寵物源偽中間型葡萄球菌的耐藥性調查研究

安妮

偽中間型葡萄球菌是由Devriese等人于2005年報道并命名的一種新的凝固酶陽性葡萄球菌。此菌是寄生于貓、狗皮膚和黏膜上最常見的一種凝固酶陽性菌之一，是一種機會致病菌，可引起皮膚和軟組織等感染。

由于抗生素的廣泛使用，葡萄球菌的耐藥性逐漸增加。目前，國內對于金黃色葡萄球菌的耐藥性調查研究已經較為廣泛，但對于偽中間型葡萄球菌的研究還較為少見。本研究擬用瓊脂稀釋法對寵物源偽中間型葡萄球菌的藥物敏感性進行了檢測，為指導寵物臨床合理使用抗菌藥物提供依據，以減少耐藥菌株的產生。

1.1……藥物原液的制備

受試藥物配制方法如表1。配制的藥液用質控菌株進行測定，最小抑菌濃度質控范圍內合格后分裝，于-20℃或冷凍保存備用。

1.2……菌液制備

將已純化的偽中間型葡萄球菌在哥倫比亞血瓊脂平板上劃線培養后，取單個菌落接種于2毫升的MH肉湯中，37℃恒溫振蕩培養4～8小時，用MH肉湯稀釋菌液，使稀釋菌液達到0.5麥比濁度，再按1∶100稀釋菌液至含菌量約為1×106CFU/毫升，備用。同時制備質控菌葡萄球菌。

1.3……抗菌藥稀釋

將保存于-20℃的抗菌藥物解凍，然后把抗菌藥物原液按二倍稀釋法在試管中稀釋到需要的濃度，取2毫升藥液放進做好標記的平皿中。

1.4……藥物瓊脂平板的制備

用25毫升滅菌移液管吸取18毫升冷卻至50～60℃MH瓊脂，加入已有2毫升抗菌藥物的平皿中，混勻。同時每種藥物設有兩個空白瓊脂平板。在超凈工作臺中風干冷卻后，立即使用。

1.5……細菌接種

將稀釋好的菌液加入到無菌的96孔板中，然后用多點接種儀蘸取適量菌液，按照藥物濃度從低到高的順序，接種到瓊脂平板表面。將接種好菌液的瓊脂平板放置在超凈工作臺內，直到菌液被瓊脂完全吸干。再將平板放入培養箱，37℃恒溫培養18～24小時。同樣接種質控菌株作為整個試驗過程的質控標準。

1.6……結果判定

當接種MH平板上的所有接種點的菌生長良好，而無接種細菌的平皿均無菌落生長，試驗組完全不見細菌生長的最低藥物濃度為該藥物對細菌的最小抑菌濃度。以最小抑菌濃度規定的敏感、中介、耐藥折點值范圍判斷結果。受試藥物的敏感折點值判斷標準見表2。

試驗中144株偽中間型葡萄球菌對8種藥物的敏感性見表3。

環丙沙星屬于氟喹諾酮類抗生素，此類抗生素具有抗菌譜廣、殺菌力強、體內分布廣泛等優點，近年來在寵物臨床上逐漸成為常用的藥物。本研究中，環丙沙星的耐藥率在50%以上，可能是由于臨床上使用頻率增加所致。

青霉素和氨芐西林同屬青霉素類β-內酰胺抗生素，頭孢唑啉、頭孢曲松和頭孢噻肟則屬于頭孢菌素類β-內酰胺抗生素。青霉素類β-內酰胺抗生素與頭孢菌素類β-內酰胺抗生素對不同的PBPs具有不同的親和力，這可能是本研究中偽中間型葡萄球菌對兩類藥物耐藥率不同的原因之一。而且青霉素和氨芐西林在臨床上使用也較頭孢唑林、頭孢曲松和頭孢噻肟早，這可能也是前兩者的耐藥率較后兩者高的原因之一。

阿米卡星、慶大霉素屬于氨基糖苷類抗生素。本研究中，慶大霉素的耐藥率達到24.3%，雖然此藥已在臨床廣泛應用，但是其耐藥性維持時間短，停藥一段時間后易恢復敏感性，因此分析這是慶大霉素的耐藥率依然能維持較低值的原因。阿米卡星較慶大霉素耐藥率更低，只有4.9%，這可能是由于其臨床應用較后者少。

試驗表明，寵物源偽中間型葡萄球菌的耐藥率極高。為了達到最佳的治療效果并最大限度地減少偽中間型葡萄球菌耐藥的蔓延，需要合理地使用抗生素，有針對性地選擇用藥，加強對寵物源細菌耐藥性的監測和監管，避免寵物源耐藥菌向人類的傳播。