孕婦脊髓性肌萎縮癥攜帶率篩查及產前診斷意義研究

廣東省江門市新會區司前人民醫院（529159）李妍

脊髓性肌萎縮癥（SMA）作為臨床中較為常見的運動神經元遺傳性疾病，其是嬰幼兒階段中最為常見的疾病，發病率約為1/6000～1/11000，攜帶率為1/38～1/70[1][2]。本研究以江門區作為觀察對象，利用江門市婦幼保健院在江門地區最大孕婦產檢量這一獨特的優勢，分析了先進技術對孕婦SMA篩查率和產前診斷的價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究于2017年1月～2018年12月選取江門地區8431名孕婦作為調查對象，采用熒光定量PCR方法對脊髓性肌萎縮癥（Spinal muscular atrophy，SMA）攜帶率進行篩查，并采用第二代高通量測序技術（NGS）結合第三代測序方法，對SMNI第7外顯子缺失區域和斷裂點進行分析。所有孕婦的年齡范圍為23歲～45歲，平均年齡范圍（27.35±2.14）歲。經江門市婦幼保健院、司前人民醫院倫理委員會批準，并與患者簽署知情同意書后進行外周血樣采集。

1.2 方法 在展開研究的過程中，首先對DNA進行提取，采用的方法是血液標本采集，樣本量為3mL。在血樣采集的過程中，采用由上海生工生物技術有限公司提供的全血DNA提取試劑盒（Universal Genomic DNA Extaction Kit Ver.3.0）提取DNA。與此同時，采用分光光度計對提取的DNA濃度進行檢測。在研究的過程中，將DNA濃度統一為50μg/μL，并將其放置在溫度為4℃的環境下進行保存有備使用。

篩查結束后，建立江門地區孕婦SMA攜帶者人群庫，并利用由美國llumina公司提供的二代測序儀以及由Sequel該公司提供的三代測序平臺，對全基因組進行測序和數據分析，以對該地區SMA的攜帶情況等進行整理和分析。

1.3 觀察指標 觀察指標為SMA攜帶率以及SMNI外顯因子的缺失情況。

1.4 統計學處理 采用SPSS19.0軟件，對攜帶率等計數資料進行統計，并采用（%）表示。

2 結果

8431名孕婦中，SMA攜帶者190例，攜帶率為2.25%。其中，83名孕婦存在SMNI第7外顯子缺失，占比為43.68%。51名孕婦存在第8外顯子缺失，占比為26.84%。SMNI第7外顯子缺失中，純合缺失攜帶者26例，占比為31.33%，雜合缺失攜帶者57例，占比為68.67%。對7對SAM攜帶者夫婦進行產前診斷，避免2例SAM患兒出生。

3 討論

現階段，我國是SMA發病率最高的國家之一，其攜帶者已高達3000萬人。也就是說，目前SMA是一種世界性的常見常染色體隱性遺傳神經肌肉疾病之一，其也是影響嬰幼兒生存的關鍵[3]。在孕期對孕婦SMA攜帶情況進行篩查，屬于一級預防，其不僅能夠避免SMA患兒的出生，而且還能夠提高我國新生兒的人口質量。除此之外，在對SMA患兒展開治療的過程中，其每年的治療費用高達75萬美元左右，因而采用先進的技術，對孕婦SMA攜帶率進行篩查，以預防SMA患兒的出生，也是一種經濟且有效的SMA防治方法，進而對減輕家庭的經濟負擔和社會的負擔均有較好的價值。本研究依托江門地區作為篩查對象，并結合所擁有的資源，對SMA篩查率進行篩查，以對該地區孕婦SMA攜帶率情況進行分析，進而為預防該地區SMA患者的出生以及提高該地區人口質量提供參考和依據。

在本研究中，本研究采用熒光定量PCR法對其進行篩查，結果顯示，8431名孕婦中，SMA攜帶者190例，攜帶率為2.25%。其中，83名孕婦存在SMN1第7外顯子缺失，占比為43.68%。51名孕婦存在第8外顯子缺失，占比為26.84%。SMN1第7外顯子缺失中，純合缺失攜帶者26例，占比為31.33%，雜合缺失攜帶者57例，占比為68.67%。對7對SAM攜帶者夫婦進行產前診斷，避免2例SAM患兒出生。上述研究結果說明，江門地區SMA攜帶者占有一定的比重，主要以SMN1第7外顯子和第8外顯子缺失為主。SMN1基因是SMA致病的主要基因，現階段全國關于孕婦SMA攜帶率的篩查已經給予了一定的關注和重視，但現有文獻關于SMA攜帶率篩查及其發病機制的研究還比較少。SMA是一組脊髓前角細胞變性，進而導致以肌萎縮、對稱性肌無力作為主要特征的常染色體隱性遺傳的神經肌肉病，其主要表現為肌張力低、肌肉萎縮以及腱反射減弱[4]。嬰幼兒期中，SMA是常見的致死性常染色體隱性遺傳病之一，依據病情嚴重程度以及發病的年齡可將SMA分為四型，其中約有80%以上的患兒均為I或II型。SMA主要對SMA的神經肌肉表型、相關脊髓前角細胞缺失等進行了描述。SMN1基因是主要致病基因，其主要有9個外顯因子。SMN1基因的全長為28072bp，其編碼在主要是由294個氨基酸RNA結合蛋白構成。SMN1基因中內含子6和內含子7以及外顯子7和外顯子8。據相關報道顯示，SMN1基因純合缺失是導致SMA的主要致病因，約有94%的患者呈現出這一基因缺失。這一研究結果與本研究一致[5]。

近年來，SMN1外顯子7缺失呈現增長的趨勢，其對人們的身體健康和生命安全均產生了嚴重的威脅，國外研究學者在研究的過程中早就建議在普通人群中篩查SMA，我國是近幾年才開始給予關注和重視的。目前，我國采用的篩查技術主要是以多重PCR-DHPLC分析方法雖然具有一定的優勢，但也存在一定的不足，如對于少數人群中攜帶SMN12+0型的患者還無法進行確定，因而這一技術在應用的過程中存在一定的不足。第二代高通量測序技術以及第三代測序技術結合應用于大樣本篩查中，其不僅具有高敏感性以及高通量和高自動化的優勢，因而比較適合大樣本的篩查。與此同時，這一技術在降低篩查成本以及提高篩查速度方面也有較好的價值。第三代測序技術的出現，具有長度長、單分子優勢，可以檢測基因組區域結構變異、重復區域、區分真假基因，因而采用先進的技術具有更加快捷和準確的優勢，對于提高產前診斷的準確性和可靠性更具優勢，因而值得推廣和應用。

綜上所述，PCR、第二代高通量測序以及第三代測序技術（TGS）應用于孕婦SMA篩查和產前診斷中，對于預防SMA患兒出生以及提高江門出生人口質量有重要的價值和意義，應予以重視。現階段，本研究雖然取得了一定的成果，但關于SMA致病基因SMN1基因缺失，尤其是第7外顯子的缺失區域和斷裂點的研究還未取得成果。因此，在數據庫完善的基礎上，未來在研究的過程中還應對SMN1第7外顯子的缺失域和斷裂點還有待進一步的研究，這也是本研究在現有研究結果基礎上的重點研究方向。