見。2012年，在全球范圍內，新發宮頸癌病例達到了52.8萬，其中26.6萬左右死亡，而發展中國家占70%左右，其中年輕女性是主體[1]。現階段，臨床普遍認為，宮頸細胞學檢查、人乳頭瘤病毒（HPV）檢測是早期診斷宮頸癌的有效方法，但是仍然有不明確性存在，特別是在診斷腺癌的過程中，由于形態學上重疊，因此很難區分早期宮頸病變良惡性[2]。本研究探討了乳腺型黏蛋白（MUC1-1）、Toll樣受體-4（TLR4）在不同程度宮頸病變組織中的表達及臨床意義，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選取2019年1月-2020年1月筆者所在醫院不同程度宮頸病變患者石蠟標本100例。納入標準：均具有完整的臨床資料；均經陰道鏡宮頸活檢病理確診為宮頸病變。排除標準：接受過放化療等治療。年齡30～72歲，平均（49.3±7.5）歲。在疾病類型方面，輕微子宮頸病變9例（9.0%）；慢性宮頸炎9例（9.0%）；宮頸上皮內瘤變（CIN）38例（38.0%），其 中 CINⅠ13例（13.0%），CINⅡ13例（13.0%），CINⅢ12例（13.0%）；宮頸腺癌10例（10.0%）；宮頸鱗癌34例（34.0%），其中低分化8例（8.0%），中分化例17例（17.0%），高分化9例（9.0%）。

1.2 方法

1.2.1 MUC-1表達檢測 應用北京中杉金橋生物工程公司生產的MUC-1抗體，用10%甲醛固定標本，石蠟包埋，組織切片，厚度為4 μm，HE染色。運用免疫組織化學染色，切片脫蠟，脫水過程中將梯度乙醇充分利用起來，修復抗原，然后運用鏈霉菌抗生物素蛋白/過氧化物酶連接法（SP法）進行染色，用PBS將一抗取代。

1.2.2 TLR4表達檢測 運用常規方法進行30 min烤片，乙醇、二甲苯脫蠟，PBS洗片，室溫下孵育于3% H2O2中，PBS洗片，室溫下用5%羊血清封閉，將Abnova公司生產的TLR4抗體加入孵育，PBS洗片，將鼠抗人單克隆抗體加入，將通用型二抗滴加其上，室溫下反應20 min，PBS洗片，顯色、復染、透明、封片過程中分別應用DAB顯色試劑盒、蘇木精、組織、樹膠。用PBS將一抗取代。

1.3 觀察指標及評定標準

（1）MUC-1表達評定。將5個表達集中的陽性細胞從每張切片中隨機選取出來，200倍視野下觀察，定性時依據陽性細胞/視野×100%，0～4%、5%～100%分別評定為陰性表達、陽性表達[3]。（2）TLR4表達評定。運用綜合評分法，包括免疫組化切片評分、陽性細胞率評分，其中前者依據染色強度，無色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別評定為0、1、2、3分，后者依據陽性細胞率，無陽性染色存在于腫瘤細胞中（0）、1%～10%、11%～50%、51%～75%、76%～100%分別評定為0、1、2、3、4分。二者相乘，0、1～4、5～8、9～12分分別評定為陰性、弱陽性、中等陽性、強陽性，分別用-、+、++、+++表示，-為陰性表達，+、++、+++之和為陽性表達[4]。

1.4 統計學處理

采用SPSS 21.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗；計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同程度宮頸病變組織MUC1-1陽性表達率比較

宮頸鱗癌患者MUC1-1陽性表達率高于慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ患者，差異均有統計學意義（P＜0.05），均低于輕微子宮頸病變患者，差異均有統計學意義（P＜0.05）；宮頸腺癌患者MUC-1陽性表達率低于CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌患者、輕微子宮頸病變患者，差異均有統計學意義（P＜0.05），但與慢性宮頸炎、CINⅠ患者比較差異均無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 不同程度宮頸病變組織MUC1-1陽性表達率比較 例（%）

2.2 不同程度宮頸病變組織TLR4陽性表達率比較

宮頸鱗癌患者TLR4陽性表達率均高于輕微子宮頸病變患者、慢性宮頸炎患者、CINⅠ患者、CINⅡ患者、CINⅢ患者，差異均有統計學意義（P＜0.05），宮頸腺癌和宮頸鱗癌患者TLR4陽性表達率比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌患者MUC1-1陽性表達率逐漸升高，均低于輕微子宮頸病變患者；宮頸腺癌MUC1-1陽性表達率低于CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌患者、輕微子宮頸病變患者。輕微子宮頸病變患者、慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌患者的TLR4陽性表達率逐漸升高，和上述研究結果一致。

表2 不同程度宮頸病變組織TLR4陽性表達率比較 例（%）

3 討論

MUC1-1屬于一種膜結合型黏蛋白，在胃黏蛋白成分中占有重要地位，結直腸腫瘤、胰腺腫瘤等其他胃腸道器官也較常見，乳腺癌患者具有較高的MUC1表達，宮頸黏液腺癌患者的淋巴結轉移、低生存率與MUC1過度表達相關，在根治性子宮切除術、淋巴結清掃術、術后輔助性治療的確定過程中，術前在宮頸活檢標本中將MUC-1抗原表達水平確定下來能夠給臨床提供有效依據。因此，在宮頸黏液腺癌中，MUC-1可以作為獨立預后因子[5-6]。MUC1-1陽性表達率在慢性宮頸炎、CIN、宮頸鱗癌中逐漸提升，MUC1-1不表達于正常宮頸鱗狀上皮上，但是會在一定程度上表達于有炎癥的宮頸鱗狀上皮及細胞癌組織上[7-8]。

Toll樣受體-4（TLR4）表達于很多皮膚黏膜表面，在皮膚及黏膜免疫反應中將重要作用發揮出來的途徑為將病原微生物識別出來，將天然免疫防疫反應激活，對致炎因子釋放進行調控[9-10]。同時，對于很多重要疾病來說，TLR4介導的炎癥反應是公共通路[11]。在人肺癌細胞中，TLR4能夠為腫瘤細胞將白細胞介素-8（IL-8）、血管內皮生長因子（VEGF）等免疫抑制因子分泌出來提供有利條件，途徑為通過p38MAPK依賴的方式，而IL-8對腫瘤轉移造成了直接而深刻的影響，VEGF能夠為血管新生提供有利條件[12-13]。在宮頸癌的發生發展過程中，TLR4參與其中，但是，HPV16型高危病毒感染和宮頸癌中TLR4表達無關，即TLR4可能對其他病原體感染進行了介導，從而為HPV病毒對宮頸上皮細胞致病作用提供有利條件[14]。

相關醫學研究表明，在宮頸癌的發生發展過程中，MUC1-1、TLR4可能參與其中，宮頸癌、宮頸良性病變具有不同的MUC1-1、TLR4表達，能夠為臨床鑒別診斷宮頸不同組織類型、判斷預后提供有效依據[15-16]。本研究結果表明，慢性宮頸

綜上所述，MUC1-1、TLR4在不同程度宮頸病變組織中的表達不同，能夠將有效依據提供給臨床的鑒別診斷及預后評定。