豬瘟病毒實驗室診斷技術研究

李 雪，康 路

（1.盤錦市大洼區現代農業發展中心，遼寧 盤錦 124200；2.盤錦市大洼區動物衛生監督所，遼寧 盤錦 124200）

豬瘟主要是一種由豬瘟病毒引發的高度傳染性疾病，該病死亡率極高，類型較多，診斷困難，一旦診治不及時，容易導致生豬的群體性死亡，對生豬養殖的危害極大。本文通過對豬瘟病毒分離與鑒定實驗室診斷技術的分析，為生豬養殖業豬瘟疫病的診斷提供參考，以確保豬瘟疫病防治工作的有效性。

生豬養殖業受豬瘟的影響，直接經濟損失非常大。因此，要想徹底根除豬瘟，除了要建立完整的生物安全制度，認真研究豬瘟的流行病學外，還必須通過豬瘟病毒實驗室診斷技術的研究，以確定不同豬瘟病毒檢測技術的優勢和缺點，篩選出檢測準確度高、操作簡單、檢測速度快、成本較低的檢測技術。

1 豬瘟病毒ELISA實驗室診斷技術

酶聯免疫吸附試驗（ELISA）是檢測抗體的一項技術，在大型養豬場應用較多，結合ELISA的實驗原理，在其基礎上發展出了多種檢測方法。現階段在豬瘟病毒抗體和抗原檢測中，已經形成多種ELISA檢測方法，在生豬養殖疫病研究和防治中起到了關鍵性的作用。

1.1 間接ELISA抗體檢測方法

該檢測方法是將已知的豬瘟病毒抗原進行包被，將制備好的血清加入孔中，等到反應完全后，滴入帶有過氧化物酶標記的葡萄球蛋白A，待血清變色后，讀取酶標記，得出檢驗的結果。研究人員使用豬瘟兔化弱毒株進行間接ELISA 實驗，提取HCLV 的E2 基因，然后插入到pEI-32a 原核，建立一個新的pEI-2e，使其變成一個宿主菌BL21（DE3），最后在不同的誘導條件下，進行TPTG 表達，獲取多個誘導結果。通過對誘導蛋白結果的比對，得到最好的誘導條件，以保證菌體蛋白總量達到實驗的預期結果。并將在最佳誘導條件下獲取的蛋白CSFV 抗原進行包被，到此完成間接ELISA 抗體檢測。有相關研究人員使用間接ELISA 檢測法，對100份血清進行實驗，證實該方法診斷的靈敏性好、反應體系小、實驗速度快，并解決了原來CSFV培養和純化難度大的問題。

1.2 Dot-ELISA抗體檢測方法

該方法與ELISA接近，不同之處是將ELISA的固相載體，轉換為Dot-ELISA的混合纖維素膜，該方法比間接ELISA的實驗操作更簡單。有研究通過使用Dot-ELISA抗體檢測方法，在一個大型養豬場進行豬瘟病毒免疫母豬抗體水平檢測實驗，獲取45份血清，經Dot-ELISA檢測后，母豬血清陽性為32份，檢出率為71%，從而證明Dot-ELISA檢測的有效性，其是一種操作簡單、快速、檢出率高的檢測技術，適用于大型養豬廠的日常防疫工作。

1.3 微波ELISA抗體檢測方法

微波ELISA 與間接ELISA 實驗操作流程相同，只不過微波ELISA法需將血清放入微波爐中進行溫育，進一步加快血清的反應速度，對間接ELISA進行了改進，以促進微波ELISA抗體檢測法在大型生豬養殖場的推廣和應用。

1.4 競爭ELISA抗體檢測方法

將制備好的血清和特異酶標單抗同時，或者是先后與包被抗原結合反應，如果血清中含有抗體，則會起到抑制作用，阻礙包被和抗原發生反應，依據陰陽性樣品的OD值，計算出血清特異性抗體的抑制率，進而確定陽性血清中抗體的百分比，以及計算出結合力。競爭ELISA 法在陽性血清顯色時，要比間接ELISA 法的顏色淡，OD 值也低。競爭ELISA法在檢測豬瘟抗體時，沒有感染性，非常適用于沒有豬瘟的地區。

2 分離和鑒定豬瘟病毒的實驗室診斷技術

對豬瘟病毒進行分離和鑒定是實驗室經常用到的一種診斷技術，解剖獲取病豬含有病毒最多的器官組織，如扁桃體、淋巴結等，加入雙抗后，研磨成3%～10%的液體，使用離心設備處理，提取上層清液，再濾除其中的雜質，并進行除菌。另一種方法是將解剖獲取的病豬血樣，經EDTA 處理，在-20 ℃進行冰凍后，再放入37 ℃的溫水中融化，提取病毒放入豬睪丸細胞中，置于37 ℃恒溫容器中培養1 h，去除接種液，放入MEM洗滌細胞，加入生長液，進行培養和觀察。如果細胞沒有病變，在48 h后取出細胞片，使用免疫酶染法進行檢測，可以獲取培養后細胞中的病毒抗原，或者將分離出的病毒接種在健康的生豬體內，觀察其感染病毒后的變化，則可以確定豬瘟的類型。分離和鑒定的實驗方法操作復雜且成本較高，雖然診斷準確，但是在病毒傳代時，極易引起病毒發生變異，導致病毒核酸序列分析的不準確，需要研究人員密切地關注實驗過程。

3 小 結

豬瘟又被稱為“爛腸瘟”，屬于一種高致病性、高死亡率、接觸性傳染的疾病，一般情況下該病只感染生豬，沒有發病的規律，并且可感染整個生豬群體，沒有日齡和品種上的差異。因此，該病的診斷治療難度很大，需使用有效的實驗室診斷技術，保證豬瘟確診的準確性。