丙種球蛋白聯合阿司匹林對川崎病患兒外周血Treg細胞、淋巴細胞的影響

王婉霞，劉媛，梅玲華

榆林市第二醫院質量控制科1、兒科2，陜西 榆林 719000

川崎病是一種急性出疹發熱性疾病，好發于5歲兒童，且近年來發病率逐年增長[1]。川崎病發病較為復雜，患兒全身多系統均可受累，冠狀動脈損傷為常見并發癥，隨著病情進展甚至發生心源性猝死，嚴重威脅患兒生命健康[2-3]。因此疾病早期及時診治對于減少患兒冠狀動脈損傷、心源性猝死具有重要意義。相關研究結果顯示，阿司匹林聯合丙種球蛋白治療川崎病可改善患兒外周血CD4+、CD25+Treg細胞、淋巴細胞亞群比例失衡情況，改善免疫功能，減少冠狀動脈損傷[4]。本研究旨在進一步探究阿司匹林聯合丙種球蛋白治療川崎病的臨床效果及其對患兒外周血調節T(Treg)細胞、淋巴細胞的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月至2020年2月榆林市第二醫院收治的96例川崎病患兒進行研究。納入標準：①符合《川崎病診斷指南》[5]者；②年齡在4個月以上，14歲以下者；③納入研究前3個月無特殊用藥史者。排除標準：①合并其他免疫系統疾病者；②合并腎、心等臟器功能障礙者。所有患兒按照隨機數表法分成觀察組和對照組，每組48例。觀察組患兒年齡2～7歲，平均(3.25±1.28)歲；病程1～16 d，平均(6.36±1.24)d。對照組患兒年齡1～6歲，平均(3.19±1.35)歲；病程1～14 d，平均(5.25±1.72)d。兩組患兒的病程、年齡比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經我院醫學倫理委員會批準，并征得患兒家屬同意，簽署知情同意書。

1.2 治療方法 對照組患者單獨應用丙種球蛋白[生產廠商：上海生物制品研究所；批準文號：S10970081；規格：3 mL(10%，0.3 g)/瓶]靜脈滴注治療：每日給藥濃度為2.5%，用藥劑量為1.0 g/kg，滴速為每小時5 mL/kg，盡量在10 h內完成滴注，連續用藥3 d。

觀察組則聯合應用阿司匹林(生產廠商：拜耳醫藥保健有限公司；批準文號：J20130078；規格：100 mg×30片)進行治療：劑量為每日30 mg，分三次口服。丙種球蛋白用法完全同對照組。兩組患兒均治療2個月，治療過程中嚴密監測兩組患兒生命體征。

1.3 觀察指標 比較兩組患兒的臨床癥狀消失時間、治療前及治療8周后外周血CD25+、CD4+Treg細胞、淋巴細胞亞群表達水平變化情況。

1.4 檢測方法 患兒于入院次日清晨及治療8周后次日清晨，空腹分別抽取外周靜脈血2 mL，離心取血漿200 μL待檢；單個核細胞分離使用淋巴細胞分離液，計數定容至1×106/mL進行流式標記，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌2次。將抗體CD3-FITC/CD4-PE、CD4-PE/CD25-APC、CD3-FITC/CD8-PE、CD3-FITC/CD56-PE/CD 16-APC加入100 μL細胞，孵育時間為20 min，孵育環境為室溫，PBS洗滌2次棄上清后加入200 μL PBS重懸，使用流式細胞儀進行檢測。分析CD25+、CD4+Treg細胞表達水平及CD4+、CD3+、CD8+、自然殺傷(NK)細胞等百分比占比。

1.5 療效評定標準[6]顯效：淋巴結腫大、皮疹、發熱、黏膜充血等完全消失，病情完全控制；有效：淋巴結腫大、皮疹、發熱、黏膜充血等明顯改善，病情有效緩解；無效：淋巴結腫大、皮疹、發熱、黏膜充血等無變化甚至加重，病情無變化甚至進展。總有效率=(顯效例數+有效例數)/總例數×100%。

1.6 統計學方法 應用SPSS19.0軟件包進行數據統計學分析，計量資料符合正態分布，以均數±標準差()表示，組間比較采用t檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患兒的臨床治療效果比較 觀察組患兒的治療總有效率為91.67%，明顯高于對照組的75.00%，差異有統計學意義(χ2=4.800，P=0.029＜0.05)，見表1。

表1 兩組患兒的臨床治療效果比較(例)

2.2 兩組患兒的臨床癥狀消失時間比較 治療后，觀察組患兒的發熱消失時間、皮疹、淋巴結腫大及黏膜充血消退時間明顯短于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 兩組患兒的臨床癥狀消失時間比較(，d)

表2 兩組患兒的臨床癥狀消失時間比較(，d)

images/BZ_50_207_1230_2273_1297.png觀察組對照組t值P值48 48 3.02±0.88 4.01±0.26 7.475 0.001 2.05±1.44 3.13±1.33 3.817 0.001 6.01±3.20 8.24±3.58 3.218 0.002 4.13±2.45 6.03±2.58 3.670 0.001

2.3 兩組患兒治療前后的外周血Treg細胞表達水平比較 治療前，兩組患兒的外周血CD25+、CD4+Treg細胞表達水平比較差異均無統計學意義(P＞0.05)；治療后，兩組患兒的外周血CD25+、CD4+Treg細胞表達水平明顯上升，且觀察組明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表3。

