突發公共衛生事件中微生物快速檢驗技術的應用

河南省漯河市源匯區疾病預防控制中心（462000）張真真 謝明慧

突發公共衛生事件為突然發生，造成或者可能造成社會公眾健康嚴重損害的重大傳染病疫情、群體性不明原因疾病、重大食物和職業中毒以及其他嚴重影響公眾健康的事件，為盡量降低突發公共事件的危害性，在其發生后需要及時做出有效的處理[1]。近年來隨著我國環境的不斷惡化，各種傳染性疾病的發病率越來越高，由于其發展迅速、波及范圍較廣，在對其進行處理時要格外注重時效性[2]。微生物快速檢測技術的應用不僅可以有效幫助醫務人員快速了解病情發生根源以及各類病原微生物變異情況等，而且還可以為其控制措施的制定帶來一定指導[3]。面對不同的突發公共衛生事件，微生物快速檢驗技術的應用以及要求也不同，為此本文將圍繞如何在突發公共衛生事件中有效應用各種微生物快速檢驗技術作詳細綜述，以望為后期突發公共衛生事件微生物快速檢驗技術的選擇以及應用開展帶來一定參考指導作用。

1 微生物快速檢驗技術

微生物是個體無法用肉眼觀察到的極小生物的統稱，主要包括細菌、病毒等，涉及藥品、食品、環境等諸多領域。其對人類的影響包括有益和有害兩個方面，其中有害方面對人類影響最大的是傳染病的流行，人類有50%的疾病是由病毒引起的，但人類在對抗病毒的同時也取得了巨大進步，比如青霉素的發現，這在二戰中挽救了無數人的性命[4]。

由于微生個體較小且生長繁衍非常迅速，這對微生物的檢驗提出了挑戰。傳統的檢驗技術主要是采用試管法、培養膜法和濾膜法進行檢驗，這種方法步驟較繁瑣、檢驗數量有限以及技術的限制，一般經過反復試驗才能做出判斷。快速檢驗方法主要包括聚合酶鏈式反應檢測技術以及膠體金免疫技術，這些技術可以減少成本、縮短庫存時間、培養時間，提高檢驗的靈敏度[5]。

國家現使用微生物快速檢驗技術是國內外安全的需要，是現在日益嚴重的安全局勢的需要，比如2003年的SARS和2019年的新冠狀病毒的流行。使用這類技術可以快速得到檢驗結果，節省人力物力，保障國家和人們生命安全。因此從長遠發展趨勢來說，微生物快速檢驗方法是應對突發公共衛生事件的一大方向。

2 微生物快速檢驗技術在各類突發公共衛生事件中的應用

2.1 鼠疫 鼠疫是由鼠疫耶爾森菌感染引起的烈性傳染病，主要傳播途徑為鼠蚤叮咬，除此之外通過病獸或者是直接接觸患者體液等也可以傳染。鼠疫屬于我國法定傳染疾病中的甲類傳染病，不僅傳播速度快，而且致死率高，暴發后容易發生大面積傳染發病，會對人們的健康以及生命安全帶來嚴重威脅。以往細菌培養是鼠疫的傳統醫學檢驗方式，不足之處在于檢驗耗時長。近年來鼠疫的檢驗水平隨著我國醫學技術的不斷提高而發生了明顯上升，其中雙重聚合酶鏈式反應具有良好的醫學檢驗效果。既往有相關研究[6]在對66例鼠疫患者的研究中，通過雙重聚合酶鏈式反應對其淋巴液進行了檢查，結果顯示陽性例數共計61例，陽性檢出率為92.42%，認為雙重聚合酶鏈式反應可以有效提高鼠疫檢出效果，能夠有效幫助臨床診療工作的開展。除此之外，也有學者[7]表示，在鼠疫細菌檢驗中，膠體金免疫滲濾實驗由于不會和其他類型細菌發生交叉影響，加之其檢驗耗時短，通常可以在十分鐘之內完成檢驗，因此在鼠疫細菌檢驗中具有良好的檢驗應用價值。膠體金免疫滲濾實驗和反向間接血凝實驗比較相似，但是二者檢驗效果比較，前者要更優。

