氟苯尼考耐藥性的研究進展

王長征，劉小提

（1.河南農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，河南 鄭州 450000；2.溫縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局）

隨著畜牧業(yè)規(guī)模化的發(fā)展，疾病日趨復雜，廣大的從業(yè)人員在處理細菌性疾病時，喜歡采用抗菌譜廣、效果顯著的氟苯尼考類制劑，導致該類產(chǎn)品耐藥菌株的增加，人們對氟苯尼考抗藥機制的研究越來越多。

1 研究歷史

1.1 藥物研究歷史

1990年，氟苯尼考首次在日本上市。挪威于1993年7月批準了氟苯尼考可作為用于開發(fā)治療白血鮭病的一種藥物。1995年，法國、英國、奧地利、墨西哥及西班牙批準氟苯尼考用于治療牛呼吸系統(tǒng)細菌性疾病。在日本和墨西哥還批準氟苯尼考用作豬的飼料添加劑，預防和治療豬的細菌性疾病。1999年，我國通過了該藥的審批。

1.2 耐藥性研究歷史

1996年Kim等人首次從魚的巴氏桿菌多重耐藥R質(zhì)粒中發(fā)現(xiàn)耐氟苯尼考的基因，并將其定名為pp-flo。基因結(jié)構(gòu)克隆序列測序的分析結(jié)果顯示，ppfrlo編碼基因在r-r質(zhì)粒內(nèi)成功編碼了對非磺胺酶抗藥耐藥性在基因組的下游區(qū)，序列結(jié)構(gòu)分析結(jié)果顯示該編碼基因就是具有非磺胺酶活性介導的對氟苯尼考耐藥性的基因47.4%的同源性。隨后，氟苯尼考耐藥抗體基因從新型沙門氏菌、大腸桿菌的同屬和新型葡萄糖鏈球菌中相繼進行克隆。氟苯尼考作為抗癲癇藥作用機理的新研究從此時期開始。

2 氟苯尼考耐大腸桿菌的研究進展

鄭朝朝從河北省保定市和周邊地區(qū)雞場、豬場、牛場等分離出60株細菌，經(jīng)生化試驗鑒定為大腸桿菌，其中雞源大腸桿菌23株，豬源大腸桿菌14株，牛源大腸桿菌8株，采用玻板凝聚和試管凝集的方式，對45株大腸桿菌進行O血清型鑒定，雞源大腸桿菌的血清型為O78，O35，豬源大腸桿菌的血清型為O101，牛源大腸桿菌的血清型為O101。按照世界衛(wèi)生組織推薦的kirbybauer菌液涂布方法，對45個大腸桿菌進行了氟苯尼考、頭孢喹諾和諾氟沙星等11個抗生素藥物的敏感試驗，結(jié)果顯示分為：大腸桿菌對多種抗生素有不同的耐受度，僅對頭孢喹諾更敏感。氟苯尼考抗藥菌的檢出率為62%、58%、38%。

馮世文、李軍等人采用體外亞抑菌耐藥誘導方法，將e.colio157:h7誘導為氟苯尼考耐藥菌株，采用連續(xù)的無抗生素壓力培養(yǎng)或sds方法，消除耐藥菌株中的氟苯尼考抗藥性，使用pcr法檢查氟苯尼考抗藥基因flor，通過外排泵檢查氟苯尼考抗藥基因flor。抑制劑和氟苯尼考聯(lián)用，檢測e.colio157:h7是否有對氟苯尼考主動排出作用，經(jīng)過36代耐藥誘導，敏感菌株對氟苯尼考有高度耐藥性（mic為256mg/ml）。質(zhì)粒檢查結(jié)果表明，耐藥引起的菌株有2個大小約為35mg的質(zhì)粒。00bp和1200bp，flor基因在質(zhì)粒dna中通過連續(xù)的傳代培養(yǎng)或sds法進行抗藥消除，耐藥引起菌株對氟苯尼考敏感度提高，但其質(zhì)粒和flor基因并未丟失。結(jié)論基于e.colio157:h7氟苯尼考的敏感菌和其他抗非耐藥性細菌都是具有控制質(zhì)子動力驅(qū)動泵的外排機和泵，以及基于atp泵的水解質(zhì)子依賴的驅(qū)動外排機和泵，都是具有控制質(zhì)子動力驅(qū)動式泵的外排機和泵的主動泵和外排泵的功能。

3 氟苯尼考耐沙門氏菌的研究進展

黃凱、陳素娟等多位臨床專家疑似發(fā)現(xiàn)沙門氏菌的多重病料，對沙門細菌多重病原pcr亞型進行了多種病原陽性分離株的鑒定；黃凱采用pckb的方法測定病原分離株的病原敏感度為23種都是抗菌致病藥；黃凱選擇使用氟苯尼考作為抗致病藥將菌株基因增加到了flor，fexa，費克斯和ppcfr三個基因。結(jié)果表明，共鑒定了61株沙門氏菌，其中包括腸炎沙門氏菌10個，雞白痢沙門氏菌12個，鼠傷寒沙門氏菌38個。所有的菌株都對青霉素、紅霉素和萬古菌抗藥耐用，90.16%的抗生素耐用率超過6種和以上的6種。flor基因在鼠傷寒的沙門氏菌氟苯尼考耐藥細胞中（8/12，66.67%）廣泛存在，但沒有發(fā)現(xiàn)其他耐藥基因。

