淺析萊克多巴胺的危害及檢測方法

董科 劉超 朱慧敏 李慧 孟美辰 張雪濤 何琪

摘 要 萊克多巴胺為瘦肉精的替代品，屬于β-興奮劑類藥物，我國禁止在動物養(yǎng)殖中添加。動物長期食用具有致癌、致畸、致突變的作用，其肉制品被人體食用后會對人體產(chǎn)生嚴重危害，其尿液、糞便排泄物會污染生態(tài)環(huán)境。綜述萊克多巴胺的危害，分析酶聯(lián)免疫法、免疫傳感器法、膠體金免疫層析法、高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、毛細管電泳法及化學(xué)發(fā)光免疫分析法等，為畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測工作提供參考。

關(guān)鍵詞 萊克多巴胺;殘留;檢測方法

中圖分類號：S859.84 文獻標志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2021.30.091

萊克多巴胺為醫(yī)藥名詞，主要用于治療人體肌肉萎縮和心力衰竭癥，也是治療支氣管擴張的有效試劑。作為一種人體興奮類型的藥劑，其可以減少人體脂肪的合成，增加肌肉的生成。正是由于這一特性，使其被一些生豬養(yǎng)殖企業(yè)所利用，在其他諸如肉雞、火雞等養(yǎng)殖業(yè)中也不同程度地存在這一情況[1]。

1 危害

人食用萊克多巴胺殘留的肉類后，會出現(xiàn)不同程度的肌肉顫動、心率過快等問題，嚴重的甚至出現(xiàn)輕微中毒反應(yīng)，其癥狀類型與動物中毒癥狀基本相同。如果食用人本身就患有高血壓及心臟病等病癥，更易引發(fā)此類問題，甚至?xí)斐伤劳觥ＨR克多巴胺作為一種醫(yī)藥材料，世界各國對其使用量均有規(guī)定，中國臺灣地區(qū)一律禁止使用萊克多巴胺，我國一些地區(qū)沒有完全禁止萊克多巴胺的使用，但要求養(yǎng)殖業(yè)的用量必須控制在規(guī)定值以內(nèi)，一旦使用過量，在動物的體內(nèi)就會有萊克多巴胺殘留，進入人體后會發(fā)生一系列癥狀反應(yīng)。有學(xué)者以成年大鼠為例，研究萊克多巴胺對其的影響，得出的結(jié)論是使用該藥劑后，大鼠的睪丸和體重與對照組相比明顯增加，此試驗再次證明萊克多巴胺可以促進人體激素的分泌和生成，造成人體激素分泌紊亂，正常的新陳代謝被打亂[2]。有學(xué)者采用試驗的方法對萊克多巴胺在動物體內(nèi)的殘留進行試驗，結(jié)果表明萊克多巴胺屬于腎上腺素受體激動劑類型，其作為添加劑對動物進行喂食后，動物生長速度明顯加快，同時飼料的轉(zhuǎn)化率大大提升，瘦肉率也大大提升。

2 檢測方法

2.1 酶聯(lián)免疫法（ELISA）

ELISA是目前市場中比較主流的檢測方法之一，單克隆抗體技術(shù)研發(fā)取得的進展，使萊克多巴胺的檢測也逐漸從傳統(tǒng)的多抗體檢測試劑盒中轉(zhuǎn)變過來。采用單克隆抗體技術(shù)具有如下優(yōu)勢：工業(yè)化生產(chǎn)方式較為簡單;選擇性較強;靈敏度較強，可達0.5 ng·mL-1;可測的范圍較廣，不僅僅是動物的內(nèi)臟、肉，包括飼料中、尿液中的萊克多巴胺殘留均可測出。隨著研發(fā)技術(shù)的提升，單克隆抗體技術(shù)又可以區(qū)分為直接競爭和間接競爭2類，一般來說，國內(nèi)生產(chǎn)的大多數(shù)為間接競爭ELISA，而國外生產(chǎn)的大多數(shù)均為直接競爭ELISA。目前，酶聯(lián)免疫法主要采取生物素鏈霉親和素放大酶聯(lián)免疫方法，同時結(jié)合了生物素—鏈霉親和素系統(tǒng)的放大作用，靈敏度進一步提升，達到（0.30±0.05）ng·mL-1。在目前主流的檢測方法中，酶聯(lián)免疫法具有較為明顯的優(yōu)勢，由于其操作便捷，結(jié)果的一致性較高，十分適合對大批量樣品的檢測。

2.2 高效液相色譜法（HPLC）

HPLC測定法主要采用C 18分析柱實施分析，測定的步驟如下：利用乙腈和緩沖溶液配置流動相等溶劑洗脫來進行樣品預(yù)處理;采取電化學(xué)和HPLC相結(jié)合的方法實施檢測，檢測主要針對豬血清血漿。利用庫侖檢測器也可以實施對飼料及豬組織器官的檢測，該方法也能進一步提升檢測的靈敏度[3]。