2.2 SARS 它是一種由于SARS冠狀病毒引起的重癥急性呼吸綜合征，于2002年在我國廣東發生，同時迅速擴散至東南亞乃至全球，為全球性傳染病疫潮之一。聚合酶鏈式反應、病毒管分離檢測、間接免疫熒光法抗體檢測以及酶聯免疫吸附測定等均為SARS常見檢驗方法[8]。其中間接免疫熒光法抗體檢測在SARS檢驗中，患者發病10小時后是其最有效的應用時間，檢測結果具有較高的可靠性以及客觀性。反轉錄聚合酶鏈式反應已經普遍應用于SARS檢驗中。而對于酶聯免疫吸附測定法，目前較多研究均表示其在SARS發病21天后具有更為良好的檢測效果。除此之外，也有學者[7]表示，通過在SARS病毒診斷期間制作基因芯片進行檢驗，可以獲取更高的檢測準確性，通常患者檢測準確性可以超過90%，同時還具有較高的檢測靈敏度。

2.3 霍亂 霍亂主要是攝入被霍亂弧菌污染的食物或水而導致發生的一種急性腹瀉性傳染病，以腹瀉以及嘔吐等為常見臨床表現。據相關統計資料顯示[9]，每年大約有四百萬的霍亂病例，每年因霍亂死亡的患者例數大約有十萬左右，以夏季為高發季節。霍亂作為烈性腸道傳染病，病情發展迅速，不及時治療可能會導致患者發生脫水以及水電解質絮亂等情況，影響體內循環質量，嚴重可導致患者發生循環衰竭，對其生命安全帶來嚴重威脅。分離培養聯合血清凝集試驗為霍亂常見的一種傳統微生物檢驗技術方法，檢測耗時一般需要24小時以上，檢驗時間長[10]。通過對水樣便分離進行4號瓊脂培養可以對檢測時間進行縮短，一般檢驗結果可以在7小時左右出具。近年來，在霍亂檢驗中，聚合酶鏈式反應得到越來越廣泛的應用，檢驗耗時短，其整個檢驗過程一般2小時即可完成。除此之外，聚合酶鏈式反應不會和副溶血性弧菌發生交叉反應，不僅更有利于提高霍亂檢驗效果，而且還可以進一步縮短檢驗時間。在霍亂檢驗中，膠體金免疫技術也有一定應用，有學者[11]在對霍亂患者的肛拭子標本中，通過為期6小時的堿性胨水增菌培養后，再選擇膠體金免疫技術開展檢測，結果顯示其檢測敏感度為105CFU/mL。此外，也有一些研究報道表明，基因芯片技術在本病中應用日趨成熟。

2.4 病毒性肝炎 甲型病毒性肝炎以及戊型病毒性肝炎均為臨床常見的兩種病毒性肝炎類型，以口鼻和糞便為主要傳播途徑，是一種嚴重的傳染性疾病，發病后患者病情發展相對較快，可在短時間內廣泛傳播，容易流行暴發。如何進一步提高病毒性肝炎的防控效果一直以來都是我國公共衛生研究中的一個重要研究課題，目前有學者[12]針對病毒性肝炎建立了一個能夠同時檢測甲型病毒性肝炎以及戊型病毒性肝炎的模型，根據此模型的相關標準以及要求進行檢測，其對甲型病毒性肝炎和戊型病毒性肝炎檢測的準確率分別為96%和98%，在病毒性肝炎檢測中具有良好的檢測應用價值。另外也有相關研究報道指出，對于病毒性肝炎患者，通過酶免疫測試技術對其血清進行檢驗，無論檢驗特異度還是檢驗靈敏度，均可以達到90%以上。

