逐瘀通脈膠囊對大鼠慢性低灌注誘發腦缺血損傷的影響

楊贇昀 吳虓飛 胡宇馳

(北京市藥品檢驗所,北京 102026)

逐瘀通脈膠囊為已上市獨家復方中藥品種,并已列入國家食品藥品監督管L總局國家藥品標準。其組成成分為虻蟲、水蛭、桃仁、大黃。功能主治為破血逐瘀,通經活絡,主治血瘀型眩暈證,癥見眩暈、頭痛耳鳴、舌質暗紅、脈沉澀。

廣大臨床醫師在多年的臨床應用中,發現逐瘀通脈膠囊除了上述原有功能主治之外,對腦梗死等缺血性腦血管疾病具有較好的治療作用,能夠改善患者的癥狀。

本研究以期為逐瘀通脈膠囊治療腦梗死這一新的功能提供藥效學依據,并為新適應癥在臨床的合L應用提供參考。

1 材料和方法

1.1 動物

SD大鼠,SPF/VAF級,82只,體質量(189.54±9.27)g,雌雄各半,購于北京維通利華實驗動物技術有限公司,實驗動物生產許可證號:SCXK(京)2016-0011,質量合格證明號:0261504。

1.2 藥物與試劑

逐瘀通脈膠囊(批號:20100702),由哈藥集團三精千鶴制藥有限公司提供;維腦路通片(批號:111204),購自北京誠濟制藥有限公司和亞寶藥業集團股份有限公司;步長腦心通膠囊(批號:111252),購自陜西步長制藥有限公司。

戊巴比妥鈉(批號:F20070124),Sigma公司生產,中國醫藥集團上海化學試劑公司分裝。

1.3 劑量設計

逐瘀通脈膠囊,口服,2粒/次,3次/d,4周為一療程,人(70 kg)總用量為1.2 g/d,相當于17.1 mg/kg,按照體表面積折算等效劑量,大鼠約為:108 mg/kg。因此,設計可考慮大鼠藥效試驗高劑量為200 mg/kg,中劑量為120 mg/kg,低劑量為50 mg/kg。

維腦路通片,口服,2～3片/次,3次/d,人(70 kg)總用量為540 mg/d,折合成大鼠的等效劑量為54 mg/kg。參照臨床前研究文獻用量,該藥的大鼠口服劑量約為100 mg/kg。

步長腦心通膠囊,口服,2～4粒/次,3次/d,人(70 kg)總用量為4 800 mg/d,折合成大鼠的等效劑量約為435 mg/kg。參照臨床前研究文獻用量,該藥的大鼠口服劑量約為800 mg/kg。

配制方法:所有藥物蒸餾水配制。

1.4 造模

雄性SD大鼠82只,取其中合格72只,起始體質量(189.54±9.27)g,給藥時體質量(256.55±38.97)g。參考Torre等[1-2]文獻方法,永久性結扎大鼠雙側頸總動脈建立大鼠慢性低灌注性腦缺血損傷模型。大鼠用2%戊巴比妥鈉3 m L/kg腹腔內注射麻醉,仰臥位固定,頸部去毛、消毒,頸部正中切口,分離雙側頸總動脈,分別結扎雙側頸總動脈的遠近端,并從中間剪斷,以確保阻斷頸總動脈血流。另選取剩余10只作為假手術組,除不結扎、不剪斷雙側頸總動脈外,其余過程與手術組相同,各組動物手術創口均用青霉素溶液涂抹抗菌。各組大鼠同條件飼養。

1.5 分組給藥

各組均于造模15 d后,挑選取狀態較好,手術創口愈合較好的動物分組給藥,分為6組:模型組、陽性對照Ⅰ組(維腦路通片100 mg/kg)、陽性對照Ⅱ組(步長腦心通膠囊800 mg/kg)、逐瘀通脈膠囊200、100、50 mg/kg劑量組,10只/組,5只/籠,自由攝食與飲水,連續給藥14 d。

1.6 指標檢測

1.6.1 Morris水迷宮行為學檢測:給藥前進行訓練,給藥14 d后利用Morris水迷宮對各組動物學習記憶能力進行檢測,測試內容包括:空間探索實驗[3]。數據由水迷宮統計軟件獲得,采用圖像處L算法,實時跟蹤大鼠運動軌跡,得出大鼠在設定區域內經過的路徑和所花的時間以及其他相關數據。

空間探索指標:經過平臺次數、經過有效區次數、總路程、平臺停留時間、平臺游經距離、有效區停留時間、有效區游經距離。

本工程粗集料采用懷集縣東八里碎石，其各項技術指標檢驗結果如表2所示，均滿足規范要求Ⅱ級，部分指標已滿足Ⅰ級要求。

1.6.2 腦濕質量、腦干質量、腦含水量、腦系數:水迷宮檢測結束后麻醉動物,將動物斷頭取腦,迅速稱量其質量,后置于100℃烘箱內烘烤24 h用同一天平再次稱質量,以(濕質量-干質量)/濕質量×100%即為相對含水量,腦系數=全腦質量/體質量×100%。

1.7 統計方法

所有實驗數據采用SPSS 11.5軟件進行統計分析,多組比較用單因素方差分析(one-way ANOVA)。實驗結果用平均值±標準差(±s)表示,P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對慢性低灌注誘發腦缺血損傷大鼠空間探索能力的影響

空間探索試驗中,第一象限仍為實驗動物入水區域,第三象限為虛擬的平臺區域,平臺已經撤離,周圍為有效區域。動物在平臺區域停留的時間和距離、有效區停留的時間和距離越長,以及經過平臺次數、經過有效區次數越多,表明動物空間探索記憶能力越強。

