原子熒光光譜法測定靈芝孢子粉有機硒含量

張 劍，弓志青，王文亮，羅金華，鄧利玲

（1. 山東省農業科學院農產品研究所/山東省農產品精深加工技術重點實驗室/農業農村部新食品資源加工重點實驗室，山東濟南 250100；2. 重慶市生物技術研究所有限責任公司，重慶 400222）

硒是人體必需的微量元素之一，具有提高人體免疫力、預防多種疾病等生理功能[1]。攝入不足會引起克山病、大骨節病等，過量攝入會引起關節痛、腹瀉、脫發等癥狀[2]。根據硒的存在形式可以分為無機硒和有機硒，無機硒主要以硒酸鹽和亞硒酸鹽形式存在，有機硒主要為硒蛋白、硒代氨基酸、硒多糖等形式。與無機硒相比，有機硒具有更易被機體吸收利用、安全性更高的特點[3]。因此，如何有效地將無機硒轉化成有機硒是目前的研究方向之一。

靈芝是傳統的食藥用菌，含有豐富的營養及功能成分，具有抗腫瘤、調節免疫、抗衰老、降三高等多種功效[4]。作為硒轉化生物載體，靈芝具有耐硒能力強、轉化水平高等優點[5-6]，其生長周期短、栽培條件可控，因此富硒靈芝具有廣闊的發展前景。

目前，硒的檢測方法主要有石墨爐原子吸收光譜法[7-8]、X 射線熒光光譜法、電感耦合等離子體質譜法、高效液相色譜－原子熒光光譜法等[9]。由于不同物質中硒的形態各異，不同方法均有其優勢。同時，硒的安全與毒性劑量的范圍較窄，合理選擇檢測方法才能更加準確地測定硒的含量，確保富硒產品的營養安全性。

試驗采用氫化物發生- 原子熒光光譜法測定靈芝孢子粉中的總硒、無機硒，通過差減法計算總有機硒的含量，旨在為富硒靈芝孢子粉硒含量測定提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑與樣品

硒標準溶液100 mg/L，國家環境保護總局標準樣品研究所提供；硝酸、高氯酸、鹽酸氫氧化鈉、硼氫化鈉，均為分析純；試驗用水為超純水；靈芝孢子粉樣品，重慶市生物技術研究所有限責任公司提供。

1.2 儀器與設備

FA-1004 型電子天平，上海舜宇恒平科學儀器有限公司產品；微波消解儀ETHOS 1、MILESTONE PF32原子熒光光度儀（配硒空心陰極燈），北京普析通用儀器有限責任公司產品；超純水儀，四川優普超純科技有限公司產品。

1.3 試驗方法

1.3.1 總硒的測定

參照GB 5009.93—2017《食品安全國家標準食品中硒的測定》，采用氫化物原子熒光光譜法，對檢測條件進行優化后測定總硒含量。

PF32 原子熒光光度儀優化參數見表1。

表1 PF32 原子熒光光度儀優化參數

1.3.2 樣品消解方法

采用微波消解方法，稱取靈芝孢子粉0.5 g（精確至0.001 g），置于消化管中，加10 mL 硝酸、2 mL 過氧化氫，振搖混合均勻，于微波消解儀中消化。

微波消解程序見表2。

表2 微波消解程序

消解完成待冷卻后，將消化液轉入錐形燒瓶中，在電熱板上（150～180 ℃） 加熱至近干，再加6 mol/L鹽酸溶液5 mL，繼續加熱至溶液變為清亮無色并伴有白煙出現，冷卻，轉移至10 mL 容量瓶中，加入鐵氰化鉀溶液，用水定容，混勻待測，同時做空白試驗。

1.3.3 無機硒的測定

參照DB 3301/T117—2007《稻米中有機硒和無機硒含量的測定- 原子熒光光譜法》，采用鹽酸水浴的方法對靈芝孢子粉中的無機硒進行提取，使其與有機硒分離，再用1.3.1 中的方法檢測無機硒含量。

1.3.4 標準曲線繪制

準確移取一定量的硒標準溶液，用鹽酸及超純水配置成最高質量濃度的硒溶液10.00 μg/L，由原子熒光光度儀自動稀釋成8.00，6.00，4.00，2.00 μg/L，以測得的熒光強度（IF） 為縱坐標，相應的質量濃度為橫坐標，通過儀器工作站求出回歸方程、相關系數。

1.3.5 有機硒含量的計算

根據測得的總硒和無機硒含量，利用差減法計算得出，即有機硒含量=總硒含量- 無機硒含量。

1.3.6 精密度及回收率

稱取1～8 號靈芝孢子粉0.5 g（精確至0.001 g），分別加入含量為0.400，0.200 mg/kg 的硒標準溶液，分別按1.3.1 和1.3.3 中的方法檢測總硒和無機硒含量，計算該方法的總硒、無機硒的加樣回收率及相對標準偏差。

2 結果與分析

2.1 標準曲線及檢出限

標準曲線見圖1。

圖1 標準曲線

由圖1 可知，標準曲線為Y=64.213X+0.23，其中R2=0.999 5，線性范圍0～10.00 μg/L。按照儀器設定的檢出限程序，連續測定樣品空白15 次，得到空白熒光值的標準偏差，根據標準偏差法計算得出檢出限為0.008 μg/L。

2.2 富硒靈芝孢子粉有機硒含量測定

對不同的富硒靈芝孢子粉中的總硒、無機硒進行測量，并計算出有機硒含量。

靈芝孢子粉中不同硒形態含量及所占比例見表3。

表3 靈芝孢子粉中不同硒形態含量及所占比例

2.3 精密度與加標回收率

各樣品總硒和無機硒回收率見表4。

表4 各樣品總硒和無機硒回收率

由表4 可知，對不同的樣品分別加入不同含量的硒標準溶液，分別測定總硒及無機硒含量，得出總硒的回收率為97.50%～103.75%，RSD 為2.44%，無機硒的回收率為97.00%～102.00%，RSD 為1.98%。

3 結論

采用氫化物原子熒光光譜法結合鹽酸浸提的方法測定靈芝孢子粉中總硒和無機硒的含量，并用差減法計算出有機硒的含量。結果表明，靈芝孢子粉中的硒主要是以有機硒形式存在，占比80.00%～93.44%，再次驗證了靈芝是很好的硒轉化生物載體。經過方法學驗證，該方法相對準確、穩定，適合靈芝孢子粉中有機硒含量測定，同時也為其相關產品有機硒含量的測定提供參考。