微柱凝膠法配血不合的原因及處理方法

張 剛 紀芳芳 申寶鳴 趙 林

山東國欣頤養集團新汶中心醫院檢驗科，山東泰安 271219

交叉配血測定是輸血治療前的檢測指標，也是臨床安全輸血的關鍵保障，以往臨床多見的鹽水法測定交叉配血測定，簡單方便，但僅僅能夠測定出免疫球蛋白M（immunoglobulin M，IgM）抗體，無法測定免疫球蛋白G（immunoglobulin M，IgG）抗體。酶法以及抗人球蛋白試驗（Coombs'試驗）的應用，雖然能夠測定出IgG抗體，但是操作流程復雜，當前無法作為常規測定進行推廣?？紤]到上述研究方法的缺陷，開始應用微柱凝膠法（microcolumn gel method，MGT）進行交叉配血，因其較高的準確性和靈敏性，得到臨床大規模應用，且配血狀態下也存在程度不同的陽性結果[1]。但在配血中，發生弱陽性結果，如果無法進行快速準確的判定，將導致輸血安全性受到影響。基于上述研究背景，本文對60例交叉配血不合患者進行分析，研究交叉配血不合原因以及解決措施?，F報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2017年2月至2020年3月山東國欣頤養集團新汶中心醫院共記錄出現交叉配血不合患者60例，采用回顧性分析，記錄60例患者基本資料，其中男26例，女34例，年齡55～84歲，平均（62.25±1.33）歲；其中32例患者出現第二次配血不合情況。納入標準：①應用乙二胺四乙酸二鉀（EDTAK2）進行抗凝血[2]，采血量≥2 ml，加入試管后混合6～8次后搖勻，3000 r/min離心5 min；②對本研究知情，簽訂同意書。排除標準：①患傳染性疾?。虎诟文I功能障礙。對無法溶血的患者，血標本不染菌處理，在當日采集最新鮮的血液。

1.2 方法

MGT交叉配血，依據說明準確操作。對受血者和供血者的血漿以及紅細胞進行分離，將紅細胞應用低離子介質溶液配比成1%的紅細胞懸液，取出配血卡，對測定號標記，記錄好主側以及次側，將封口膜撕開。主側管中加入受血人員的血漿50 μl以及供血人員1%紅細胞懸液50 μl；次側管中加入供血人員的血漿50 μl以及受血人員1%紅細胞懸液50 μl。放置在37 ℃度孵育15 min，離心10 min記錄結果。

1.3 觀察標準

記錄患者交叉配血不合的因素。

1.4 統計學分析

采用SPSS 18.0統計學軟件進行數據處理，計數資料用[n（%）]表示，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

本研究包括60例MGT交叉配血不合患者數據記錄。①有8例（13.33%）患者屬于不規則抗體，這8例患者均有輸血史，在配血特征中，屬于主側凝聚。譜細胞測定，抗-E抗體共6例，抗-M抗體共2例。②有14例（23.33%）患者屬于自身抗體導致的交叉配血不合。歸屬為自身免疫性疾?。╝utoimmune diseases，AD）[3]，有 2例（3.33%）屬于自身免疫性溶血性貧血（autoimmune hemolytic anemia，AIHA）[4]，在配血特征中，屬于主側凝聚、次側凝聚，采用Coombs'試驗[5]直接測定，結果為陽性，間接測定為陽性，未檢測出特異性抗體。其余12例（20.00%）患者明顯特征為次側凝聚，保持在DAT陽性狀態，區間范圍±～4+，另2例（3.33%）屬于系統性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）[6]，10例（16.67%）屬于風濕性關節炎（rheumatic arthritis，RA）[7]。此類患者的抗核抗體、類風濕因子記錄陽性。且無黃疸以及脾大的情況，血清蛋白比值處于正常狀態。③有32例（53.33%）患者屬于藥物導致，配血特點屬于單獨性次側凝聚，DAT陽性（±～4+），此類患者所具有的明顯特征為：只有藥物影響導致DAT陽性。④有6例（10.00%）患者，屬于血清蛋白不穩定及白球比例導致的假凝聚狀態，此類患者具有的明顯特征為血清蛋白（編號1e7i）障礙/白球比例失衡。

有50例交叉配血次側不相合的案例，其中6例（10.00%）為血清蛋白紊亂和白球比例倒置引起的假凝集、32例（53.33%）疑似藥物引發，配血呈現為單獨次側凝集，主側多為陰性狀態，而在次側的反應中，出現有差異的凝聚狀態，凝聚顆粒特征為不規則分布，這些凝聚的顆粒均在微柱中，并未處于頂部，12例（20.00%）為自身免疫性病癥，10例（16.67%）類風濕關節炎，2例（3.33%）為系統性紅斑狼瘡。

