新生兒壞死性小腸結腸炎血清SIRT1水平變化及其診斷價值分析

劉剛，譚蔚，李世榮，鄺愛玲

湘南學院附屬醫院，湖南郴州423000

新生兒壞死性小腸結腸炎(NEC)屬一類獲得性疾病，主要是由于多種原因所致的腸黏膜損傷，造成缺血缺氧、小腸出現彌漫性或局部壞死，可出現腹脹、便血、腸黏膜甚至腸深層壞死等癥狀體征。但該病的臨床特征缺乏特異性，誤診、漏診率偏高，較多患兒在確診時已出現較嚴重的腸道壞死，預后不佳[1]。相關數據顯示，該病在我國新生兒重癥監護并發癥的發病率為1%～5%、病死率為16%～20%，是導致新生兒死亡的重要危險因素[2]。因此，尋找診斷NEC的有效生物標志物極為重要。沉默信息調節因子2相關酶1(SIRT1)是一種重要的抗炎、抗氧化應激蛋白，與機體的炎癥、氧化應激反應等密切關聯。目前已有較多報道指出，炎癥性腸病患者血清SIRT1明顯較低，在該病的發生、發展中起關鍵作用[3，4]。有研究發現，潰瘍性結腸炎患者腸道黏膜活檢組織中SIRT1 mRNA及蛋白表達明顯降低[5]。但上述研究多集中于成人，對其在新生兒炎癥性腸病中的相關研究較少。因此，本研究檢測了NEC患兒血清SIRT1水平變化，并分析其診斷價值，旨在為NEC的診斷提供新的檢測指標。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇湘南學院附屬醫院2017年1月～2018年7月收治的60例NEC患兒(觀察組)，男34例、女26例，胎齡(38.25±1.82)周，出生體質量(2 985.45±371.23)g，發病時間為出生后(7.44±2.30)d，疾病臨床分期Ⅰ期22例、Ⅱ期28例、Ⅲ期10例。納入標準：①符合NEC診斷標準[6]；②NEC臨床分期Ⅰ～Ⅲ期；③發病時間為出生后2 h～36 d。排除標準：①合并先天性消化道畸形；②合并腹瀉、中毒性巨結腸等消化系統疾病；③合并其他感染性、傳染性疾病。選擇同期于本院分娩的50例健康新生兒(對照組)，男27例、女23例，胎齡(38.69±1.88)周，出生體質量(3 013.39±331.71)g，排除合并休克、遺傳性代謝疾病、全身炎癥反應綜合征、敗血癥、消化系統疾病、感染性疾病等。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，兩組性別、胎齡、體質量具有可比性。受試對象均為足月兒，患兒監護人均簽署研究知情同意書。

1.2 血清SIRT1檢測方法 入組后空腹狀態下取頭皮或上肢靜脈血2 mL，置于血培養瓶中；靜置于室溫下2 h后，置入離心管中；以2 000 r/min離心10 min，提取上層血清液并移入EP管，-90 ℃冰箱中儲存待檢。采用ELISA法檢測血清SIRT1，試劑盒購于南京建成生物工程研究所，嚴格按說明書操作。

2 結果

2.1 兩組血清SIRT1水平比較 觀察組血清SIRT1水平為(6.58±1.37)ng/mL，低于對照組的(11.06±1.82)ng/mL(P<0.05)。

2.2 觀察組不同分期患兒血清SIRT1水平比較 觀察組Ⅰ～Ⅲ期患兒血清SIRT1分別為(9.48±1.52)、(7.25±1.49)、(4.05±1.17)ng/mL，各期間兩兩比較差異有統計學意義(P均<0.05)。

2.3 血清SIRT1對NEC的診斷價值 ROC曲線分析結果顯示，血清SIRT1診斷NEC的曲線下面積(AUC)為0.965，標準誤為0.007，95%CI為0.945～0.991，P<0.05。其對NEC的最佳診斷截斷值為9.84 ng/mL，對應的敏感度、特異度分別為94.70%、89.50%。

3 討論

NEC是新生兒科中較為常見的一種消化系統疾病，研究認為其發病與新生兒缺氧、感染或喂養不當等有關。該病好發于早產兒，多數在出生后2周內發病，足月兒可在1周內發病。疾病初期可有胃潴留增加、腹脹、嘔吐等消化系統癥狀，或出現呼吸暫停、呼吸窘迫、體溫不穩定、嗜睡等全身癥狀；隨著疾病進展可出現大便性狀改變、血便等，嚴重者可導致呼吸衰竭、休克，甚至死亡。臨床上對NEC的診斷主要依靠臨床癥狀體征、腹部X線片以及醫生的臨床經驗，但該病無典型臨床癥狀，易與急性腸炎、腸疊套等疾病混淆，有一定的誤診、漏診率[7，8]。因此，如何早期診斷、評估病情并給予積極治療，對于改善NEC患兒的預后極為重要。

炎癥因子的大量分泌以及氧化應激反應是腸道炎癥疾病發生的關鍵因素。SIRT是一種依賴于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的去乙酰化酶，具有維持穩態和細胞生存的作用；其中，SIRT1是第3類組蛋白去乙酰化酶Sirtuin蛋白家族的成員，是細胞核中研究最多的一種乙酰化酶。有研究認為，其對損傷反應的轉錄因子和p53具有負性調節作用，能促使細胞在壓力中得以生存，具有重要的抗炎、抗氧化應激、抗衰老等特征[9，10]。有大量研究表明，SIRT1在慢性炎癥損傷過程中具有保護作用[11，12]。Tang等[13]報道，在機體缺血、缺氧等應激狀態下，給予SIRT1激動劑預處理，可緩解腦、心臟、腎臟等組織器官的損傷；并且，增加SIRT1表達可抑制Caspase-3表達，減少心肌細胞凋亡，對心肌細胞具有保護作用。Hansen等[14]研究顯示，SIRT1可降低小鼠結腸炎模型血清白細胞介素(IL)-6、IL-1β等炎癥因子的表達，以緩解炎癥刺激對腸道黏膜的損傷。有研究發現，SIRT1的抗炎、抗氧化機制主要是通過去乙酰化在核因子(NF)-κB亞單位RelA/p65中發揮作用，進而抑制NF-κB與核內炎癥基因的相互結合而實現的[15]。

本研究結果顯示，NEC患兒血清SIRT1水平降低，且隨疾病的進展持續降低。這是由于隨著疾病的加重，腸上皮黏膜屏障不斷被破壞，造成機體產生大量炎癥因子、氧化反應等，進一步破壞上皮屏障穩定性，刺激NF-κB活化，減少SIRT1的表達；此外，我們進一步研究分析發現，血清SIRT1診斷NEC患兒的AUC為0.965，敏感度、特異度分別為94.70%、89.50%，顯示出血清SIRT1在診斷NEC患兒中具有較高的應用價值。但是，本研究未納入合并消化系統疾病、感染性疾病的患兒，對于血清SIRT1是否有助于炎癥性腸病的鑒別診斷等仍需進一步深入研究。

綜上所述，NEC患兒血清SIRT1處于低水平，且隨著疾病的進展而持續降低；血清SIRT1在早期診斷NEC中具有較高的敏感度和特異度，具有一定的臨床診斷和病情判斷價值。