對血型血清學檢查中疑難血型進行判斷及處理的方法

戰振宇，李曉陽

（吉林通化市第二人民醫院 檢驗科，吉林 通化）

0 引言

ABO 血型系統是最早的血型系統，發現時間早于1900年，是對臨床輸血有重要意義的血型系統。在ABO 血型檢測中，常受多種因素干擾，使判斷和處理變得復雜化和不合理化，影響臨床輸血的安全，而一般干擾因素限于年齡、性別、遺傳或者疾病類型和治療方式方法等，以至于顯示出血型正反定型不一致的情況。正確的血型鑒定不僅是保證輸血安全性的前提，也是避免出現錯誤血型定型導致溶血性輸血異常反應，造成受血者生命安全受到威脅的關鍵[1-2]。血型是一個龐大而復雜的系統，也正因為血型定型和檢查的復雜性，從而加大了判斷和處理的難度，因此需要不斷找尋和更新血型判斷和處理方法，持續保證臨床輸血的安全性。本次研究主要探究血型血清學檢查中疑難血型進行判斷及處理的方法，依據疑難血型（ABO）產生原因整理分析正確有效的疑難血型鑒別和處理方法，保證血型鑒別準確性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

經過倫理委員會批準，同意抽取我院55 例疑難血型標本進行研究調查，研究時間為2018 年10 月至2019 年11 月。其中男25 例，女30 例，年齡在23～56 歲，平均（41.84±4.59）歲，其中疑難血型標本中存在的疾病類型或健康者科室種類包括5 例健康體檢者、4 例孕產婦、2 例肺癌患者、2 例甲狀腺功能亢進患者、6 例外科手術患者、7 例自身免疫性溶血性貧血患、12 例白血病患者、13 例胃腸道惡性腫瘤患者、4 例多發性骨髓瘤患者。

1.2 儀器與試劑

檢查與鑒別儀器與試劑包括ABO、RhD 血型定型檢測卡（長春博迅生物試劑有限公司生產）；抗人球蛋白檢測卡（長春博迅生物試劑有限公司生產—用于抗人球蛋白交叉配血）；抗人球蛋白檢測卡（長春博迅生物試劑有限公司—用于不規則抗體篩查）；血型血清學用離心機（長春博迅生物試劑有限公司）；免疫微柱孵育器（長春博迅生物試劑有限公司）；單克隆抗A、抗B 血型定型試劑（長春博訊生物醫藥有限責任公司）等[3-4]。

1.3 標本

所有采集標本均為無凝塊、無溶血的ED-TA-K2抗凝血（輸血前72 h 內抽取）。

1.4 方法

1.4.1 定型前準備

首先嚴格核對采集標本的標簽，仔細核查試劑最佳使用期和保質期（杜絕使用過期試劑），復檢ABO 血型。了解采集標本患者的身份、疾病史（輸血史、家族史等）、過敏史、病程、臨床診斷及治療情況；排除判斷和處理方法不當或試劑操作手法等影響ABO 血型定型的不確定因素。

1.4.2 規范化采集血樣

二次采集血液樣本（規范化），凝膠卡采用不同批號區分，包括反定紅細胞。二次檢測疑難血型（ABO 血型）正反定型。

1.4.3 實驗步驟

采用ABO、RhD 血型定型檢測卡（長春博迅生物試劑有限公司生產），同時標注好序號。將血型標本離心后，取紅細胞懸液0.8%（壓積紅細胞片配成）；依次加入凝膠卡（各50 μL）第1～4 孔中；待檢者血漿（各50 μL）加入第5～6 孔中；將反定A1、B 型紅細胞配制成0.8%的濃度，依次加入（各50 μL）第5～6 孔中。采用血型血清學用離心機（長春博迅生物試劑有限公司—用于離心血型標本）離心5 min，速度依次為2 min，900 r/min 和3 min，1500 r/min。離心后取出卡片判定結果（肉眼判讀）。

