HPLC法測定少腹逐瘀丸中阿魏酸含量

黃云先 劉云懷

【摘 要】 目的：建立HPLC法測定少腹逐瘀丸中當歸中阿魏酸的含量。方法：采用OmniGene LLC生廠的HPLC Column Hubble C18（5 μm 250×4.6 mm）色譜柱;以乙腈-0.085%磷酸溶液（17∶83）為流動相;檢測波長為316 nm;流速為1.0 mL/min。結果：建立的含量測定HPLC條件下，當歸中阿魏酸在21.92～219.2 μg/mL濃度范圍內線性關系良好，r=0.99969;平均回收率為100.17 %，RSD=1.74%（n=9）。結論：本法簡便、快捷，準確度高，專屬性強，重現性好，可用于少腹逐瘀丸中當歸中阿魏酸的含量測定及質量控制。

【關鍵詞】 少腹逐瘀丸;質量控制;高效液相色譜法;阿魏酸;含量測定

【中圖分類號】R284.2?? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2021）21-0055-02

少腹逐瘀丸由當歸、蒲黃、五靈脂、赤芍、小茴香（鹽炒）、延胡索（醋制）、沒藥（炒）、川芎、肉桂、炮姜10味藥組成，具有溫經活血、散寒止痛的功效。用于寒凝血瘀所致的月經后期、痛經、產后腹痛，癥見月經后錯、行經小腹冷痛、經血紫暗、有血塊、產后小腹疼痛喜熱、拒按。本品收載于《中國藥典》2020年版一部中，標準中僅有顯微鑒別及芍藥苷的薄層色譜鑒別，沒有制定含量測定方法，不能有效地控制藥品質量。筆者采用HPLC法測定當歸中阿魏酸的含量質控方法，結果令人滿意，現報道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器 安捷倫1260型高效液相色譜儀（二極管陣列檢測器）;HPLC Column Hubble C18柱（250 mm×4.6 mm，OmniGene LLC）;德國塞多利斯BT224S電子分析天平;梅特勒MS205DU電子分析天平;Purelab Flex 超純水機。

1.2 材料? 阿魏酸（C10H10O4）對照品適量（批號：110773-201614，中國食品藥品檢定研究院）;少腹逐瘀丸（批號：191208，200708，201007，191114，國內某藥廠）乙腈、甲醇（色譜純，美國塞默飛世爾科技（中國）有限公司）; 磷酸（分析純，天津市風船化學試劑科技有限公司）;水（實驗室自制UP水，Ω=18.3）。

2 方法與結果

2.1 色譜柱與系統適用性試驗 色譜柱：Hubble C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;以乙腈-0.085%磷酸溶液（17∶83）為流動相;檢測波長為316nm;柱溫35 ℃。流速為1.0 mL/min，進樣量10μL。色譜圖如圖1所示。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 阿魏酸（C10H10O4）對照品適量，加70%甲醇稀釋至刻度，制成每1 mL含43.84 μg的溶液，作為對照品液，即得。

2.2.2 樣品溶液的制備 取少腹逐瘀丸約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入70%甲醇20 mL，稱定重量。超聲處理30min，放冷，再次稱定重量，用70%甲醇補足減失重量。濾過，濾液作為樣品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按本品的已知處方制備缺少當歸的模擬樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性樣品溶液。

2.3 專屬性試驗 將阿魏酸對照品溶液、樣品品溶液和陰性樣品溶液分別注入液相色譜儀，進行測定。結果樣品溶液中均檢測出待測成分，而陰性樣品溶液無干擾。

2.4 線性關系 取阿魏酸（C10H10O4）對照品10.96mg，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含21.92、43.84、87.68、131.52、175.36、219.2μg的一系列的對照品溶液。分別精密吸取上述對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，在上述色譜條件下測定其峰面積，以對照品的濃度（μg/mL）為橫坐標，峰面積為縱坐標，按外標法進行線性回歸，線性方程為y=42.65537x-149.68159，r=0.99969。說明阿魏酸在21.92～219.2μg/mL濃度范圍內線性良好。

2.5 精密度試驗 取43.84 μg/mL阿魏酸對照品溶液10 μL，在上述色譜條件下，重復進樣6次，測定其峰面積：1122.16、1124.88、1131.24、1148.32、1150.41、1133.70。計算秋阿魏酸峰面積RSD=1.04%（n=6），表明該系統的精密度良好。

2.6 重復性試驗 取批號200708的少腹逐瘀丸樣品6份，按“2.2.2”方法制備供試品溶液，進樣量10 μL，照上述色譜條件進行測定，測得阿魏酸峰面積RSD=1.1%。表明方法重復性較好。

2.7 穩定性試驗 取同一份少腹逐瘀丸供試品溶液，按含量測定方法分別在配制0、2、4、8、16、24 h后進樣，測得峰面積RSD=0.8%。表明供試品溶液在24h內穩定。

2.8 回收率試驗 取批號200708的少腹逐瘀丸樣品9份，每份約2 g，精密稱定，置錐形瓶中，分別精密加入阿魏酸對照品43.84、87.68、131.52μg/mL3種水平，各3份按“2.2.2”方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測定，計算少腹逐瘀丸中阿魏酸的回收率分別為97.7%、99.8%、102.3%、98.4%、99.7%、101.5%、99.6%、102.9%、99.6%;RSD=1.74%（n=9）。

2.9 樣品含量測定 取少腹逐瘀丸四批，一式兩份，按“2.2.2”方法制備的樣品溶液，分別進樣15 uL進行測定，按外標法計算少腹逐瘀丸中阿魏酸（C10H10O4）的含量。結果見表1及圖2所示。

3 討論

在阿魏酸研究中，根據阿魏酸的理化性質和有關參考文獻，分別用了水;30%、50%、70%甲醇和乙醇;純甲醇和純乙醇為提取溶媒，其他處理方法不變，經實驗70%乙醇提取效率高。

因少腹逐瘀丸為復方制劑，成分復雜，為了獲得阿魏酸滿意的分離度，篩選了乙腈-0.085%磷酸溶液（17∶83）（18∶82）（20∶80）、乙腈-0.1%磷酸溶液（17∶83）（18∶82）（20∶80）6組流動相進行考察，結果乙腈-0.085%磷酸溶液（17∶83）分離效果好，峰形良好，且保留時間適中，故確定上述流動相系統為本法的流動相。

當歸為少腹逐瘀丸中重要組成，其中含阿魏酸等活性成分，測定其含量對控制制劑質量有意義。從線性、可行性、穩定性、重復性、回收率等實驗考察，用HPLC測定少腹逐瘀丸復方制劑中的含量，方法簡便可靠、分離度好，結果穩定。

在實驗過程中筆者對赤芍中的芍藥苷進行了探索性研究，因少腹逐瘀丸成分復雜，干擾因素多，暫未摸索出有效提取方法，導致峰分離效果不好，峰面積較小，有待進一步深入探索研究。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（四部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2020.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2020.

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（收稿日期：2021-03-16 編輯：陶希睿）