2.3 膠體金免疫層析法（GICA）

GICA代表了目前萊克多巴胺檢測方法的研發(fā)方向，其具有的優(yōu)勢有：操作較為簡單;不需要專業(yè)的檢測人員和儀器;基本不受環(huán)境的限制;得出結(jié)果的時間短，一般15 min就可以知道結(jié)果。但該檢測方法的缺陷也是顯而易見的，就是不能實現(xiàn)定量分析。隨著科學(xué)研發(fā)能力的提升，在膠體金免疫層析法的基礎(chǔ)上，目前又發(fā)展了膠乳免疫層析法，膠乳免疫層析法的原理是利用膠乳與標記物發(fā)生反應(yīng)，在氨基和羧基之間形成較為穩(wěn)定的化學(xué)結(jié)構(gòu)，相比膠體金免疫層析法，膠乳免疫層析法結(jié)構(gòu)體的穩(wěn)定性更好，表面結(jié)合力更強。此外膠乳免疫層析法還具備較好的靈敏度，且靈敏度可控性好，比膠體金高出10～1 000倍。膠乳的分類主要區(qū)分為3類：熒光膠乳、彩色膠乳及磁膠乳。由于作用原理不同，實現(xiàn)的功能也各不相同，其中磁膠乳和熒光膠乳在實施檢測時，需要專門的儀器（熒光檢測儀和磁膠乳檢測儀），從而實現(xiàn)定性和定量檢測，這2種儀器體積較小，搬移也較為便捷，所以可以滿足即時檢測的需要。彩色膠乳主要通過調(diào)節(jié)pH，產(chǎn)出顏色各異的微球膠乳，從而實現(xiàn)聯(lián)檢產(chǎn)品中不同指標的同步呈色，這是目前試驗室實施檢測檢驗的趨勢之一。

2.4 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）

GC-MS主要采用專門的儀器對生豬尿樣及組織器官中的萊克多巴胺殘留進行測定，由于其靈敏度較高，被廣泛使用。在此基礎(chǔ)上發(fā)展而來的液質(zhì)聯(lián)用法（LC-MS），優(yōu)點更為顯著：樣品無需進行衍生，本身的離子碎片就具有較強的特征性;可以提供較為豐富的信息。GC-MS和LC-MS的檢測，均需要較為昂貴的儀器，樣品也需進行復(fù)雜的預(yù)處理環(huán)節(jié)，其檢測缺陷也十分明顯：前期耗費的時間較長，檢測效率不高;不適合進行大規(guī)模的檢測。但和酶聯(lián)免疫法（ELISA）相比，也有自身具有的特有優(yōu)勢：準確性、有效性及敏感性均優(yōu)于ELISA;檢測時，ELISA需要先行使用試劑盒進行測定，而氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法則不需要該步驟[4-5]。

2.5 毛細管電泳法（CE）

毛細管電泳法所采用的原理是采用加有S-α-CD緩沖液的毛細管電泳法可以較好地實現(xiàn)相關(guān)物質(zhì)的分離。這一方法對生豬預(yù)混料中的萊克多巴胺進行測定，具有顯著的優(yōu)勢：具有較好的精確度;具有較好的回收率，一般能達到（92.6±4.6）%。與前文所闡述的方法相比，優(yōu)勢更為明顯：對生豬尿樣的處理簡單;分析過程較短，檢測所需的成本大大降低;檢測過程比較穩(wěn)定，干擾因素少，所以檢測的結(jié)果也較為可靠。毛細管電泳法（CE）的缺陷也較為明顯：使用樣品的量較少，因此對低濃度樣品的檢測具有較大難度;方法不具備可復(fù)制性。這類型缺陷可以采取等速電泳、電堆積技術(shù)加以改善。

2.6 化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）

該方法主要利用的原理是在抗體上以酶或化學(xué)發(fā)光物質(zhì)實施標記，在免疫反應(yīng)結(jié)束后，加入發(fā)光的底物，從而測定發(fā)光信號的光強，再根據(jù)一定的計算公式計算出物質(zhì)中萊克多巴胺的含量。該方法主要利用一定的化學(xué)原理實施分析，具備的優(yōu)勢十分顯著：靈敏度較高;見效較快;成本較低;樣品的預(yù)處理較為便捷;有著較強的選擇性。由于該技術(shù)具有的比較優(yōu)勢十分顯著，也是未來重點發(fā)展的主要趨勢之一。

2.7 免疫傳感器法

該方法的主要原理是利用免疫測定法和傳感技術(shù)結(jié)合使用。作為一種新型的生物傳感器技術(shù)，其主要利用抗體特異性、抗原原理實施。免疫傳感器法主要將抗原或抗體固定在傳感器基體上，致其發(fā)生化學(xué)、物理反應(yīng)，同時通過傳感技術(shù)將化學(xué)反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓹z測的信號，以測定分子的濃度。實踐中，傳感器可以區(qū)分為2類，標記型免疫傳感器和非標記型免疫傳感器。使用該技術(shù)的優(yōu)勢有：穩(wěn)定性較好，具有一定的可重復(fù)性;靈敏度較高。其使用劣勢主要是抗原抗體反應(yīng)具有良好的可逆性。

3 結(jié)語

隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，養(yǎng)殖業(yè)中萊克多巴胺殘留的測定可使用的方法越來越多，檢測的精確度也越來越高。但由于養(yǎng)殖業(yè)環(huán)境、生產(chǎn)條件及養(yǎng)殖方法的不同，使用一種檢測方法往往不能適用所有的檢測環(huán)境和條件。目前市場中成本低、操作便捷、適用性好及結(jié)果穩(wěn)定的測定方法得到推廣應(yīng)用。

參考文獻：

[1] 張劍波，劉翌陽，陶煒煜，等.近10年中國生豬產(chǎn)業(yè)回顧與未來展望[J].農(nóng)業(yè)展望，2018（1）：35-42.

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[3] 金雁，姜莉，劉寧，等.高效液相色譜法同時測定豬肉中克倫特羅、沙丁胺醇、土霉素、四環(huán)素殘留量的研究[J].分析測試，2007（2）：64-67.

[4] 王重洋.基質(zhì)固相分散—色譜法分析食品中磺胺類獸藥殘留、蘇丹紅染料及揮發(fā)性成分[D].長春：吉林大學(xué)，2014.

[5] 韓德娟，高艾英，高大山.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜內(nèi)標法測定豬肉中沙丁胺醇及萊克多巴胺殘留量的不確定度分析[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2020，11（1）：223-230.

（責任編輯：劉寧寧）