非洲豬瘟病毒(ASFV)是對豬最具傳染性和致命性的病毒之一,已在許多國家造成流行,近幾年傳播到中國,但目前尚未獲得許可的疫苗或治療方法。盡管科學家已進行了廣泛研究,但ASFV編碼的蛋白質如何抑制宿主翻譯這一問題仍然未知。本文探討了ASFV 干擾宿主翻譯并優化自身基因表達的分子機制。
經研究,有14種ASFV蛋白對海腎熒光素酶(Rluc)活性的抑制作用超過5倍,其中抑制作用最強的是pE66L蛋白。結合生物信息學分析和生化試驗結果,確定了pE66L的跨膜(TM)結構域(氨基酸13-34)在抑制宿主基因表達中的關鍵作用。另外,通過構建重組質粒,使TM結構域與增強型綠色熒光蛋白(EGFP)相連,進一步證明該結構域可廣泛抑制蛋白質合成;共聚焦試驗和生化分析表明,TM結構域可幫助蛋白質定位到內質網(ER),之后激活PKR/eIF2α途徑抑制宿主翻譯。刪除pE66L基因對病毒在巨噬細胞中復制幾乎沒有影響,但能顯著恢復宿主基因的表達。
綜上所述,ASFV 的pE66L 蛋白可通過激活PKR/eIF2 α通路誘導宿主翻譯關閉。
非洲豬瘟(ASF)是一種由非洲豬瘟病毒(ASFV)引起的家豬和野豬傳染病。近年來,這種疾病在全球廣泛蔓延,給豬肉生產造成了嚴重的經濟損失。本研究描述了在中國一個大型商業養豬場發生的非洲豬瘟疫情。
疫情始于2018 年,在集約化養豬場中呈時空傳播。靠近出口的豬舍感染風險更高(優勢比=14.4,95% CI:1.5-140)。據推測,疫病的傳入是由于運輸車輛被ASFV污染(該車輛曾用于銷售生產率較低的生豬)。本項調查顯示了ASFV 感染和在假定有足夠生物安全措施環境中的傳播過程,將有助于大型養豬場控制ASF。
由非洲豬瘟病毒(ASFV)引起的非洲豬瘟(ASF)于1921 年在肯尼亞首次報道,但目前仍沒有有效的疫苗或抗病毒藥物。快速和有效的診斷是處理ASF 疫情的關鍵。本研究制備了兩株針對ASFV磷蛋白P30的單克隆抗體(MAbs),分別命名為3H7A7和6H9A10。
表位分析顯示MAb 3H7A7 和6H9A10 分別識別P30的aa 144-154和aa 12-18。基于這2株單克隆抗體,科研人員開發了用于快速檢測ASFV 的膠體金試紙條。靈敏度和特異性分析表明,該條帶的檢出限為2.16 ng P30,且該試紙條僅與ASFV 反應,與其他常見豬病毒無交叉反應。通過檢測153份臨床現場樣本(包括血清、血漿、組織和抗凝血處理過的血液),本試紙條與Real-time PCR 的一致性為95.42%。
非洲豬瘟(ASF)是一種嚴重的豬傳染病,給中國造成了巨大的經濟損失。因此,迫切需要開發一種快速、特異、靈敏的診斷方法檢測非洲豬瘟病毒(ASFV)。本研究建立了一種新型的實時定量PCR 方法,該方法利用凍干粉末試劑(LPR),以主要結構蛋白P72為靶點,可用于ASFV的快速檢測。
經試驗,該方法對ASFV 質粒模板的靈敏度為100拷貝/ul,比OIE 推薦的qPCR 方法靈敏度高10 倍;特異性分析表明,針對ASFV 的qPCR-LPR 與其他重要的豬病原體沒有交叉反應;在我國218 份家豬血液樣本的臨床診斷中,本試驗建立的qPCR-LPR 方法和商用qPCR 試劑盒檢測ASFV 的陽性率分別為80.73%(176/218)和76.61%(167/218),經SPSS 分析,兩種方法的符合率為92.20%(201/218),kappa 值為0.768(p<0.0001),兩種檢測方法的總體一致性為95.87%(209/218),進一步的Pearson 相關和線性回歸分析顯示兩種方法之間有顯著的相關性,R2值為0.9438。本研究建立的qPCR-LPR 方法,可在2 h 內完成從樣本處理到結果報告的整個過程。
以上結果表明,qPCR-LPR檢測是一種很好的實驗室診斷工具,可以靈敏有效地檢測ASFV。
非洲豬瘟(ASF)是由非洲豬瘟病毒(ASFV)引起的一種高度傳染性動物疫病。為了確定在越南傳播的ASFV菌株之間的遺傳變異關系,對2019-2020 年從越南北部、中部和南部23個不同省份采集的家豬器官和血液樣本中的26株ASFV分離株進行了遺傳特征分析。
對部分B646L(p72)和EP402R(CD2v)基因序列以及全長E183L(p54)基因序列的分析表明,所有26 株ASFV分離株均屬于基因型II和血清型VIII,這與Georgia/2007/1和中國所有測序菌株一致。I73R 和I329L 基因之間的TRS 包含10 個核苷酸的插入,這與2018 年從家豬分離的中國ASFV株CN201801一致,但在Georgia/2007/1和中國/吉林/2018株中未觀察到。□