1.4.4 結果判讀標準

陽性：血型標本離心后，紅細胞抗原和血清抗體形成的抗原抗體復合物，在微柱凝膠表面有浮現或少許復合物懸浮在膠中。

陰性：被檢紅細胞抗原沒有相應抗體可以結合，未顯現出特異性復合物（抗原和抗體結合物），凝膠微孔可通過紅細胞（被檢的單個紅細胞），沉于凝膠底部[5-6]。

2 結果判讀及分析處理

24 例血型標本的血清抗體水平下降、10 例紅細胞抗原減弱、4 例冷凝集素、4 例人為因素、4 例血漿因素、7 例不規則抗體、1 例亞型、1 例弱D 血型。

2.1 血清抗體水平下降、冷凝集素

離心后，凝膠中懸浮狀態呈分散狀或沉于底部（反定型實驗中的紅細胞）。處理方法：增加血漿用量；延長反應時間，將凝膠卡在室溫下放置15 min 后再離心。

冷凝集素呈陽性或弱陽性。處理方法：將凝膠卡在37 ℃的免疫微柱孵育器放置15 min 后，離心后若正反定型相符則為冷凝集素。

2.2 紅細胞抗原減弱、不規則抗體

離心后，正定型實驗中的紅細胞分散在凝膠中間，逐漸趨于底部（抗原變弱）。處理方法：增加紅細胞懸液濃度。

反定型實驗微柱凝膠卡均呈陽性或弱陽性。處理方法：將凝膠卡在37 ℃的免疫微柱孵育器放置15 min 后，排除冷凝集素后再行不規則抗體檢查。

2.3 血漿因素、人為因素、弱D 血型、亞型

異常免疫球蛋白可造成正反定型實驗凝膠卡均呈陽性或弱陽性。處理方法：采用生理鹽水洗滌三遍，再配制成紅細胞懸液進行實驗。

配制紅細胞濃度不合適；標本放置時間過久被細菌污染。處理方法：按照操作程序重新進行實驗。

凝膠卡第3 孔（抗D）瀑布狀分布于凝膠中（紅細胞）。處理方法：依照《全國臨床檢驗技術規范》中的方法進行確認。

正定型實驗中，分散于凝膠中間（紅細胞），或呈拖尾狀或呈混合外觀。處理方法：依照《全國臨床檢驗技術規范》中的方法再行確認。

3 討論

本次研究的55 例血型標本中，存在例數最多的是由于血清抗體水平下降造成的，而此類標本中，有超過半數的都是50 歲以上的老年人（老年人免疫力下降、抗體減弱）。在鑒定老年病例時，可加大血清量，保持4 ℃以下的溫度保存抗原抗體，或者延長其反應時間等來保證血型正反定型的一致性。疑難血型（ABO 血型）是復雜的血型系統，本次研究檢測的結果顯示，55 例血型標本（ABO），經過正確定型試驗操作可得，24 例血型標本的血清抗體水平下降、10 例紅細胞抗原減弱、4 例冷凝集素、4 例人為因素、4 例血漿因素、7 例不規則抗體、1 例亞型、1 例弱D 血型[7-8]。而影響ABO 血型鑒定的因素有很多，但是血型鑒定是臨床輸血的基礎和關鍵，也是患者的基本保證，因此血型鑒定是臨床中非常重要的臨床診斷基礎，如何有效避免血型鑒定干擾因素影響，提高血型鑒定準確性和可靠性是臨床界一直探究和關注的話題。保證臨床輸血安全性的首要條件就是正確鑒定紅細胞血型，減少個體差異影響和相關疾病或年齡、免疫力影響等因素的干擾，盡力規范血型鑒定操作方法，避免造成正反定型差異。綜上所述，微柱凝膠技術檢查血型血清的結果更加具有特異性和直觀性、清晰性，能將常規儀器和試劑檢查未發現的問題清楚展示出來，并結合正確有效的處理方法鑒定疑難血型，找出合理分析方法，使復定血型操作變得規范化，以保證臨床輸血的安全性和可靠性，具有一定的臨床價值。