3 討論

交叉配血測定是確保臨床輸血安全度提高的一種主要方式，目前MGT因操作簡單，重復性以及靈敏度較高，目前已經在我國廣泛應用。因MGT的靈敏度相對比較高，在提升對不相容抗原以及抗體測定能力時，會導致直抗陽性形成[8]。

本研究中，8例（13.33%）屬于不規則抗體，這8例患者均有輸血史，在配血特征中，屬于主側凝聚。譜細胞測定，抗-E抗體共計6例，抗-M抗體共計2例。上述案例的分析中，分析可能是患者的血漿中出現同一種抗體和供血者紅細胞上的抗原起反應。處理對策：第二次檢查的受供人員ABO以及RH血型[9]，檢查證實，血型鑒定均準確，檢測血液交叉配血情況，行血液輸注[10]。而后經過血站的測定有6例存在含有IgG抗-E抗體，2例為含有抗-M抗體。另有2例為：主側（+）、次側（+）、自身（-）、DAT（+）、抗體篩選（+）。處理對策[11-12]：采用吸收放射檢測進行不規則抗體篩查[13]。

有50例交叉配血次側不相合的案例中6例（10.00%）為血清蛋白紊亂和白球比例倒置引起的假凝集、32例（53.33%）疑似藥物引發，配血呈現為單獨次側凝集，主側多為陰性狀態[14]，而在次側的反應中，出現有差異的凝聚狀態[15]，凝聚顆粒特征為不規則分布，這些凝聚的顆粒均在微柱中，并未處于頂部[16]，12例為自身免疫性病癥，10例為類風濕關節炎，2例為系統性紅斑狼瘡，主要反映為：主側為（-）、次側為（+）、自身為（-）、DAT 為（+）、抗體篩選為（-），處理方式為：患者進行DAT試驗，復查受供人員ABO和RH血型，滿足輸血指征[17]。對于手術患者Hb＜70 g/L，不進行手術的患者其Hb應＜60 g/L，適當輸注主側相滿足的洗滌紅細胞[18]。

應用青霉素以及頭孢菌素類處理，對于上述抗生素藥物可以影響其Coombs'試驗，當紅細胞膜受到如頭孢菌素藥物的影響[19]，而產生變化，則造成蛋白非特異性被紅細胞吸附，導致DAT陽性，這一部分患者不存在自身免疫性疾病以及輸血反應，且血漿總蛋白處于正常的狀態，因此疑似為藥物導致敏感。

MGT的靈敏度較高，因此檢出直抗陽性紅細胞的比率較高，這也是MGT方式配血不合的關鍵因素。在研究中如果配血呈現為主側陰性，次側為弱陽性時，且其余檢查抗篩呈現為陰性，同時自身對照為陽性，直抗陽性，那么在確定血型測定沒有差異后，輸注紅細胞懸液不會出現副作用[20]。造成紅細胞直抗陽性的因素較多，不僅僅是溶血性輸血疾病，新生兒溶血疾病，也包括自身免疫性貧血反應。

另外因MGT受到內部以及外部的多種因素影響，因此也可以說在某種情況下，會導致假凝集情況出現，這一情況的發生因素如下：（1）顆粒物受阻，因紅細胞懸液中，白細胞的計數較高，且血小板呈現為聚集的狀態，或者出現紅細胞小凝塊出現，均導致凝膠微孔受阻，進一步造成紅細胞下沉游離，引發假聚集；（2）標本抗凝不完全，當纖維蛋白解析出紅細胞游離狀態時，從而導致假聚集狀態，這一情況也多發生在應用血袋供血人員的血漿標本；（3）老舊標本，應用老舊標本進行配血，紅細胞在體外導致過敏，引發假凝集；（4）離心不完全，離心機轉速改變，或者配血卡沒有對稱放置造成假凝集。強化配血的每一個流程質量控制，可降低配血不合情況，提升輸血工作質量。

綜上所述，MGT的應用，其準確度較高，但是在予以交叉配血測定的過程中，需要對陽性數據進行詳細觀察判定，從而更進一步確保輸血的安全性，同時考慮到本研究數據存在一定限制，研究樣本有限，建議后期臨床可加大樣本量進行深入分析，以此判定更為準確的安全性數值。