塞來昔布膠囊體外具有區分力溶出曲線的研究

李文強，張玉莉，陳英，吳云生，魏小亮，李百華

（1.陜西國際商貿學院，陜西咸陽 712000；2.陜西步長制藥有限公司，陜西咸陽 712000）

塞來昔布是一種選擇性環氧化酶-2（COX-2）特異性抑制劑，主要用于緩解成人骨性關節炎、類風濕性關節炎、成人急性疼痛和緩解強直性脊柱炎的癥狀和體征。其在保留傳統非甾體類藥物較好療效的同時，大大減少了藥物的毒副作用和不良反應[1]。

塞來昔布難溶于水，藥物的溶出情況直接影響其在體內的吸收和利用，因此有必要對其進行溶出度的檢測。溶出度試驗技術不僅已作為評價固體制劑內在質量的一種重要手段，也是一種評價藥物在體內釋放和吸收的有效手段[2]。溶出度和溶出曲線的全面深入研究，既可為藥物體內生物利用度的研究提供參考，也可以揭示不同制劑工藝和內在品質的差異[3]。本文以國外上市的制劑為參比制劑，考察自制塞來昔布膠囊在不同溶出介質中的溶出行為，并采用相似因子法評價藥品的內在質量。

1 材料與方法

1.1 試藥

塞來昔布對照品，批號R081P0，USP；塞來昔布膠囊參比制劑，規格200 mg，批號Q02111、R55865、W34002，Pfizer Pharmaceuticals LLC；塞來昔布膠囊自制制劑，規格 200 mg，批號 S001101、S001102、S001103，陜西步長制藥有限公司；甲醇、乙腈，色譜純，Fisher公司；十二烷基硫酸鈉（SDS）、鹽酸、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、乙酸鈉、冰醋酸等，分析純，國藥集團化學試劑有限公司；水為自制純化水。

1.2 儀器

vision?Elite 8TM智能溶出儀，Teledyne Hanson Research；TE214S分析天平，德國賽多利斯股份公司；PB-21 pH計，梅特勒-托利多國際股份有限公司； Aglient 1260高效液相色譜儀，美國Agilent公司；色譜柱，250 mm×4.6 mm，5 μm，Thermo scintific Betabasic phenyl；ZKT-18F真空脫氣機，天津市天大天發科技有限公司。

1.3 溶出介質的選擇

原料藥塞來昔布為生物藥劑學分類系統（BCS）分類Ⅱ類，水中溶解度極小，經過前期實驗發現，其基本不溶于生理pH范圍的緩沖液。為建立良好的體內外關聯性，對本品原料藥進行了飽和溶解度試驗，分別考察了原料藥在不同pH介質中的飽和溶解度，同時考察了在介質中加入不同濃度的十二烷基硫酸鈉（SDS）后的飽和溶解度。

1.4 溶出度檢測方法的建立

1.4.1 色譜條件與系統適用性試驗

以苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀2.7 g，加水溶解并稀釋至1 000 mL，用磷酸調節pH至3.5）-甲醇-乙腈（60∶25∶15）為流動相；柱溫為45 ℃；流速為1.2 mL/min；進樣量：20 μL；檢測波長為215 nm，理論板數按塞來昔布峰計算應不低于3 000。按照《中國藥典》2015年版四部通則0512項下進行操作[4]。

1.4.2 對照品及供試品溶液制備

取塞來昔布對照品約12.5 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，加甲醇-水（80∶20）適量，超聲5 min（頻率50 KHz，功率300 W）使其溶解，放冷至室溫，加甲醇-水（80∶20）稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液，平行制備2份。

取塞來昔布膠囊20粒，取出內容物，置于研缽研細，精密稱取67.5 mg（相當于塞來昔布50 mg），置于100 mL量瓶中，加甲醇-水（80∶20）適量超聲5 min（頻率50 kHz，功率300 W）使塞來昔布溶解，放冷至室溫，用甲醇-水（80∶20）并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

1.4.3 溶出曲線的測定方法

取塞來昔布膠囊樣品，按照《中國藥典》2015年版四部通則0931第二法（沉降籃）[3]，分別以0.25%SDS的pH 1.2鹽酸溶液、0.25% SDS的pH 4.5醋酸鹽緩沖液、0.25% SDS的pH 6.8磷酸鹽緩沖液、0.5% SDS的水和pH 12磷酸三鈉溶液1 000 mL為溶出介質，轉速為50 r/min，分別在第5 min、10 min、15 min、20 min、30 min、45 min、60 min、90 min、120 min時，取溶出液10 mL，同時補充相同體積和溫度的溶出介質，取出的溶液過濾，棄去初濾液，取續濾液，精密量取20 μL注入高效液相色譜儀，按外標法以峰面積計算每粒溶出量。

2 結果與分析

2.1 溶出介質的選擇

塞來昔布原料藥屬于難溶性藥物，如表1所示，在常規介質（pH 1.2鹽酸、pH 4.5醋酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液、水）中幾乎不溶，在強堿性介質（pH 12磷酸鹽緩沖液）中溶解性顯著提高；在各介質中加入SDS后，原料藥溶解度顯著提高；因此在滿足溶出度的漏槽條件下，為了尋找最優區分力，選擇以低濃度表面活性劑的溶液為介質，進行溶出度的考察，分別為pH 1.2鹽酸溶液（0.25% SDS）、pH 4.5醋酸鹽緩沖液（0.25% SDS）、pH 6.8磷酸鹽緩沖液（0.25% SDS）、水（0.5% SDS）和pH 12磷酸鹽緩沖液。

表1 原料藥在不同介質中的飽和溶解度

2.2 溶出曲線的測定結果

根據《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》，采用模型非依賴方法相似因子（f2）來比較溶出曲線。f2可作為評價工藝或處方中輔料改變時制劑溶出曲線間的差異性評價參數，以及研制制劑與市售制劑間溶出曲線的差異性評價參數，是被FDA推薦為比較兩條溶出曲線相似性的首選方法[5]。

如表2所示，從各介質溶液5 min的溶出度RSD來看，基本都是在20%左右，有的甚至超過20%，差異相對較大，分析原因主要是由于膠囊殼溶解過程中引起的。為此，通過在溶出介質中加入胃蛋白酶的方法進行改善，但是效果甚微，基于10 min后的溶出差異逐漸變小，所以研究過程中仍然采用不加胃蛋白酶的溶出介質進行溶出度的考察。

本實驗分別考察了75 r/min、50 r/min和35 r/min轉速下的溶出度，發現本品在不過度區分的情況下，選擇50 r/min進行溶出度的考察比較合理。不同介質中溶出曲線結果如圖1所示，通過圖1發現，本品在以0.25% SDS的pH 6.8磷酸鹽緩沖液和pH 12磷酸三鈉溶液的介質中，溶出度均在45～60 min達到85%，且90～120 min達85%以上，無拐點和突釋，因此是具有區分力的兩條溶出曲線[6]。

圖1 不同介質下塞來昔布參比制劑及自制品累積溶出曲線圖

表2 5種介質中塞來昔布膠囊參比制劑和自制制劑累積溶出度RSD值（單位：%）

3 結論

固體藥物制劑的體外溶出數據是評價一種藥物制劑的重要數據，在某種程度上與體內生物利用度呈現一定的相關性。只有經過充分研究，抓住具有區分力的溶出曲線，才能在仿制藥制劑處方開發和工藝研究中發揮出事半功倍之效。因此，本實驗研究所得的兩條具有區分力的溶出曲線，對塞來昔布膠囊成功仿制及其后期上市質量評價均具有重要的指導意義。