2.4 兩組患兒治療前后的外周血淋巴細胞亞群表達水平比較 治療前，兩組患兒的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK細胞表達水平比較差異均無統計學意義(P＞0.05)；治療后，兩組患兒的CD3+、CD8+、NK細胞表達水平較治療前明顯升高，且觀察組明顯高于對照組，兩組患兒的CD4+、CD4+/CD8+細胞表達水平較治療前明顯下降，且觀察組明顯低于對照組，差異均具有統計學意義(P＜0.05)，見表4。

表3 兩組患兒治療前后的外周血Treg細胞表達水平比較(，%)

表3 兩組患兒治療前后的外周血Treg細胞表達水平比較(，%)

注：與本組治療前比較，aP＜0.05。

組別 例數CD4+ CD25+觀察組對照組t值P值48 48治療前15.38±2.21 14.98±2.16 0.897 0.372治療后43.46±2.19a 36.24±2.04a 16.713＜0.05治療前14.28±2.13 15.11±2.09 1.927 0.057治療后40.35±2.98a 30.30±3.25a 15.791＜0.05

表4 兩組患兒治療前后的外周血淋巴細胞亞群表達水平比較(，%)

表4 兩組患兒治療前后的外周血淋巴細胞亞群表達水平比較(，%)

注：與本組治療前比較，aP＜0.05。

images/BZ_50_207_2404_2273_2516.png觀察組對照組t值P值48 48 65.28±8.12 65.41±7.86 0.080 0.937 79.94±11.71a 70.87±10.03a 4.076＜0.05 30.82±10.02a 35.64±10.03a 2.355 0.021 30.82±10.02a 35.64±10.03a 2.355 0.021 20.67±5.02 20.75±2.10 0.102 0.919 25.12±6.03a 22.36±5.15a 2.411 0.018 3.89±0.94 4.01±0.88 0.646 0.520 1.02±0.11a 2.67±0.42a 26.330＜0.05 6.96±0.40 6.87±0.21 1.380 0.171 14.68±0.87a 10.07±0.58a 30.546＜0.05

2.5 兩組患兒的不良反應比較 治療后，觀察組患兒發生藥物性皮疹5例，不良反應發生率為10.42%(5/48)，對照組發生藥物性皮疹3例，不良反應發生率為6.25%(3/48)，兩組比較差異無統計學意義(χ2=0.546，P=0.460)。

3 討論

川崎病臨床主要表現為皮膚黏膜受損、淋巴結腫大、皮疹、發熱，屬于全身血管性病變綜合征，常并發冠狀動脈瘤、冠狀動脈擴張且隨著病情不斷進展可導致心力衰竭、心肌梗死，嚴重影響患兒預后。因此，及時診治對于減少并發癥、死亡率十分必要。

丙種球蛋白注射使用可阻斷血管損傷、補充患兒抗體，從而形成被動免疫，提高機體抗感染能力，具有很好的免疫調節作用[7]，但單一使用效果卻不甚理想。阿司匹林屬于常見的鎮痛解熱類藥物，具有抗炎、鎮痛作用，在川崎病治療過程中應用可有效抑制血栓素A2形成，阻止血栓形成[8-9]。故本研究將兩者聯合應用于治療川崎病，以探究其臨床療效及對患兒外周血調節T(Treg)細胞、淋巴細胞的影響。結果顯示，單一用藥治療的患兒總有效率僅為75.00%，而聯合用藥治療的患兒總有效率達91.67%，且聯合用藥治療的患兒黏膜充血消退時間、發熱消失時間、淋巴結腫大及皮疹均顯著短于單一用藥的患兒，均證實聯合用藥效果更佳，不僅提高臨床治療效果，還能有效縮短臨床癥狀消失時間。

淋巴細胞及其亞群檢測作為判斷機體細胞免疫功能的重要指標，CD4+、CD8+正常情況下處于動態平衡狀態，共同維持機體免疫功能的穩定，具有抑制自身免疫疾病、抗感染、抑制腫瘤等作用[10]。CD25+、CD4+Treg細胞主要源于胸腺，其水平變化、異常會導致機體免疫系統高度活化，發揮負性調控作用，抑制NK細胞、樹突狀細胞等功能，避免機體過度免疫反應。有研究顯示，CD25+、CD4+Treg細胞參與器官移植、慢性感染性、自身免疫性等疾病的發生、發展[11]。川崎病作為免疫功能顯著異常的一種疾病，其外周血CD25+、CD4+Treg細胞表達水平隨著疾病進展而明顯下降，相關研究指出，CD25+、CD4+Treg細胞表達水平明顯下降是導致血管系統等全身各系統損傷的主要原因之一[12]。本研究中，患兒治療后外周血CD4+、CD25+Treg細胞表達水平明顯上升，且聯合治療組明顯高于單一治療組，說明聯合用藥可明顯提高細胞表達水平，從而提高細胞因子分泌含量，使得有效發揮免疫抑制作用的細胞數量增加，最終提高細胞免疫功能[13]。

同時，本研究結果顯示，患兒經治療后CD3+、CD8+、NK細胞表達水平較治療前明顯升高，且聯合治療組高于單一治療組；而CD4+、CD4+/CD8+細胞表達水平則較治療前明顯下降，且聯合治療組低于單一治療組，說明NK細胞比例下降、CD8+細胞功能不足、CD4+細胞功能亢進均參與川崎病的發病過程，而治療后相關細胞表達水平逐漸恢復，提示聯合用藥可有效恢復Treg細胞抑制作用，抑制T細胞的分化增殖，打破免疫紊亂狀態[14-15]。

綜上所述，阿司匹林聯合丙種球蛋白治療川崎病患兒可有效縮短臨床癥狀消失時間，改善患兒外周血CD4+、CD25+Treg細胞、淋巴細胞亞群比例失衡情況，從而改善細胞免疫狀況，臨床療效確切，且不良反應較少。