李帆等用微量肉湯稀釋法測定了215株豬源沙門氏菌對4種抗菌藥物的敏感性，用PCR方法測定了多藥外排泵基因oqxA、oqxB和氟苯尼考耐藥基因floR，并用ERIC-PCR方法分析了豬源沙門氏菌菌株之間的相關(guān)性和遺傳關(guān)系。結(jié)果顯示：分離菌株對喹乙醇、痢菌凈、氟苯尼考和恩諾沙星的耐藥率分別為32.56%、20.93%、92.56%、16.74%；有152株菌同時攜帶oqxA和oqxB，另有7株菌單獨攜帶oqxB；有156株菌攜帶floR基因；oqxA或oqxB陽性菌株可分為A～Q17個ERIC型，oqxA和oqxB基因分布于不同的ERIC型菌株中。

4 氟苯尼考耐葡萄球菌的研究進展

馬木爾阿克木漢等比較新疆焉耆地區(qū)某豬場不同生長期豬只鼻腔和直腸攜帶葡萄球菌的耐藥情況。通過微量肉湯法，對不同部位分離的葡萄球菌進行11種抗菌藥物的藥敏試驗。結(jié)果分離出332株直腸菌（83.0%，332/400）和137株鼻腔菌（68.5%，137/200）。2月齡仔豬直腸菌對四環(huán)素、苯唑西林、氧氟沙星、利福平、青霉素5種藥物的耐藥率高于鼻腔菌；鼻腔菌對氟苯尼考的耐藥率極顯著高于直腸菌（P﹤0.01）。

曾淑儀等對廣東省豬場葡萄球菌耐藥狀況和cfr流行狀況進行了流行調(diào)查。分別對廣東省各地區(qū)的豬場和其密切接觸者的肛門拭子、鼻擦子進行葡萄球菌分離鑒定，采用PCR和基因檢測來鑒定葡萄球菌，并用PCR方法對葡萄球菌的cfr、fex（a）、erm（a）基因進行分別檢測，用瓊脂稀釋方法對cfr陽性菌株的12種抗病毒細胞進行了分析。從豬場收集的樣本中分離了1049個菌株，檢測到96個攜帶cfr基因的菌株，其中有36個攜帶cfr基因的菌株，分別為2個人源和34個豬株，其中20個金黃葡萄球菌，5個腐生的葡萄球菌，4個科氏葡萄球菌，3個阿爾萊的葡萄球菌，1個株木糖葡萄球菌和3個葡萄球菌屬，23個同時攜帶著cfr和fex（a）基因。36株cfr陽性菌耐藥性分別為83.33%、77.78%、75%、765%，環(huán)丙沙星和利奈唑胺對四環(huán)素、氨芐西林的耐藥性分別為83.33%、77.78%。

5 展望

吳方達等從寧德地區(qū)6個豬場分別采集了50份仔豬糞便樣品。從中分離得到氟苯尼考耐藥大腸桿菌17株、沙門氏菌2株、肺炎克雷伯菌5株和鮑曼不動桿菌8株，并對其耐藥基因floR進行同源性分析。結(jié)果顯示，寧德地區(qū)豬源大腸桿菌、沙門氏菌、肺炎克雷伯菌和鮑曼不動桿菌對氟苯尼考的耐藥檢出率分別為34%、4%、10%和16%，且所有的分離細菌都呈現(xiàn)了多重耐藥性。同源性分析發(fā)現(xiàn)，不同細菌間的耐藥基因floR存在高度同源性。這些結(jié)果表明，氟苯尼考耐藥基因floR廣泛存在于不同細菌間，且可在不同細菌間進行水平傳播。

氟苯尼考的敏感菌有牛、豬嗜血桿菌、痢疾志賀氏菌、沙門氏菌、大腸桿菌、肺炎球菌、鏈球菌、金黃葡萄球菌、衣原體、鉤端螺旋體、立克次氏體等。本品可通過脂溶性彌散進入細菌細胞，主要作用于70s核糖體的50s亞基，抑制轉(zhuǎn)肽酶，使肽的增長受阻，抑制了肽鏈的形成，從而阻止蛋白質(zhì)的合成，達到抗菌目的。具有廣泛的抗菌譜，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性細胞和支原體都有很好的抗菌作用，但是對本品耐藥性的研究目前還很少，相信經(jīng)過廣大從業(yè)者的努力，不久的將來，一定會形成完整的科學流程和標準，從而有效地控制氟苯尼考耐藥菌株的發(fā)生和流行。□