表1 逐瘀通脈膠囊對慢性低灌注誘發腦缺血損傷大鼠空間探索指標的影響Table 1 Effect of Zhuyu Tongmai capsule on the exploring activity of rats with chronic hypoperfusion of cerebral ischemia in morris water maze test

由表1可知,與假手術組比較,模型組動物在平臺區域停留的時間和距離明顯減少,在有效區停留的時間明顯減少,在有效區停留的距離顯著減少(P<0.05),經過平臺次數顯著減少(P<0.05),在第一象限停留的時間明顯延長,在第一象限停留的距離顯著延長(P<0.05)。

與模型組比較,逐瘀通脈膠囊200 mg/kg劑量組動物在有效區停留的時間、距離和經過平臺次數顯著增加(P<0.05),在平臺區域停留的時間和距離明顯增加,相應的在第一象限停留的時間和距離明顯縮短,在第三象限停留的距離明顯延長。表明當撤掉平臺后,在120 s的時間內,給藥組動物主動尋找原平臺所在位置的能力明顯高于模型組,顯示出給藥組動物的空間記憶能力及主動探索能力顯著改善。因此,認為逐瘀通脈膠囊對慢性低灌注大鼠腦損傷導致空間探索能力的下降有明顯的改善作用。

同樣實驗條件下,陽性對照藥物維腦路通片組(100 mg/kg)、步長腦心通膠囊組(800 mg/kg)動物在平臺區域停留的時間和距離、在有效區停留的時間和距離、經過平臺次數均高于模型組,但未見生物統計學差異(P>0.05);在第三象限停留的距離明顯延長,但未見生物統計學差異(P>0.05);維腦路通片組動物在第一象限停留的時間顯著縮短(P<0.05),步長腦心通膠囊組動物在第一象限停留的時間和距離顯著縮短(P<0.05、P<0.01)。這表明陽性對照藥物對于慢性低灌注大鼠腦損傷導致空間探索能力的下降有一定的改善作用,但不十分顯著。

表2 逐瘀通脈膠囊對慢性低灌性腦缺血大鼠腦組織損傷的影響Table 2 Effect of Zhuyu Tongmai Capsule on brain tissue injury of rats with chronic hypoperfusion of cerebral ischemia

2.2 對慢性低灌性腦缺血大鼠腦損傷的影響

由表2可知,與假手術組比較,模型組的腦濕質量,腦含水量及腦系數均顯著增加(P<0.01,P<0.01,P<0.05),表明慢性低灌注導致大鼠腦水腫損傷,腦組織含水量顯著增加。

與模型組比較,逐瘀通脈膠囊200 mg/kg劑量組動物的腦濕質量、腦含水量、腦系數均顯著下降(P<0.05),其他各劑量組腦濕質量、腦含水量均有明顯的下降趨勢,但未見生物統計學差異(P>0.05)。這表明逐瘀通脈膠囊對大鼠慢性低灌注致腦水腫有很好的改善作用。

同樣實驗條件下,陽性對照藥物維腦路通片(100 mg/kg)、步長腦心通膠囊(800 mg/kg)與模型組比較,腦濕質量,腦含水量及腦系數均顯著下降(P<0.05),表明陽性對照藥可改善大鼠慢性低灌注所致的腦水腫。

3 討論

上述結果顯示,動物經過訓練后,逐瘀通脈膠囊對慢性低灌注大鼠腦損傷導致空間探索能力的下降有明顯的改善作用,并明顯減輕腦缺血后的腦組織水腫現象。

腦梗死是缺血性卒中的總稱,包括腦血栓形成、腔隙性梗死和腦栓塞等,約占全部腦卒中類型的70%。腦梗死是由于腦組織局部供血動脈血流的突然減少或停止,造成該血管供血區的腦組織缺血、缺氧導致腦組織軟化、壞死,并伴有相應部位的臨床癥狀和體征,如偏癱、失語等神經功能缺失的癥候。腦梗死是臨床常見病、多發病,是我國發病率、死亡率和致殘率最高的疾病之一,嚴重危害中老年人的健康,且近年來已呈現年輕化的發病趨勢。

逐瘀通脈膠囊組方來源于張仲景所著的“四大經典”之一的《傷寒論》中的抵當湯,由虻蟲、水蛭、桃仁、大黃四味活血化瘀的中藥組成,方中虻蟲、水蛭為主藥,佐以桃仁、大黃協同作用[4]。現代藥L學研究證實,逐瘀通脈制劑具有降低血液黏度、纖維蛋白原及血脂作用,抑制血小板聚集,改變血液流變學指標,降低毛細血管通透性及腦耗氧指數,擴張血管,增強血流量,改善腦缺血等作用。除此之外,逐瘀通脈膠囊還具有雙向調節作用,阻止血栓形成,它既可降低血液黏度,抑制血小板聚集功能,縮短血栓長度及重量,改善血液流變學指標;又不影響凝血機制,不會出現高纖溶狀態的出血傾向[5-7]。

本試驗研究結果顯示,逐瘀通脈膠囊給藥組,特別是高劑量給藥組動物的空間記憶能力及主動探索能力顯著改善;解剖發現高劑量給藥組動物的腦濕重、腦含水量、腦系數均顯著下降。提示逐瘀通脈膠囊具有顯著的改善腦缺血、缺氧狀態,對局灶性腦缺血大鼠有顯著保護作用,對缺血引起的大鼠神經行為學異常有顯著改善作用,對腦缺血引起的大鼠學習記憶障礙有顯著改善作用;臨床上也有使用逐瘀通脈膠囊治療慢性供血不足、腦血栓的相關應用研究[8-9],因此認為逐瘀通脈膠囊對腦梗死急性期腦組織保護以及恢復期神經功能缺損以及學習記憶能力的下降有較好的治療作用。