2.5 傷寒以及副傷寒 傷寒以及副傷寒均為腸道傳染病，前者是由腸沙門菌腸亞種傷寒血清型引起的腸道傳染病，后者是由腸沙門菌腸亞種副傷寒甲或乙或丙血清型引起的急性傳染病，和前者比較相似。沙門菌種類多達兩千多種，在我國已被發現的種類就已經超過兩百多種，不僅會嚴重傷害患者腸道，影響其身體健康，而且還具有較高的傳染性。在對傷寒以及副傷寒的檢查中，傳統常規培養方法檢查需要（4±1）天才可以得出檢查結果，容易延誤患者的最佳治療時機[13]。隨著近年來臨床對傷寒以及副傷寒檢查的不斷深入研究，近年來也有學者[14]指出，金標免疫斑點法在傷寒以及副傷寒檢查中具有良好的檢查效果，通過對其開展血清抗傷寒抗體檢驗，傷寒患者的陽性檢出率為82%；對于非傷寒患者，金標免疫斑點法檢測的假陽性率為4%，提示金標免疫斑點法在傷寒中的良好檢測效果。另外也有研究報道指出，傷寒抗體檢驗傷寒初期患者的陽性率為93%，非傷寒患者陽性率為9%。有學者指出，在副傷寒檢驗中，PHA檢測方法具有操作簡便、檢測效果好以及檢驗速度快等優點。

2.6 出血性腸炎 出血性腸炎是一種好發于小腸的局限性急性出血壞死性炎癥，在春秋季節具有較高發病率，具體病因還不清楚，但是多數學者均認為其和腸道缺血感染等因素存在密切關系。在各種細菌類型中，H7大腸桿菌是出血性腸炎常見的主要致病菌，由于其具有相對較強的爆發性，因此也是導致多次暴發公共衛生事件的主要原因之一。對于H7大腸桿菌，從其分離出來至今已經帶來了較大的負面影響，飽受社會爭議。有相關研究[15]指出，在出血性腸炎檢測中，聚合酶鏈式反應技術檢出率較高，且不必耗費較長的檢測時間，具有較高的檢測準確性，基本上可以排除沒有感染H7大腸桿菌的患者。

2.7 人感染高致病性禽流感 人感染高致病性禽流感是由禽流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，其中H9N2、H5N1以及H7N7為目前常見的幾種感染類型。目前聚合酶鏈反應技術為人感染高致病性禽流感常見的檢驗方法之一，其在實際應用中，不僅不會和H1以及H3發生交叉反應，而且還具有較高的檢驗準確性以及檢驗特異度。

2.8 登革熱 登革熱屬于急性蟲媒傳染病之一，主要是由登革病毒引起的，以突起高熱、淋巴結腫大以及頭痛等為主要常見臨床表現。登革病毒感染后，可以導致登革出血熱，但是我國比較少見。據相關研究報道指出，登革熱患者最早可以在發病1d后出現抗體。通過酶聯免疫吸附實驗檢驗登革熱患者的免疫球蛋白M，其陽性檢出率會隨著其發病后的時間長短發生顯著差異，發病時間低于3天者，其陽性檢出率相對較低，僅為35%，而在發病4天后以及5天以上，其陽性檢出率分別為80%和91%，因此登革熱患者發病時間越長，其酶聯免疫吸附實驗檢驗結果的陽性率會越高。除此之外，逆轉錄聚合酶鏈反應技術也具有良好的檢測應用價值，登革熱病毒檢驗效果理想。

3 結語

由于我國經濟的快速發展，人們生活方式以及飲食習慣發生了巨大變化，同時環境也日益惡化，各種微生物突發公共衛生事件不斷頻發，無論是對我們正常的生產生活還是對我們的身心健康以及生命安全，均會帶來嚴重影響。面對各類突發公共衛生事件，其檢驗方法也各不相同，需要廣大醫務工作者不斷進行大量研究實驗，以進一步完善各種微生物快速檢驗技術，尋求最佳檢驗方法技術，以使其可以更好地應用于各類突發公共衛生事件中，從而在最大程度上降低其發展速度及其所致的經濟損失，減少其對民眾造成的傷害。目前聚合酶鏈式反應檢測技術以及膠體金免疫技術均為近年來應用相對廣泛的兩種微生物快速檢驗技術，均具有其各自的優勢及特點。雖然基因芯片檢測技術還處于研究階段，但是相信未來的不斷深入研究，其一定可以在突發公共衛生事件應用中發揮更大價值。